BD، 558709، BD Pharmingen™ Alexa Fluor® 647 مضاد السيتوكروم ج الفأري

التفاعل: الإنسان (اختبار مراقبة الجودة)، الفأر، الجرذ (تم تأكيد التفاعل أثناء التطوير)
النمط المصلي: IgG1، κ للفأر BALB/c
المستضد: السيتوكروم ج للفئران
التطبيق: التصوير الحيوي (يتم اختباره بشكل روتيني)
حجم العينة لكل اختبار: 5 ميكرولتر
RRID: AB_1645616
محلول التخزين: محلول مائي منظم يحتوي على BSA ومثبت البروتين و ≤0.09% أزيد الصوديوم.
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
التحضير والتخزين: تم تنقية الجسم المضاد أحادي النسيلة من سائل مزرعة الأنسجة أو السائل الاستسقائي باستخدام كروماتوغرافيا التقارب. تم ربط الجسم المضاد بصبغة أليكسا فلور® 647 في ظل الظروف المثلى، وتمت إزالة صبغة أليكسا فلور® 647 غير المتفاعلة. يُحفظ غير مخفف في درجة حرارة 4 درجات مئوية، ويُحفظ بعيدًا عن الضوء لفترات طويلة. لا يُجمد.
إجراءات الفحص الموصى بها: 1. ازرع الخلايا في وسط زراعة مناسب بمعدل 10000 خلية تقريبًا لكل بئر في صفيحة تصوير BD Falcon™ ذات 96 بئرًا (رقم المنتج 353219)، واتركها طوال الليل. 2. أزل وسط الزراعة من الآبار، وثبّت الخلايا بإضافة 100 ميكرولتر من الفورمالديهايد الطازج بتركيز 3.7% في محلول ملحي فوسفاتي (PBS) أو محلول التثبيت BD Cytofix™ (رقم المنتج 554655) إلى كل بئر، ثم حضّنها لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة. 3. أزل المُثبِّت من الآبار، واجعل الخلايا نفاذة باستخدام الميثانول البارد أو Triton™ X-100. أضف 100 ميكرولتر من ميثانول 90% عند درجة حرارة -20 درجة مئوية أو محلول BD™ Phosflow Perm Buffer III (رقم المنتج 558050) عند درجة حرارة -20 درجة مئوية إلى كل بئر، ثم حضّن لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة. أو ب. أضف 100 ميكرولتر من محلول Triton™ X-100 بتركيز 0.1% إلى كل بئر، ثم حضّن لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة. Triton علامة تجارية مسجلة لشركة داو كيميكال. 4. أزل عامل النفاذية، واغسل الآبار مرتين بـ 100 ميكرولتر من محلول PBS بتركيز 1×. 5. أزل محلول PBS، ثم احجب الخلايا بإضافة 100 ميكرولتر من محلول الحجب (3% مصل بقري جنيني في محلول PBS بتركيز 1×) أو محلول BD Pharmingen™ Stain Buffer (مصل بقري جنيني) (رقم المنتج 554656) إلى كل بئر، ثم حضّن لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. ٦. أزل محلول الحجب، وخفف مُقترن الأجسام المضادة بنسبة ١:١٠ في محلول الحجب أو محلول التلوين (FBS)، ثم لوّن الخلايا بإضافة ٥٠ ميكرولتر من مُقترن الأجسام المضادة المخفف إلى كل بئر، واحضنها لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. ٧. أزل مُقترن الأجسام المضادة المخفف، واغسل الآبار ثلاث مرات بـ ١٠٠ ميكرولتر من محلول الفوسفات الملحي (PBS) بتركيز ١×. ٨. أزل محلول الفوسفات الملحي (PBS)، ولوّن النوى تلوينًا مضادًا بإضافة ١٠٠ ميكرولتر من محلول هوكست ٣٣٣٤٢ بتركيز ٢ ميكروغرام/مل (مثلًا، سيغما-ألدريتش، رقم المنتج B2261) في محلول الفوسفات الملحي (PBS) بتركيز ١× إلى كل بئر قبل ١٥ دقيقة على الأقل من التصوير. ٩. اعرض الخلايا وحللها باستخدام جهاز تصوير مناسب. المرشحات الموصى بها لأجهزة BD Pathway™ هي: مرشح الإثارة، مرشح الانبعاث، مرشح ثنائي اللون، BD Pathway 855، 620/60، 700/75، 660 LP، BD Pathway 435، 628/40، 690/40، FF660
إشعارات المنتج: يُرجى الرجوع إلى www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية. تم تخفيف هذا الكاشف مسبقًا للاستخدام بالحجم الموصى به لكل اختبار عند اتباع إجراء الفحص الموصى به. يتكون الاختبار عادةً من حوالي 10000 خلية مزروعة في بئر من صفيحة تصوير ذات 96 بئرًا. تُباع مُقترنات الأجسام المضادة المصبوغة بصبغات Alexa Fluor® و Pacific Blue™ و Cascade Blue® في هذا المنتج بموجب ترخيص من شركة Molecular Probes, Inc. للاستخدام البحثي فقط، باستثناء استخدامها مع المصفوفات الدقيقة، أو ككواشف خاصة بالمادة المُحللة. صبغات Alexa Fluor® (باستثناء Alexa Fluor® 430) وصبغة Pacific Blue™ وصبغة Cascade Blue® محمية ببراءات اختراع قيد الانتظار وصادرة. تحذير: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. خفف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية تقع في الولايات المتحدة. Alexa Fluor® علامة تجارية مسجلة لشركة Molecular Probes, Inc.، يوجين، أوريغون.