BD، 558605، BD Pharmingen™ Alexa Fluor® 488 مضاد بيتا-توبولين للفأر

التفاعل: الإنسان، الجرذ (اختبار مراقبة الجودة)، الفأر، الهامستر السوري، الهامستر الصيني، الأيل الهندي (تم الإبلاغ عنه)
النمط المصلي: IgM الفأري، κ
التطبيق: التصوير الحيوي (يتم اختباره بشكل روتيني)
حجم العينة لكل اختبار: 5 ميكرولتر
RRID: AB_647101
محلول التخزين: محلول مائي منظم يحتوي على BSA و ≤0.09% أزيد الصوديوم.
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
التحضير والتخزين: يُحفظ غير مخفف في درجة حرارة 4 درجات مئوية، ويُحفظ بعيدًا عن الضوء لفترات طويلة. لا يُجمد. تم تنقية الجسم المضاد أحادي النسيلة من سائل مزرعة الأنسجة أو السائل الاستسقائي باستخدام كروماتوغرافيا التقارب. تم ربط الجسم المضاد بصبغة أليكسا فلور® 488 في ظل الظروف المثلى، وتمت إزالة صبغة أليكسا فلور® 488 غير المتفاعلة.
إجراءات الفحص الموصى بها: 1. ازرع الخلايا في وسط زراعة مناسب بمعدل 10000 خلية تقريبًا لكل بئر في صفيحة تصوير BD Falcon™ ذات 96 بئرًا (رقم المنتج 353219)، واتركها طوال الليل. 2. أزل وسط الزراعة من الآبار، وثبّت الخلايا بإضافة 100 ميكرولتر من الفورمالديهايد الطازج بتركيز 3.7% في محلول ملحي فوسفاتي (PBS) أو محلول التثبيت BD Cytofix™ (رقم المنتج 554655) إلى كل بئر، ثم حضّنها لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة. 3. أزل المُثبِّت من الآبار، واجعل الخلايا نفاذة باستخدام الميثانول البارد أو Triton™ X-100. أضف 100 ميكرولتر من الميثانول بتركيز 90% عند درجة حرارة -20 درجة مئوية أو محلول BD™ Phosflow Perm Buffer III (رقم المنتج 558050) عند درجة حرارة -20 درجة مئوية إلى كل بئر، ثم حضّن لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة. أو ب. أضف 100 ميكرولتر من محلول Triton™ X-100 بتركيز 0.1% إلى كل بئر، ثم حضّن لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة. 4. أزل عامل النفاذية، واغسل الآبار مرتين باستخدام 100 ميكرولتر من محلول PBS بتركيز 1×. 5. أزل محلول PBS، ثم احجب الخلايا بإضافة 100 ميكرولتر من محلول الحجب (3% مصل بقري جنيني في محلول PBS بتركيز 1×) أو محلول BD Pharmingen™ Stain Buffer (مصل بقري جنيني) (رقم المنتج 554656) إلى كل بئر، ثم حضّن لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. ٦. أزل محلول الحجب، وخفف مُقترن الأجسام المضادة بنسبة ١:١٠ في محلول الحجب أو محلول التلوين (FBS)، ثم لوّن الخلايا بإضافة ٥٠ ميكرولتر من مُقترن الأجسام المضادة المخفف إلى كل بئر، واحضنها لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. ٧. أزل مُقترن الأجسام المضادة المخفف، واغسل الآبار ثلاث مرات بـ ١٠٠ ميكرولتر من محلول الفوسفات الملحي (PBS) بتركيز ١×. ٨. أزل محلول الفوسفات الملحي (PBS)، ولوّن النوى تلوينًا مضادًا بإضافة ١٠٠ ميكرولتر من محلول هوكست ٣٣٣٤٢ بتركيز ٢ ميكروغرام/مل (مثلًا، سيغما-ألدريتش، رقم المنتج B2261) في محلول الفوسفات الملحي (PBS) بتركيز ١× إلى كل بئر قبل ١٥ دقيقة على الأقل من التصوير. ٩. اعرض الخلايا وحللها باستخدام جهاز تصوير مناسب.
إشعارات المنتج: يُرجى الرجوع إلى www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية. تم تخفيف هذا الكاشف مسبقًا للاستخدام بالحجم الموصى به لكل اختبار عند اتباع إجراء الفحص الموصى به. يتكون الاختبار عادةً من حوالي 10000 خلية مزروعة في بئر من صفيحة تصوير ذات 96 بئرًا. تُباع مُقترنات الأجسام المضادة لصبغات Alexa Fluor® و Pacific Blue™ و Cascade Blue® في هذا المنتج بموجب ترخيص من شركة Molecular Probes, Inc. للاستخدام البحثي فقط، باستثناء استخدامها مع المصفوفات الدقيقة، أو ككواشف خاصة بالمادة المُحللة. صبغات Alexa Fluor® (باستثناء Alexa Fluor® 430) وصبغة Pacific Blue™ وصبغة Cascade Blue® محمية ببراءات اختراع قيد الانتظار وصادرة. يتم جمع انبعاث الفلوركروم Alexa Fluor® 488 بنفس إعدادات الجهاز المستخدمة مع إيزوثيوسيانات الفلورسين (FITC). Alexa Fluor® علامة تجارية مسجلة لشركة Molecular Probes, Inc.، يوجين، أوريغون. مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية في الولايات المتحدة. تنبيه: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. خفف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. للاطلاع على أطياف الفلوركروم وإعدادات الجهاز المناسبة، يرجى زيارة صفحة قياس التدفق الخلوي متعدد الألوان على موقعنا الإلكتروني www.bdbiosciences.com/colors. Triton علامة تجارية لشركة Dow Chemical Company.