BD، 558536، جزيئات BD IMag™ المضادة للفئران Ter-119 - DM

التفاعل: الفأر (اختبار مراقبة الجودة)
النمط المصلي: فأر WI، المعروف أيضًا باسم ويستار (غير متجانس) IgG2b، κ
المستضد: كبد جنين الفأر
التطبيق: فصل الخلايا (يتم اختباره بشكل روتيني)
RRID: AB_647167
محلول التخزين: محلول مائي منظم يحتوي على BSA و ≤0.09% أزيد الصوديوم.
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
التحضير والتخزين: تم تنقية الجسم المضاد أحادي النسيلة من سائل مزرعة الأنسجة أو السائل الاستسقائي بواسطة كروماتوغرافيا التقارب. يُحفظ غير مخفف عند درجة حرارة 4 درجات مئوية.
إجراءات التحليل الموصى بها: يتم وسم معلق خلايا الطحال أو نخاع العظم للفأر بجزيئات BD IMag™ المضادة للفأر TER119 - DM وفقًا للبروتوكول التالي. ثم يوضع معلق الخلايا الموسوم داخل المجال المغناطيسي لجهاز BD IMagnet (رقم المنتج 552311). تهاجر الخلايا الموسومة نحو المغناطيس (الجزء الموجب)، تاركةً الخلايا غير الموسومة معلقةً ليتم جمعها (الجزء المستنفد). بعد ذلك، يُزال الأنبوب من المجال المغناطيسي ويُضاف محلول منظم إضافي لإعادة تعليق الجزء الموجب. تُوضح خطوات الفصل المغناطيسي في مخطط انسياب الفصل. يمكن تقييم كل من الجزء المستنفد والجزء الموجب في تطبيقات لاحقة مثل قياس التدفق الخلوي. بروتوكول الوسم المغناطيسي والاستنزاف: 1. تحضير محلول BD IMag™ بتركيز 1X: خفف محلول BD IMag™ (10X) (رقم المنتج 552362) بنسبة 1:10 باستخدام ماء مقطر معقم، أو حضّر محلول ملحي فوسفاتي (PBS) مُضافًا إليه 0.5% من ألبومين المصل البقري (BSA)، و2 ملي مول من EDTA، و0.1% من أزيد الصوديوم. 2. حضّر معلقًا خلويًا أحاديًا من النسيج اللمفاوي المطلوب وفقًا لإجراءات المختبر القياسية. أزل تجمعات الخلايا و/أو الحطام بتمرير المعلق عبر مصفاة خلايا من النايلون بمسام 70 ميكرومتر. عدّ الخلايا. 3. اغسل الخلايا بكمية زائدة من محلول BD IMag™ بتركيز 1X، ثم قم بالطرد المركزي واسحب السائل الطافي بعناية. ٤. رجّ جزيئات BD IMag™ المضادة للفأر TER-119 - DM جيدًا، وأضف ٥٠ ميكرولتر من الجزيئات لكل ١٠^٧ خلية. ٥. اخلط جيدًا. حضّن في الثلاجة (٨-١١ درجة مئوية، وليس على الجليد) لمدة ٣٠ دقيقة بالضبط.* ٦. اغسل الخلايا الموسومة بحجم زائد ١٠ أضعاف من محلول BD IMag™ المخفف ١X، ثم قم بالطرد المركزي عند ٣٠٠ × جم لمدة ٧ دقائق، واسحب كل السائل الطافي بعناية. ٧. ارفع حجم الوسم إلى ٢٠ إلى ٨٠ × ١٠^٦ خلية/مل باستخدام محلول BD IMag™ المخفف ١X. ٨. انقل الخلايا الموسومة إلى أنبوب اختبار ذي قاع مستدير ١٢ × ٧٥ مم (مثل BD Falcon™، رقم المنتج ٣٥٢٠٥٨)، بحيث لا يتجاوز الحجم المضاف ١.٠ مل. ضع أنبوب الجزء الموجب هذا على جهاز BD IMagnet™ (في الوضع الأفقي) لمدة 6 إلى 8 دقائق.* للحصول على حجم أكبر، انقل الخلايا إلى أنبوب اختبار ذي قاع مستدير 17 × 100 مم (مثل BD Falcon™، رقم المنتج 352057)، على ألا يتجاوز الحجم المضاف 3.0 مل. ضع أنبوب الجزء الموجب هذا على جهاز BD IMagnet™ (في الوضع الرأسي) لمدة 8 دقائق.* 9. مع بقاء الأنبوب على جهاز BD IMagnet™، وباستخدام ماصة باستور زجاجية معقمة، اسحب السائل الطافي (الجزء المستنفد) بعناية وضعه في أنبوب معقم جديد. ١٠. أخرج أنبوب الجزء الموجب من جهاز BD IMagnet™، وأضف محلول BD IMag™ بتركيز 1X إلى نفس الحجم كما في الخطوة ٧. أعد تعليق الجزء الموجب جيدًا عن طريق سحب المحلول ودفعه بالماصة من ١٠ إلى ١٥ مرة، ثم أعد الأنبوب إلى جهاز BD IMagnet™ لمدة ٦ إلى ٨ دقائق.* بالنسبة لأنبوب ١٧ × ١٠٠ مم: ضعه على جهاز BD IMagnet™ لمدة ٨ دقائق.* ١١. باستخدام ماصة باستور معقمة جديدة، اسحب السائل الطافي بحرص واخلطه مع الجزء المُخصب من الخطوة ٩ أعلاه. ١٢. كرر الخطوتين ١٠ و١١. يحتوي الجزء المُستنفد المُجمع على خلايا خالية من الأجسام المضادة أو الجسيمات المغناطيسية المرتبطة بها. ١٣. لزيادة نقاء الجزء المستنفد المجمع، ضع الأنبوب الذي يحتوي على الجزء المُخصب المجمع على جهاز BD IMagnet™ لمدة ٦ دقائق إضافية.* بالنسبة للأنبوب ١٧ × ١٠٠ مم: ضعه على جهاز BD IMagnet™ لمدة ١٠ دقائق.* ١٤. اسحب السائل الطافي بعناية وضعه في أنبوب معقم جديد. هذا هو الجزء المستنفد مرتين. الخلايا جاهزة للمعالجة في التطبيقات اللاحقة. ١٥. يمكن إعادة تعليق خلايا الجزء الموجب المتبقية في الأنبوب الأصلي في محلول منظم مناسب أو وسط زراعة للتطبيقات اللاحقة، بما في ذلك قياس التدفق الخلوي، إذا رغبت في ذلك. ١٦. يجب تحليل عينات من معلق الخلايا الكلي والأجزاء الموجبة والمستنفدة بواسطة قياس التدفق الخلوي لتقييم كفاءة إجراء فصل الخلايا. ملاحظات: نصائح لتحضير الخلايا بنجاح: بعد الغسلة الأخيرة، أعد تعليق الخلايا بتركيز عالٍ نسبيًا في محلول BD IMag™ 1X، ثم انتقل إلى الخطوة 3. يُنصح بشدة بتنفيذ الخطوة 13 لضمان معدل استنفاد أعلى. * تجنب الوسم غير النوعي بالعمل بسرعة والالتزام بأوقات الحضانة الموصى بها. تم تحسين تركيز جزيئات BD IMag™ المضادة لـ TER-119 في الفئران - DM، المُقترح في البروتوكول، لتنقية خلايا السلالة الحمراء الموجبة لـ TER-119 من خلايا الطحال. عند وسم مجموعات الخلايا المستهدفة الموجودة بترددات منخفضة، يمكن استخدام عدد أقل من جزيئات BD IMag™. في المقابل، عند وسم مجموعات الخلايا المستهدفة الموجودة بترددات أعلى، يجب استخدام عدد أكبر من الجزيئات. لتحديد التركيز الأمثل لجزيئات BD IMag™ المضادة للفأر TER-119 - DM لتطبيق معين، يوصى بإجراء معايرة بزيادات مضاعفة.
تنبيهات المنتج: تحذير: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. خفف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية تقع في الولايات المتحدة. تُحضّر جزيئات BD IMag™ من جزيئات مغناطيسية مُعدّلة وظيفيًا بمجموعة الكربوكسيل، وهي من إنتاج شركة Skold Technology ومرخصة بموجب براءة الاختراع الأمريكية رقم 7,169,618.