BD، 558472، معيار BD™ لخرزات قياس التدفق الخلوي (CBA) لعامل نخر الورم البشري

التحضير والتخزين: يُحفظ المعيار المجفف بالتجميد عند درجة حرارة 4 درجات مئوية قبل إعادة تكوينه. تُقارب الكريات المجففة بالتجميد من قارورة واحدة من معيار TNF البشري، عند إعادة تكوينها في 4.0 مل من مخفف الفحص، نشاط CBA لـ TNF البشري بتركيز 2500 بيكوغرام/مل. بعد إعادة التكوين، يُحفظ TNF البشري عند درجة حرارة 4 درجات مئوية ويُستخدم خلال 12 ساعة. يجب التخلص من أي معيار مُعاد تكوينه غير مستخدم بعد هذه المدة (لا يُخزن أو يُعاد استخدامه).
إجراءات التحليل الموصى بها: تم اختبار معيار TNF البشري لضمان عمله كمعيار عند استخدامه مع مصفوفة الخرز الخلوية BD™ (CBA). يُنصح الباحثون بالرجوع إلى ورقة البيانات الفنية لمجموعة BD™ CBA Human TNF Flex (رقم المنتج 560112 أو 558273) أو مجموعة BD™ CBA Human TNF Enhanced Sensitivity Flex (رقم المنتج 561516). معيار TNF البشري مُجفف بالتجميد، ويجب إعادة تكوينه وتخفيفه بشكل متسلسل قبل مزجه مع خرزات التقاط CBA وكواشف الكشف PE. تجدون أدناه تعليمات مختصرة (بروتوكول تحضير معيار TNF البشري). يُعاد تكوين معيار TNF البشري باستخدام مُخفف المعايرة، المُرفق مع مجموعة BD™ CBA Human Soluble Protein Master Buffer Kit (رقم المنتج 558264 أو 558265)، أو مجموعة BD™ CBA Human Enhanced Sensitivity Master Buffer Kit (رقم المنتج 561521 أو 561523)، أو يُمكن شراؤه بشكل منفصل (رقم المنتج 560104). تحضير معيار TNF البشري للاستخدام مع مجموعة BD™ CBA Human TNF Flex Set (رقم المنتج 560112 أو 558273): 1. افتح قارورة واحدة من معيار TNF البشري المُجفف بالتجميد. انقل الكريات المُجففة إلى أنبوب بولي بروبيلين (BD Falcon™، رقم المنتج 352097). ضع ملصق "المعيار العلوي" على الأنبوب. 2. أعد تكوين المعيار بإضافة 4.0 مل من مُخفف المعايرة. اترك المحلول القياسي المُعاد تكوينه ليستقر لمدة 15 دقيقة على الأقل قبل إجراء التخفيفات. امزج البروتين المُعاد تكوينه باستخدام الماصة فقط. تجنب الخلط بقوة أو استخدام جهاز الخلط الدوامي. 3. ضع علامات على 12 أنبوبًا إضافيًا بحجم 75 مم (BD Falcon™، رقم المنتج 352008) ورتبها بالترتيب التالي: المحلول القياسي، 1:2، 1:4، 1:8، 1:16، 1:32، 1:64، 1:128، و1:256. 4. أضف 500 ميكرولتر من مخفف المعايرة إلى كل أنبوب من أنابيب التخفيف. 5. قم بإجراء تخفيف متسلسل بنقل 500 ميكرولتر من المحلول القياسي إلى أنبوب التخفيف 1:2 وامزج جيدًا. تجنب الخلط باستخدام جهاز الخلط الدوامي، وامزج بالماصة فقط. استمر في إجراء التخفيفات المتسلسلة بنقل 500 ميكرولتر من الأنبوب ذي التخفيف 1:2 إلى الأنبوب ذي التخفيف 1:4، وهكذا حتى الأنبوب ذي التخفيف 1:256، مع المزج جيدًا. جهّز أنبوبًا واحدًا يحتوي على مخفف المعايرة فقط ليكون بمثابة عينة التحكم السلبية بتركيز 0 بيكوغرام/مل. تحضير معيار TNF البشري للاستخدام مع مجموعة BD™ CBA Human TNF Enhanced Sensitivity Flex Set (رقم المنتج 561516): 1. افتح قارورة واحدة من معيار TNF البشري المجفف بالتجميد. انقل الكريات المجففة بالتجميد إلى أنبوب بولي بروبيلين (BD Falcon™، رقم المنتج 352097). 2. أعد تكوين المعيار بإضافة 4.0 مل من مخفف المعايرة. اترك المعيار المُعاد تكوينه ليتوازن لمدة 15 دقيقة على الأقل قبل إجراء التخفيفات. امزج البروتين المُعاد تكوينه باستخدام الماصة فقط. تجنب الخلط بقوة أو استخدام جهاز الخلط الدوامي. ٣. ضع علامات على ١٢ أنبوبًا إضافيًا بحجم ٧٥ مم (BD Falcon™، رقم المنتج ٣٥٢٠٠٨) ورتبها بالترتيب التالي: المعيار الأعلى، ١:٣، ١:٩، ١:٢٧، ١:٨١، ١:٢٤٣، و١:٧٢٩. ٤. أضف ٤٦٠ ميكرولتر من مخفف المعايرة إلى أنبوب المعيار الأعلى. ٥. أضف ٤٠٠ ميكرولتر من مخفف المعايرة إلى كل أنبوب من أنابيب التخفيف المتبقية. ٦. انقل ٤٠ ميكرولتر من المعيار المُعاد تكوينه إلى أنبوب المعيار الأعلى. امزج باستخدام ماصة أو بالتقليب اللطيف باستخدام جهاز التقليب لمدة لا تزيد عن ٣ ثوانٍ. ٧. قم بإجراء تخفيف متسلسل عن طريق نقل ٢٠٠ ميكرولتر من المعيار الأعلى إلى أنبوب التخفيف ١:٣ وامزج جيدًا. لا تقم بالتقليب، امزج باستخدام ماصة فقط. استمر في إجراء التخفيفات المتسلسلة بنقل 200 ميكرولتر من الأنبوب ذي التخفيف 1:3 إلى الأنبوب ذي التخفيف 1:9، وهكذا حتى الأنبوب ذي التخفيف 1:729، مع المزج جيدًا. جهّز أنبوبًا واحدًا يحتوي على مخفف المعايرة فقط ليكون بمثابة عينة التحكم السلبية بتركيز 0 فيمتوغرام/مل.
إشعارات المنتج: ProClin هي علامة تجارية لشركة Rohm and Haas. مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية في الولايات المتحدة. يُرجى مراجعة www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية. تحذير: يحتوي معيار CBA المجفف بالتجميد على 0.02% (وزن/وزن)، ويحتوي كاشف الكشف (الجزء أ) على 0.002% (وزن/وزن) من خليط CMIT/MIT (3:1)، وهو خليط من: 5-كلورو-2-ميثيل-4-أيزوثيازولين-3-ون [رقم EC 247-500-7] و2-ميثيل-4-أيزوثيازولين-3-ون [رقم EC 220-239-6] (3:1). بيان المخاطر: قد يُسبب رد فعل تحسسي جلدي. بيانات الاحتياطات: لا يُسمح بإخراج ملابس العمل الملوثة من مكان العمل. ارتدِ قفازات واقية/واقي للعينين/واقي للوجه. ارتدِ ملابس واقية. تجنب استنشاق الرذاذ/الأبخرة/البخاخ. في حال حدوث تهيج أو طفح جلدي: استشر طبيباً. في حال ملامسة الجلد: اغسل جيداً بالماء. انزع الملابس الملوثة واغسلها قبل إعادة استخدامها. تخلص من المحتويات/العبوة وفقاً للوائح المحلية/الإقليمية/الوطنية/الدولية.