BD، 559065، BD Pharmingen™ مضاد IFN-γ نقي ​​من الفئران

الاسم البديل: IFG؛ IFNG؛ IFN-γ؛ IFN-g؛ IFN-gamma؛ إنترفيرون غاما؛ إنترفيرون من النوع الثاني
التفاعل: الفأر (اختبار مراقبة الجودة)
النمط المصلي: IgG1، كابا للفئران
مناعة: بروتين الفأر IFN-γ المؤتلف
التطبيق: اختبار ELISA (يتم اختباره بشكل روتيني)، الكيمياء المناعية الخلوية (يتم اختبارها أثناء التطوير)
التركيز: 0.5 ملغم/مل
RRID: AB_2123177
محلول التخزين: محلول مائي منظم يحتوي على ≤0.09% من أزيد الصوديوم.
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
التحضير والتخزين: يُحفظ غير مخفف عند درجة حرارة 4 درجات مئوية. تم تنقية الجسم المضاد أحادي النسيلة من سائل مزرعة الأنسجة أو السائل الاستسقائي بواسطة كروماتوغرافيا التقارب.
إجراءات الفحص الموصى بها: الفحص المناعي الخلوي: يمكن استخدام الأجسام المضادة النقية للفئران المضادة لإنترفيرون غاما (IFN-γ) (رقم المنتج 559065) لتحديد وحصر الخلايا البشرية المنتجة لإنترفيرون غاما (IFN-γ) باستخدام الفحص المناعي الخلوي. وللحصول على أفضل تلوين مناعي خلوي غير مباشر، يجب معايرة الأجسام المضادة وتصويرها من خلال إجراء تلوين من ثلاث خطوات. يرجى الاطلاع على البروتوكول أدناه للحصول على وصف مفصل لإجراء الفحص المناعي الخلوي. تُعد طريقة الأفيدين/البيوتين طريقة حساسة للغاية، لأنها تستخدم مزيجًا من الأفيدين ومركبات الإنزيم البيوتينيلية لزيادة الإشارات المناعية الإنزيمية. وللكشف الأمثل عن الخلايا المنتجة للسيتوكينات، يُفضل استخدام نظام إنزيم بيروكسيداز الفجل. بروتوكول الكيمياء المناعية الخلوية للسيتوكينات: الكواشف المطلوبة: 1. محلول التثبيت: يُذاب 5% فورمالين (10% فورمالين، CMS، رقم المنتج 245-684) في محلول ملحي مُخفف بالفوسفات (PBS) (محلول Bacto FA، مختبرات Difco، رقم المنتج 2314-15-0). 2. محلول حجب البيروكسيداز الداخلي: كاشف حجب البيروكسيداز DAKO (DAKO، رقم المنتج S2001). 3. محلول حجب البيوتين الداخلي: مجموعة حجب البيوتين/أفيدين (مختبرات Vector، رقم المنتج SP-2001). 4. محلول تخفيف الأجسام المضادة: محلول تخفيف BD Pharmingen™ Cytokine ICC المُضاف إليه الصابونين (BD، رقم المنتج 550009). ٥. شرائح مجهرية: شرائح لاصقة (شركة إيري ساينتيفيك، رقم المنتج ER-202B-AD) أو شرائح كولورفروست/بلس (فيشر، رقم المنتج 12-550-17) للتحضير الخلوي. ٦. نظام الكشف: BD Pharmingen™ ستربتأفيدين-بيروكسيداز الفجل (HRP) (رقم المنتج 550946) أو مجموعة الكشف عن الأجسام المضادة للفئران Ig HRP (رقم المنتج 551013). ٧. وسط تثبيت للتخزين قصير الأجل: أكوا-ماونت® (مختبرات ليرنر، رقم المنتج 13800). ٨. مجموعة ركيزة DAB (تحتوي على 3،3-ثنائي أمينوبنزيدين رباعي هيدروكلوريد)، (رقم المنتج 550880 من BD أو مجموعة الكشف عن الأجسام المضادة Ig للفئران HRP (رقم المنتج 551013)). الأجسام المضادة الثانوية: 1. جسم مضاد IgG مضاد للفئران من الماعز مع البيوتين (رقم المنتج 559286)، أو مجموعة الكشف عن الأجسام المضادة Ig للفئران HRP (رقم المنتج 551013). إجراء التلوين المناعي الخلوي لتحضيرات الخلايا المفردة: يصف هذا الإجراء تقنية التلوين المناعي الإنزيمي للسيتوكينات داخل الخلايا المفردة المثبتة على شرائح مجهرية عن طريق الالتصاق (الشرائح اللاصقة) أو الطرد المركزي (الشرائح الخلوية). الشرائح اللاصقة: 1. اجمع الخلايا واغسلها مرتين في محلول ملحي فوسفاتي باستخدام الطرد المركزي. (400 × g لمدة 5 دقائق) لإزالة البروتين المتبقي. 2. اضبط تركيز الخلايا عند 4-5 × 10⁶ خلية/مل في محلول الفوسفات الملحي (PBS). 3. ضع 20 ميكرولتر من معلق الخلايا في كل بئر من شرائح الالتصاق واتركها تلتصق في درجة حرارة الغرفة لمدة 20 دقيقة. يُرجى ملاحظة أنه يجب غسل الشرائح في محلول الفوسفات الملحي (PBS) في درجة حرارة الغرفة لمدة 5 دقائق قبل نقل الخلايا. 4. ثبّت الخلايا على الشرائح باستخدام محلول التثبيت لمدة 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. 5. اغسل الشرائح مرتين في محلول الفوسفات الملحي (PBS) مع حضانة لمدة 5 دقائق. 6. احجب الشرائح بمحلول الفوسفات الملحي (PBS) المُضاف إليه 1% (وزن/حجم) من ألبومين المصل البقري (BSA) (سيجما، رقم المنتج A43-78) لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة أو 10 دقائق عند 37 درجة مئوية. 7. اغسل الشرائح مرتين في محلول الفوسفات الملحي (PBS) وتابع عملية التلوين أو جففها بالهواء واحفظها عند -80 درجة مئوية للاستخدام لاحقًا. 8. حضّن الشرائح بـ 20 ميكرولتر من مصل الماعز بتركيز 1% ومحلول فوسفات ملحي (PBS) مع 0.1% (وزن/حجم) من الصابونين لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. 9. اغسل الشرائح مرتين بمحلول فوسفات ملحي (PBS) مع حضانة لمدة 5 دقائق. 10. احجب نشاط البيروكسيداز الداخلي باستخدام محلول حجب البيروكسيداز الداخلي (20 ميكرولتر/بئر) لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة. 11. اغسل مرتين بمحلول فوسفات ملحي (PBS) مع حضانة لمدة 5 دقائق. 12. حضّن كل بئر بالأفيدين (20 ميكرولتر/بئر) لمدة 15 دقيقة. 13. اغسل مرتين بمحلول فوسفات ملحي (PBS) مع حضانة لمدة 5 دقائق. 14. حضّن كل بئر بالبيوتين (20 ميكرولتر/بئر) لمدة 15 دقيقة. 15. اغسل مرتين بمحلول فوسفات ملحي (PBS) مع حضانة لمدة 5 دقائق. 16. حضّن كل بئر لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة مع 20 ميكرولتر من مصل الماعز بتركيز 1% ومحلول فوسفات ملحي (PBS) مع 0.1% (وزن/حجم) من الصابونين لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. 17. أضف 20 ميكرولتر من الأجسام المضادة النوعية للسيتوكينات النقية أو نظير الغلوبولين المناعي المناسب كعنصر تحكم، مخففًا في محلول تخفيف السيتوكينات ICC من Pharmingen والمُضاف إليه الصابونين. 18. اغسل الشرائح مرتين بمحلول الفوسفات الملحي (PBS) مع حضانة لمدة 5 دقائق. 19. حضّن كل بئر مع 20 ميكرولتر من الأجسام المضادة الثانوية المُؤشَّرة بالبيوتين والمخففة في محلول تخفيف السيتوكينات ICC لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. 10. اغسل مرتين بمحلول الفوسفات الملحي (PBS) مع حضانة لمدة 5 دقائق. 21. ضع 20 ميكرولتر من ستربتأفيدين-HRP (رقم المنتج 550946 من BD) في كل بئر على الشرائح، وحضّن لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. 22. اغسل الشرائح مرتين بمحلول الفوسفات الملحي (PBS) مع حضانة لمدة 5 دقائق. 33. حضّن مع ركيزة DAB وفقًا للتعليمات (رقم المنتج 550880 من BD). لمدة تقل عن 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة. 23. أوقف تفاعل اللون بالغسل بمحلول الفوسفات الملحي (PBS). 24. تُثبّت الشرائح بعد ذلك في وسط تثبيت للتخزين قصير الأجل. أجهزة الطرد المركزي (CYTOSPINS): 1. جهّز حجرة عينة جهاز الطرد المركزي (مثل Cytospin 3، Shandon، المملكة المتحدة، أو جهاز طرد مركزي مماثل)، وبطاقة الترشيح، والشرائح، وحامل جهاز الطرد المركزي وفقًا لمواصفات الشركة المصنعة. 2. ضع 40 ميكرولتر من حوالي 1 × 10⁶ خلية في كل حجرة عينة. 3. قم بتدوير الشرائح بسرعة 600 دورة في الدقيقة لمدة دقيقتين. 4. أخرج الشرائح من حامل جهاز الطرد المركزي وضعها على حامل التلوين. 5. للتثبيت والتلوين، يُرجى اتباع الخطوات من 4 إلى 24 المذكورة أعلاه لتلوين الخلايا على شرائح الالتصاق.
ملاحظات المنتج: نظرًا لاختلاف التطبيقات، ينبغي على كل باحث معايرة الكاشف للحصول على أفضل النتائج. تحذير: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. يجب تخفيف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. يُعد أزيد الصوديوم مثبطًا عكسيًا لعملية الأيض التأكسدي؛ لذلك، يجب عدم استخدام مستحضرات الأجسام المضادة التي تحتوي على هذه المادة الحافظة في مزارع الخلايا أو حقنها في الحيوانات. يمكن إزالة أزيد الصوديوم عن طريق غسل الخلايا المصبوغة أو الأجسام المضادة المرتبطة بالصفيحة أو عن طريق غسيل الأجسام المضادة الذائبة في محلول منظم خالٍ من أزيد الصوديوم. نظرًا لأن السموم الداخلية قد تؤثر أيضًا على نتائج الدراسات الوظيفية، فإننا نوصي باستخدام صيغة الأجسام المضادة NA/LE (خالية من الأزيد/منخفضة السموم الداخلية)، إن وجدت، للاستخدام في المختبر وفي الجسم الحي. يُرجى الرجوع إلى www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية.