BD، 558686، BD Pharmingen™ مضاد GATA3 نقي من الفئران

التفاعل: الإنسان، الفأر (اختبار مراقبة الجودة)، الجرذ (متوقع)
النمط المصلي: IgG1، κ للفأر BALB/c
المستضد: ببتيد محفوظ بين نطاقي التنشيط العابر وربط الحمض النووي لبروتين GATA3 البشري والفأري والجرذي
التطبيق: لطخة ويسترن (يتم اختبارها بشكل روتيني)، التصوير الحيوي، الكيمياء المناعية النسيجية - الفورمالين (يلزم استرجاع المستضد) (يتم اختبارها أثناء التطوير)
الوزن الجزيئي المستهدف: 50 كيلو دالتون
التركيز: 0.5 ملغم/مل
RRID: AB_2108590
محلول التخزين: محلول مائي منظم يحتوي على ≤0.09% من أزيد الصوديوم.
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
التحضير والتخزين: يُحفظ غير مخفف عند درجة حرارة 4 درجات مئوية. تم تنقية الجسم المضاد أحادي النسيلة من سائل مزرعة الأنسجة أو السائل الاستسقائي بواسطة كروماتوغرافيا التقارب.
إجراءات الفحص الموصى بها: إجراء الفحص بالميثانول للوحة 96 بئراً، مع التلوين النووي المضاد: 1. ازرع الخلايا في وسط زراعة مناسب بمعدل 10000 خلية لكل بئر في لوحة التصوير BD Falcon™ ذات 96 بئراً (رقم المنتج 353219)، وازرعها طوال الليل. 2. أزل وسط الزراعة من الآبار، وثبّت الخلايا بإضافة 100 ميكرولتر من الفورمالديهايد الطازج بتركيز 3.7% في محلول ملحي فوسفاتي أو محلول التثبيت BD Cytofix™ (رقم المنتج 554655) إلى كل بئر، ثم احضنها لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة. 3. أزل المُثبِّت من الآبار، ثم اجعل الخلايا نفاذة بإضافة 100 ميكرولتر من محلول ميثانول 90% عند درجة حرارة -20 درجة مئوية أو محلول BD™ Phosflow Perm Buffer III (رقم المنتج 558050) عند درجة حرارة -20 درجة مئوية إلى كل بئر، ثم حضّنها لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة. 4. أزل المُنشِّط، واغسل الآبار مرتين بـ 100 ميكرولتر من محلول PBS بتركيز 1×. 5. أزل محلول PBS، ثم احجب الخلايا بإضافة 100 ميكرولتر من محلول الحجب (3% مصل بقري جنيني في محلول PBS بتركيز 1×) أو محلول BD Pharmingen™ Stain Buffer (مصل بقري جنيني) (رقم المنتج 554656) إلى كل بئر، ثم حضّنها لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. ٦. أزل محلول الحجب، وخفف الجسم المضاد في محلول الحجب أو محلول التلوين (FBS)، ثم لون الخلايا بإضافة ٥٠ ميكرولتر من الجسم المضاد المخفف إلى كل بئر وحضانتها لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. ٧. أزل الجسم المضاد المخفف، واغسل الآبار ثلاث مرات بـ ١٠٠ ميكرولتر من محلول الفوسفات الملحي (PBS) بتركيز ١×. ٨. أزل محلول الفوسفات الملحي (PBS)، وخفف كاشف الخطوة الثانية في محلول الحجب أو محلول التلوين (FBS)، ثم لون الخلايا بإضافة ٥٠ ميكرولتر من كاشف الخطوة الثانية المخفف إلى كل بئر وحضانتها لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. ٩. أزل كاشف الخطوة الثانية المخفف، واغسل الآبار ثلاث مرات بـ ١٠٠ ميكرولتر من محلول الفوسفات الملحي (PBS) بتركيز ١×. ١٠. أزل محلول الفوسفات الملحي (PBS)، ثم قم بتلوين النوى بإضافة ١٠٠ ميكرولتر من محلول هوكست ٣٣٣٤٢ بتركيز ٢ ميكروغرام/مل (مثلًا، سيغما-ألدريتش، رقم المنتج B2261) في محلول فوسفات ملحي (PBS) بتركيز ١× إلى كل بئر قبل ١٥ دقيقة على الأقل من التصوير. ١١. اعرض الخلايا وحللها باستخدام جهاز تصوير مناسب. التصوير الحيوي: لمزيد من المعلومات التفصيلية، يُرجى الرجوع إلى الرابط التالي: http://www.bdbiosciences.com/support/resources/protocols/ceritifed_reagents.jsp. التحليل المناعي الغربي: لمزيد من المعلومات التفصيلية، يُرجى الرجوع إلى الرابط التالي: http://www.bdbiosciences.com/pharmingen/protocols/Western_Blotting.shtml
إشعارات المنتج: يُرجى مراجعة www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية. نظرًا لاختلاف التطبيقات، ينبغي على كل باحث معايرة الكاشف للحصول على أفضل النتائج. تحذير: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. خفف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. تم تطوير هذا الجسم المضاد واعتماده لتطبيقات التصوير الحيوي. مع ذلك، لا يُجرى اختبار التصوير الحيوي الروتيني على كل دفعة. يُنصح الباحثون بمعايرة الكاشف للحصول على أفضل أداء.