BD، 558456، معيار BD™ لقياس التدفق الخلوي (CBA) للإنترفيرون غاما البشري

التحضير والتخزين: يُحفظ المعيار المجفف بالتجميد عند درجة حرارة 4 درجات مئوية قبل إعادة تكوينه. تُعادل الكريات المجففة بالتجميد من قارورة واحدة من معيار إنترفيرون غاما البشري، عند إعادة تكوينها في 4.0 مل من مخفف الفحص، تقريبًا نشاط اختبار CBA لإنترفيرون غاما البشري بتركيز 2500 بيكوغرام/مل. بعد إعادة التكوين، يُحفظ إنترفيرون غاما البشري عند درجة حرارة 4 درجات مئوية ويُستخدم خلال 12 ساعة. يجب التخلص من أي معيار مُعاد تكوينه غير مستخدم بعد هذه المدة (لا يُخزن أو يُعاد استخدامه).
إجراءات التحليل الموصى بها: تم اختبار معيار الإنترفيرون غاما البشري للتأكد من فعاليته كمعيار عند استخدامه مع مصفوفة الخرزات الخلوية BD™ (CBA). يُنصح الباحثون بالرجوع إلى ورقة البيانات الفنية لمجموعة BD™ CBA Human IFN-γ Flex Set (رقم المنتج 558269) أو مجموعة BD™ CBA Human IFN-γ Enhanced Sensitivity Flex Set (رقم المنتج 561515). معيار الإنترفيرون غاما البشري مُجفف بالتجميد، ويجب إعادة تكوينه وتخفيفه بشكل متسلسل قبل مزجه مع خرزات الالتقاط CBA وكواشف الكشف PE. تجدون أدناه تعليمات مختصرة (بروتوكول تحضير معيار الإنترفيرون غاما البشري). يُعاد تكوين معيار الإنترفيرون غاما البشري باستخدام مُخفف المعايرة، المُرفق مع مجموعة BD™ CBA Human Soluble Protein Master Buffer Kit (رقم المنتج 558264 أو 558265)، أو مجموعة BD™ CBA Human Enhanced Sensitivity Master Buffer Kit (رقم المنتج 561521 أو 561523)، أو يُمكن شراؤه بشكل منفصل (رقم المنتج 560104). تحضير معيار الإنترفيرون غاما البشري للاستخدام مع مجموعة BD™ CBA Human IFN-γ Flex Set (رقم المنتج 558269): 1. افتح قارورة واحدة من معيار الإنترفيرون غاما البشري المُجفف بالتجميد. انقل الكريات المُجففة بالتجميد إلى أنبوب بولي بروبيلين (BD Falcon™، رقم المنتج 352097). ضع ملصق "المعيار العلوي" على الأنبوب. ٢. أعد تكوين المحلول القياسي بإضافة ٤.٠ مل من مخفف المعايرة. اترك المحلول القياسي المُعاد تكوينه ليتوازن لمدة ١٥ دقيقة على الأقل قبل إجراء التخفيفات. امزج البروتين المُعاد تكوينه باستخدام الماصة فقط. تجنب الخلط بقوة أو استخدام جهاز الخلط الدوامي. ٣. ضع علامات على ١٢ أنبوبًا إضافيًا (BD Falcon™، رقم المنتج ٣٥٢٠٠٨) بحجم ٧٥ مم، ورتبها بالترتيب التالي: المحلول القياسي، ١:٢، ١:٤، ١:٨، ١:١٦، ١:٣٢، ١:٦٤، ١:١٢٨، و١:٢٥٦. ٤. أضف ٥٠٠ ميكرولتر من مخفف المعايرة إلى كل أنبوب من أنابيب التخفيف. ٥. قم بإجراء تخفيف متسلسل بنقل ٥٠٠ ميكرولتر من المحلول القياسي إلى أنبوب التخفيف ١:٢، وامزج جيدًا. تجنب الخلط باستخدام الماصة فقط. استمر في إجراء التخفيفات المتسلسلة بنقل 500 ميكرولتر من الأنبوب ذي التخفيف 1:2 إلى الأنبوب ذي التخفيف 1:4، وهكذا حتى الأنبوب ذي التخفيف 1:256، مع المزج جيدًا. جهّز أنبوبًا واحدًا يحتوي على مخفف الفحص فقط ليكون بمثابة عينة التحكم السلبية بتركيز 0 بيكوغرام/مل. تحضير معيار إنترفيرون غاما البشري للاستخدام مع مجموعة BD™ CBA Human IFN-γ Enhanced Sensitivity Flex Set (رقم المنتج 561515): 1. افتح قارورة واحدة من معيار إنترفيرون غاما البشري المجفف بالتجميد. انقل الكريات المجففة بالتجميد إلى أنبوب بولي بروبيلين (BD Falcon™، رقم المنتج 352097). 2. أعد تكوين المعيار بإضافة 4.0 مل من مخفف الفحص. اترك المعيار المُعاد تكوينه ليتوازن لمدة 15 دقيقة على الأقل قبل إجراء التخفيفات. امزج البروتين المُعاد تكوينه باستخدام الماصة فقط. لا تقم بالرج أو الخلط بقوة. 3. ضع علامات على 12 أنبوبًا إضافيًا بحجم 75 مم (BD Falcon™، رقم المنتج 352008) ورتبها بالترتيب التالي: المعيار الأعلى، 1:3، 1:9، 1:27، 1:81، 1:243، و1:729. 4. أضف 460 ميكرولتر من مخفف المعايرة إلى أنبوب المعيار الأعلى. 5. أضف 400 ميكرولتر من مخفف المعايرة إلى كل أنبوب من أنابيب التخفيف المتبقية. 6. انقل 40 ميكرولتر من المعيار المُعاد تكوينه إلى أنبوب المعيار الأعلى. اخلط باستخدام ماصة أو بالرج الخفيف لمدة لا تزيد عن 3 ثوانٍ. 7. قم بإجراء تخفيف متسلسل بنقل 200 ميكرولتر من المعيار الأعلى إلى أنبوب التخفيف 1:3 واخلط جيدًا. لا تقم بالرج، اخلط باستخدام ماصة فقط. استمر في إجراء التخفيفات المتسلسلة بنقل 200 ميكرولتر من الأنبوب ذي التخفيف 1:3 إلى الأنبوب ذي التخفيف 1:9، وهكذا حتى الأنبوب ذي التخفيف 1:729، مع المزج جيدًا. جهّز أنبوبًا واحدًا يحتوي على مخفف المعايرة فقط ليكون بمثابة عينة التحكم السلبية بتركيز 0 فيمتوغرام/مل.
إشعارات المنتج: ProClin هي علامة تجارية لشركة Rohm and Haas. مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية في الولايات المتحدة. يُرجى مراجعة www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية. تحذير: يحتوي معيار CBA المجفف بالتجميد على 0.02% (وزن/وزن)، ويحتوي كاشف الكشف (الجزء أ) على 0.002% (وزن/وزن) من خليط CMIT/MIT (3:1)، وهو خليط من: 5-كلورو-2-ميثيل-4-أيزوثيازولين-3-ون [رقم EC 247-500-7] و2-ميثيل-4-أيزوثيازولين-3-ون [رقم EC 220-239-6] (3:1). بيان المخاطر: قد يُسبب رد فعل تحسسي جلدي. بيانات الاحتياطات: لا يُسمح بإخراج ملابس العمل الملوثة من مكان العمل. ارتدِ قفازات واقية/واقي للعينين/واقي للوجه. ارتدِ ملابس واقية. تجنب استنشاق الرذاذ/الأبخرة/البخاخ. في حال حدوث تهيج أو طفح جلدي: استشر طبيباً. في حال ملامسة الجلد: اغسل جيداً بالماء. انزع الملابس الملوثة واغسلها قبل إعادة استخدامها. تخلص من المحتويات/العبوة وفقاً للوائح المحلية/الإقليمية/الوطنية/الدولية.