BD، 559076، BD Pharmingen™ مضاد IL-10 بشري نقي من الفئران

التفاعل: بشري (اختبار مراقبة الجودة)، فيروسي (تم اختباره أثناء التطوير)
النمط المصلي: IgG2a للفئران
المستضد: إنترلوكين-10 البشري
التطبيق: اختبار ELISA (يتم اختباره بشكل روتيني)
التركيز: 0.5 ملغم/مل
RRID: AB_2233691
محلول التخزين: محلول مائي منظم يحتوي على ≤0.09% من أزيد الصوديوم.
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
التحضير والتخزين: يُحفظ غير مخفف عند درجة حرارة 4 درجات مئوية. تم تنقية الجسم المضاد أحادي النسيلة من سائل مزرعة الأنسجة أو السائل الاستسقائي بواسطة كروماتوغرافيا التقارب.
إجراءات الفحص الموصى بها: الفحص المناعي الخلوي: يمكن استخدام الأجسام المضادة النقية للفئران ضد إنترلوكين-10 البشري (رقم المنتج 559076) لتحديد وحصر الخلايا المنتجة لإنترلوكين-10 البشري باستخدام الفحص المناعي الخلوي. وللحصول على أفضل تلوين مناعي خلوي غير مباشر، يجب معايرة الجسم المضاد JES3-12G8 وتصويره من خلال إجراء تلوين من ثلاث خطوات بالاشتراك مع الأجسام المضادة IgG المضادة للفئران والمُعلَّمة بالبيوتين، ونظام الكشف عن بيروكسيداز الفجل المُرتبط بالأفيدين/الستربتافيدين. فيما يلي بروتوكول مفصل لإجراء الفحص المناعي الخلوي للسيتوكينات. بروتوكول الكيمياء المناعية الخلوية للسيتوكينات - الكواشف المطلوبة: 1. محلول التثبيت: يُذاب 5% فورمالين (أو 10% فورمالين، CMS، رقم المنتج 245-684) في محلول ملحي مُخفف بالفوسفات (PBS) (محلول Bacto FA، مختبرات Difco، رقم المنتج 2314-15-0)، أو محلول تثبيت BD Pharmingen™ ICC (BD، رقم المنتج 550010). 2. محلول حجب البيروكسيداز الداخلي: كاشف حجب البيروكسيداز DAKO (DAKO، رقم المنتج S2001). 3. محلول حجب البيوتين الداخلي: مجموعة حجب البيوتين/أفيدين (مختبرات Vector، رقم المنتج SP-2001). 4. محلول تخفيف الأجسام المضادة: مخفف الأجسام المضادة BD Pharmingen™ للكيمياء المناعية الخلوية، رقم المنتج 1000. رقم 559148، مُدعّم بالصابونين 5. شرائح مجهرية: شرائح لاصقة (شركة إيري ساينتيفيك، رقم المنتج ER-202B-AD) أو شرائح كولورفروست/بلس (فيشر، رقم المنتج 12-550-17) للتحضير الخلوي. 6. نظام الكشف: BD Pharmingen™ ستربتأفيدين-بيروكسيداز الفجل (HRP)، (رقم المنتج 550946)، أو مجموعة الكشف عن الأجسام المضادة للفئران Ig HRP (رقم المنتج 551013). 7. وسط تثبيت للتخزين قصير الأجل: أكوا-ماونت® (مختبرات ليرنر، رقم المنتج 13800). ٨. مجموعة ركيزة DAB (تحتوي على 3،3-ثنائي أمينوبنزيدين رباعي هيدروكلوريد)، (رقم المنتج 550880 من BD)، أو مجموعة الكشف عن الأجسام المضادة Ig للفئران HRP (رقم المنتج 551013). الأجسام المضادة الثانوية: ١. جسم مضاد IgG مضاد للفئران من الماعز مع البيوتين (رقم المنتج 559286) أو مجموعة الكشف عن الأجسام المضادة Ig للفئران HRP (رقم المنتج 551013). إجراء التلوين المناعي الخلوي لتحضيرات الخلايا المفردة: يصف هذا الإجراء تقنية التلوين المناعي الإنزيمي للسيتوكينات داخل الخلايا المفردة المثبتة على شرائح مجهرية عن طريق الالتصاق (شرائح لاصقة) أو الطرد المركزي (أجهزة الطرد المركزي الخلوي). شرائح الالتصاق: 1. اجمع الخلايا واغسلها مرتين بمحلول الفوسفات الملحي (PBS) باستخدام جهاز الطرد المركزي (400 × g لمدة 5 دقائق) لإزالة البروتين المتبقي. 2. اضبط تركيز الخلايا إلى 4-5 × 10⁶ خلية/مل في محلول الفوسفات الملحي (PBS). 3. ضع 20 ميكرولتر من معلق الخلايا في كل بئر من شرائح الالتصاق واتركها تلتصق في درجة حرارة الغرفة لمدة 20 دقيقة. يُرجى ملاحظة أنه يجب غسل الشرائح بمحلول الفوسفات الملحي (PBS) في درجة حرارة الغرفة لمدة 5 دقائق قبل نقل الخلايا. 4. ثبّت الخلايا على الشرائح باستخدام محلول التثبيت لمدة 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. 5. اغسل الشرائح مرتين بمحلول الفوسفات الملحي (PBS) مع حضانة لمدة 5 دقائق. 6. احجب الشرائح بمحلول الفوسفات الملحي (PBS) المُضاف إليه 1% (وزن/حجم) من ألبومين المصل البقري (BSA) (سيجما، رقم المنتج A43-78) لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة أو 10 دقائق عند 37 درجة مئوية. ٧. اغسل الشرائح مرتين بمحلول الفوسفات الملحي (PBS) ثم قم بتلوينها، أو جففها بالهواء واحفظها عند درجة حرارة -٨٠ درجة مئوية لاستخدامها لاحقًا. ٨. حضّن الشرائح مع ٢٠ ميكرولتر من مصل الماعز بتركيز ١٪ ومحلول الفوسفات الملحي (PBS) مع ٠٫١٪ (وزن/حجم) من الصابونين لمدة ٣٠ دقيقة في درجة حرارة الغرفة. ٩. اغسل الشرائح مرتين بمحلول الفوسفات الملحي (PBS) مع حضانة لمدة ٥ دقائق. ١٠. قم بتثبيط نشاط البيروكسيداز الداخلي باستخدام محلول تثبيط البيروكسيداز الداخلي (٢٠ ميكرولتر/بئر) لمدة ١٠ دقائق في درجة حرارة الغرفة. ١١. اغسل الشرائح مرتين بمحلول الفوسفات الملحي (PBS) مع حضانة لمدة ٥ دقائق. ١٢. حضّن كل بئر مع الأفيدين (٢٠ ميكرولتر/بئر) لمدة ١٥ دقيقة. ١٣. اغسل الشرائح مرتين بمحلول الفوسفات الملحي (PBS) مع حضانة لمدة ٥ دقائق. ١٤. حضّن كل بئر مع البيوتين (٢٠ ميكرولتر/بئر) لمدة ١٥ دقيقة. 15. اغسل الشرائح مرتين بمحلول الفوسفات الملحي (PBS) مع حضانة لمدة 5 دقائق. 16. حضّن كل بئر لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة مع 20 ميكرولتر من الأجسام المضادة النقية الخاصة بالسيتوكين أو نظير الغلوبولين المناعي المناسب كعنصر تحكم، مخففًا في محلول تخفيف الأجسام المضادة للتلوين المناعي النسيجي (IHC)، رقم المنتج 559148، والمُضاف إليه الصابونين. 17. اغسل الشرائح مرتين بمحلول الفوسفات الملحي (PBS) مع حضانة لمدة 5 دقائق. 18. حضّن كل بئر مع 20 ميكرولتر من الأجسام المضادة الثانوية المُؤشَّرة بالبيوتين، مخففًا في محلول تخفيف التلوين المناعي النسيجي (IHC)، لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. 19. اغسل الشرائح مرتين بمحلول الفوسفات الملحي (PBS) مع حضانة لمدة 5 دقائق. 20. ضع 20 ميكرولتر من ستربتأفيدين-HRP (رقم المنتج 550946 من شركة BD) على كل بئر في الشرائح، وحضّن لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. ٢١. اغسل الشرائح مرتين بمحلول الفوسفات الملحي (PBS) مع حضانة لمدة ٥ دقائق. ٢٢. حضّن الشرائح مع ركيزة DAB وفقًا للتعليمات (BD Cat. No. 550880) لمدة أقل من ٥ دقائق في درجة حرارة الغرفة. ٢٣. أوقف تفاعل اللون بالغسل بمحلول الفوسفات الملحي (PBS). ٢٤. تُثبّت الشرائح بعد ذلك في وسط تثبيت للتخزين قصير الأجل. أجهزة الطرد المركزي الخلوي (CYTOSPINS): ١. جهّز حجرة عينة جهاز الطرد المركزي الخلوي (مثل Cytospin 3، Shandon، المملكة المتحدة أو جهاز طرد مركزي مماثل)، وبطاقة الترشيح، والشرائح، وحامل جهاز الطرد المركزي الخلوي وفقًا لمواصفات الشركة المصنعة. ٢. ضع ٤٠ ميكرولتر من حوالي ١ × ١٠ × ٦ خلايا في كل حجرة عينة. ٣. قم بتدوير الشرائح بسرعة ٦٠٠ دورة في الدقيقة لمدة دقيقتين. ٤. أخرج الشرائح من حامل جهاز الطرد المركزي الخلوي وضعها على حامل التلوين. 5. للتثبيت والتلوين، يرجى اتباع الخطوات من 4 إلى 24 المحددة أعلاه لتلوين الخلايا على شرائح الالتصاق.
ملاحظات المنتج: نظرًا لاختلاف التطبيقات، ينبغي على كل باحث معايرة الكاشف للحصول على أفضل النتائج. تحذير: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. يجب تخفيف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. يُعد أزيد الصوديوم مثبطًا عكسيًا لعملية الأيض التأكسدي؛ لذلك، يجب عدم استخدام مستحضرات الأجسام المضادة التي تحتوي على هذه المادة الحافظة في مزارع الخلايا أو حقنها في الحيوانات. يمكن إزالة أزيد الصوديوم عن طريق غسل الخلايا المصبوغة أو الأجسام المضادة المرتبطة بالصفيحة أو عن طريق غسيل الأجسام المضادة الذائبة في محلول منظم خالٍ من أزيد الصوديوم. نظرًا لأن السموم الداخلية قد تؤثر أيضًا على نتائج الدراسات الوظيفية، فإننا نوصي باستخدام صيغة الأجسام المضادة NA/LE (خالية من الأزيد/منخفضة السموم الداخلية)، إن وجدت، للاستخدام في المختبر وفي الجسم الحي. قد لا يكون التفاعل المتبادل بين الأنواع الذي تم اكتشافه أثناء تطوير المنتج قد تم تأكيده في كل صيغة و/أو تطبيق. يرجى مراجعة الموقع الإلكتروني http://regdocs.bd.com للاطلاع على صحائف بيانات السلامة (SDS). يرجى مراجعة الموقع الإلكتروني www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية.