BD، 559971، لوحة سلالة الفئران البيوتين من BD Pharmingen™

التفاعل: الفأر (اختبار مراقبة الجودة)
التطبيق: قياس التدفق الخلوي (يتم اختباره بشكل روتيني)
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
RRID: AB_10053179
الوصف: صُممت لوحة سلالات خلايا الفأر للتفاعل مع خلايا من سلالات خلايا الدم الرئيسية، مثل الخلايا اللمفاوية التائية، والخلايا اللمفاوية البائية، والخلايا الوحيدة/البلعمية، والخلايا المحببة، وخلايا الدم الحمراء. تتكون هذه اللوحة من خمسة أجسام مضادة مُخففة مسبقًا ومُؤشَّرة بالبيوتين، وهي مُصممة للإثراء الخلوي التدفق أو المناعي المغناطيسي للخلايا السلفية المكونة للدم من نخاع عظم الفأر عن طريق استنزاف الخلايا المُلتزمة بسلالات الخلايا اللمفاوية التائية والبائية، والخلايا النخاعية (الوحيدة والمحببة)، وخلايا الدم الحمراء. تحتوي اللوحة على كمية كافية من الكواشف لتلوين 10^9 خلية من خلايا نخاع العظم.
التحضير والتخزين: يُحفظ غير مخفف في درجة حرارة 4 درجات مئوية، ويُحفظ بعيدًا عن الضوء لفترات طويلة. لا يُجمد. تم تنقية الجسم المضاد أحادي النسيلة من سائل مزرعة الأنسجة أو السائل الاستسقائي باستخدام كروماتوغرافيا التقارب. تم ربط الجسم المضاد بالبيوتين في ظل الظروف المثلى، وتمت إزالة البيوتين غير المتفاعل.
إجراءات الفحص الموصى بها: فيما يلي بروتوكول وسم مفصل. باختصار، تقوم الأجسام المضادة المرتبطة بالبيوتين بتلوين الخلايا الملتزمة بنسبها الخلوية المختلفة في آنٍ واحد، وذلك وفقًا لخصائصها المميزة. يكفي 2 ميكرولتر من كل جسم مضاد مُخفف مسبقًا لتلوين 10^6 خلية في 10 ميكرولتر من محلول التلوين. بعد ذلك، يتم إجراء عملية اختيار سلبي لإثراء الخلايا السلفية المكونة للدم غير الملتزمة. يمكن استخدام لوحة سلالات الفئران بكفاءة مماثلة مع أنظمة الفصل بالجسيمات المغناطيسية أو فرز الخلايا بالتدفق الخلوي. ولتسهيل الاستخدام، تم تحسين جميع الأجسام المضادة وتخفيفها مسبقًا لتحقيق أقصى كفاءة في فصل الخلايا. تُقدم الأجسام المضادة في قوارير منفصلة لضمان استقرار المنتج ولإتاحة مرونة في بروتوكولات الفصل. تم اختبار الخلايا السلفية المكونة للدم المفصولة بعد تلوينها باستخدام لوحة سلالات الفئران في تحليل التدفق الخلوي، واختبارات المستعمرات في ميثيل السليلوز، ومجهر التلوين التفاضلي، والترسيب المناعي، وتحليل لطخة ويسترن. لا يؤثر استخدام لوحة تحديد سلالة خلايا الفأر على شكل أو نمط أو وظيفة الخلايا المفصولة في هذه الاختبارات. بروتوكول وسم الخلايا الجذعية المكونة للدم: 1. تحضير معلق خلوي أحادي من نخاع العظم أو أي عضو مكون للدم آخر. ملاحظات: - ينتج عظم الفخذ وعظم الساق لفأر بالغ واحد عادةً من 20 إلى 60 × 10^6 خلية مكونة للدم. ينتج عن فأرين من 0.5 إلى 1.0 × 10^6 خلية سالبة السلالة. - لا يؤثر وجود خلايا الدم الحمراء على التلوين باستخدام لوحة تحديد سلالة خلايا الفأر. لاحظنا أن التحلل الأولي لخلايا الدم الحمراء، باستخدام كلوريد الأمونيوم المخفف، يقلل من فعالية التلوين. قد يكون فصل الخلايا بالتدرج أكثر ملاءمة. إذا كان تحلل خلايا الدم الحمراء مطلوبًا لمزيد من التحليل، فيجب إجراؤه بعد عملية الفصل. - إذا كانت الخلايا المفصولة ستُستخدم في الزراعة أو الاختبارات الحيوية، فيجب استخدام ظروف معقمة ووسط/محاليل معقمة. 2. عدّ الخلايا، وأعد تعليقها في محلول تلوين الخلايا [مثل محلول تلوين BD Pharmingen™ (FBS)، رقم المنتج 554656] بكثافة نهائية قدرها 100 × 10^6 خلية لكل مل. 3. احتفظ بعينة من الخلايا غير الملونة (حوالي 5 × 10^6 خلية) لاستخدامها في تحليل التدفق الخلوي في الخطوة 7. 4. أضف الأجسام المضادة المُؤشَّرة بالبيوتين من لوحة سلالة الفأر، باستخدام 2 ميكرولتر من كل جسم مضاد مُخفَّف مسبقًا لكل 10^6 خلية، وحضّنها على الجليد لمدة 15 دقيقة. 5. اغسل الخلايا الملونة مرتين، باستخدام المحلول الموصى به لنظام فصل الخلايا المُستخدم. ٦. أعد تعليق الخلايا بكثافة نهائية تتراوح بين ٢٠ و ١٠٠ × ١٠^٦ خلية لكل مل. يمكن استخدام الخلايا المصبوغة في أنظمة فصل الخلايا المختلفة. ملاحظات: - لكل طريقة فصل، يجب اتباع البروتوكول الموصى به من قبل الشركة المصنعة. - لفرز الخلايا بالتدفق الخلوي، يجب وسم الخلايا بالستربتافيدين (أو الأفيدين) المرتبط بصبغة فلورية مناسبة. - لفصل الخلايا المناعي المغناطيسي باستخدام عمود الفصل المغناطيسي عالي التدرج، يجب وسم الخلايا بجزيئات مغناطيسية مناسبة مرتبطة بالستربتافيدين (مثل BD™ IMag Streptavidin Particles Plus - MSC، رقم المنتج ٥٥٧٨١١). لفصل الخلايا المناعي المغناطيسي باستخدام مغناطيس فصل الخلايا BD IMag™ (رقم المنتج ٥٥٢٣١١)، نوصي باستخدام مجموعة BD™ IMag Mouse Hematopoietic Progenitor Cell Enrichment Set - DM، رقم المنتج ٥٥٢٣١١. (رقم 558451). 7. يجب تحليل عينات من معلق الخلايا الكلي، والكسور الموجبة والسالبة للسلالة، باستخدام قياس التدفق الخلوي لتقييم كفاءة عملية فصل الخلايا. ملاحظة: - التركيز الموصى به للأجسام المضادة للوحة سلالات الفئران ليس تركيزًا مشبعًا، ويسمح بتلوين الكسور المفصولة الموجبة والسالبة للسلالة باستخدام نفس الأجسام المضادة وحيدة النسيلة المستخدمة في عملية الاستنزاف.
تنبيهات المنتج: تحذير: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. خفف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية تقع في الولايات المتحدة. يرجى مراجعة www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية.
الوصف: الكمية/الحجم: رقم القطعة: معرف EntrezGene
غير متوفر : 2.0 : غير متوفر : غير متوفر