BD، 558609، BD Pharmingen™ Alexa Fluor® 647 Rat anti-Histone H3 (pS28)

التفاعل: الإنسان (اختبار مراقبة الجودة)، الفأر، الجرذ، البقرة، الذبابة (تم الإبلاغ عنها)
النمط المصلي: IgG2a، κ للفئران
المستضد: ببتيد الهيستون H3 البشري المفسفر
التطبيق: التصوير الحيوي (يتم اختباره بشكل روتيني)
حجم العينة لكل اختبار: 5 ميكرولتر
RRID: AB_1645451
محلول التخزين: محلول مائي منظم يحتوي على BSA و ≤0.09% أزيد الصوديوم.
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
التحضير والتخزين: يُحفظ غير مخفف في درجة حرارة 4 درجات مئوية، ويُحفظ بعيدًا عن الضوء لفترات طويلة. لا يُجمد. تم تنقية الجسم المضاد أحادي النسيلة من سائل مزرعة الأنسجة أو السائل الاستسقائي باستخدام كروماتوغرافيا التقارب. تم ربط الجسم المضاد بصبغة أليكسا فلور® 647 في ظل الظروف المثلى، وتمت إزالة صبغة أليكسا فلور® 647 غير المتفاعلة.
إجراءات الفحص الموصى بها: 1. ازرع الخلايا في وسط زراعة مناسب بمعدل 10000 خلية تقريبًا لكل بئر في صفيحة تصوير BD Falcon™ ذات 96 بئرًا (رقم المنتج 353219)، واتركها طوال الليل. 2. أزل وسط الزراعة من الآبار، وثبّت الخلايا بإضافة 100 ميكرولتر من الفورمالديهايد الطازج بتركيز 3.7% في محلول ملحي فوسفاتي (PBS) أو محلول التثبيت BD Cytofix™ (رقم المنتج 554655) إلى كل بئر، ثم حضّنها لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة. 3. أزل المُثبِّت من الآبار، واجعل الخلايا نفاذة باستخدام الميثانول البارد أو Triton™ X-100. أضف 100 ميكرولتر من ميثانول 90% عند درجة حرارة -20 درجة مئوية أو محلول BD™ Phosflow Perm Buffer III (رقم المنتج 558050) عند درجة حرارة -20 درجة مئوية إلى كل بئر، ثم حضّن لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة. أو ب. أضف 100 ميكرولتر من محلول Triton™ X-100 بتركيز 0.1% إلى كل بئر، ثم حضّن لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة. Triton علامة تجارية مسجلة لشركة داو كيميكال. 4. أزل عامل النفاذية، واغسل الآبار مرتين بـ 100 ميكرولتر من محلول PBS بتركيز 1×. 5. أزل محلول PBS، ثم احجب الخلايا بإضافة 100 ميكرولتر من محلول الحجب (3% مصل بقري جنيني في محلول PBS بتركيز 1×) أو محلول BD Pharmingen™ Stain Buffer (مصل بقري جنيني) (رقم المنتج 554656) إلى كل بئر، ثم حضّن لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. ٦. أزل محلول الحجب، وخفف مُقترن الأجسام المضادة بنسبة ١:١٠ في محلول الحجب أو محلول التلوين (FBS)، ثم لوّن الخلايا بإضافة ٥٠ ميكرولتر من مُقترن الأجسام المضادة المخفف إلى كل بئر، واحضنها لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. ٧. أزل مُقترن الأجسام المضادة المخفف، واغسل الآبار ثلاث مرات بـ ١٠٠ ميكرولتر من محلول الفوسفات الملحي (PBS) بتركيز ١×. ٨. أزل محلول الفوسفات الملحي (PBS)، ولوّن النوى تلوينًا مضادًا بإضافة ١٠٠ ميكرولتر من محلول هوكست ٣٣٣٤٢ بتركيز ٢ ميكروغرام/مل (مثلًا، سيغما-ألدريتش، رقم المنتج B2261) في محلول الفوسفات الملحي (PBS) بتركيز ١× إلى كل بئر قبل ١٥ دقيقة على الأقل من التصوير. ٩. اعرض الخلايا وحللها باستخدام جهاز تصوير مناسب.
ملاحظات المنتج: تم تخفيف هذا الكاشف مسبقًا للاستخدام بالحجم الموصى به لكل اختبار. نستخدم عادةً 1 × 10^6 خلية في عينة تجريبية بحجم 100 ميكرولتر (اختبار). يُباع هذا المنتج بموجب ترخيص من معهد شيغي للأبحاث الطبية، أوكاياما، اليابان. Alexa Fluor® علامة تجارية مسجلة لشركة Molecular Probes, Inc.، يوجين، أوريغون. تُباع مُقترنات الأجسام المضادة المصبوغة بصبغات Alexa Fluor® و Pacific Blue™ و Cascade Blue® في هذا المنتج بموجب ترخيص من شركة Molecular Probes, Inc. للاستخدام البحثي فقط، باستثناء استخدامها مع المصفوفات الدقيقة، أو ككواشف خاصة بتحليل مُحدد. صبغات Alexa Fluor® (باستثناء Alexa Fluor® 430) وصبغة Pacific Blue™ وصبغة Cascade Blue® محمية ببراءات اختراع قيد الانتظار وصادرة. مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية تقع في الولايات المتحدة. تحذير: ينتج عن أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. لذا، يُرجى تخفيف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. للاطلاع على البروتوكولات الفنية، يُرجى زيارة الموقع الإلكتروني www.bdbiosciences.com/us/s/resources.