BD، 560044، BD Pharmingen™ مضاد FoxP3 بشري نقي من الفئران

الاسم البديل: سكورفين؛ IPEX؛ JM2؛ AIID؛ XPID؛ DIETER؛ PIDX
التفاعل: الإنسان (اختبار مراقبة الجودة)، قرد الريسوس، قرد المكاك، قرد البابون (تم اختباره أثناء التطوير)
النمط المصلي: IgG1 للفأر BALB/c
المستضد: FoxP3
التطبيق: التلوين داخل الخلايا (قياس التدفق الخلوي) (يتم اختباره بشكل روتيني)، الكيمياء المناعية النسيجية، لطخة ويسترن (تم الإبلاغ عنها)
التركيز: 0.5 ملغم/مل
RRID: AB_1645589
محلول التخزين: محلول مائي منظم يحتوي على ≤0.09% من أزيد الصوديوم.
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
التحضير والتخزين: يُحفظ غير مخفف عند درجة حرارة 4 درجات مئوية. تم تنقية الجسم المضاد أحادي النسيلة من سائل مزرعة الأنسجة أو السائل الاستسقائي بواسطة كروماتوغرافيا التقارب.
إجراءات الفحص الموصى بها: إجراءات تحضير الخلايا وتلوينها للأجسام المضادة النقية المضادة لبروتين FoxP3 البشري 1. اترك المحاليل المنظمة لتصل إلى درجة حرارة الغرفة قبل الاستخدام. حضّر محاليل العمل من مجموعة محاليل BD Pharmingen Human FoxP3 Buffer Set رقم 560098 (للحصول على تفاصيل حول تحضير المحلولين A وC، يُرجى مراجعة ورقة البيانات الفنية الخاصة بتعليمات المحلول رقم 560098). 2. حضّر خلايا الدم المحيطية أحادية النواة البشرية (PBMC). احسب عدد الخلايا المطلوبة لكل اختبار (1.2 مليون) خلية PBMC. 3. ثبّت الخلايا بكميات كبيرة أو بحجم الاختبار باستخدام 2 مل من محلول العمل 1x Human FoxP3 Buffer A لكل اختبار، واحضنها لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة، مع حمايتها من الضوء. ملاحظة: يمكن تجميد خلايا PBMC المثبتة بكميات كبيرة عند -80 درجة مئوية لمدة 24 ساعة قبل الانتقال إلى الخطوة 4. 4. اغسل الخلايا بـ 2 مل من محلول التلوين BD Pharmingen Stain Buffer (FBS)* لكل اختبار. قم بالطرد المركزي عند 500 × g لمدة 10 دقائق، ثم أزل محلول الغسل. 5. لزيادة نفاذية الخلايا، سواءً كانت بكميات كبيرة أو بحجم عينة اختبار، أضف 0.5 مل من محلول العمل 1x Human FoxP3 Buffer C لكل اختبار، ثم حضّن لمدة 30 دقيقة في مكان مظلم. 6. أضف 2 مل إضافية من محلول BD Pharmingen Stain Buffer (FBS)* لكل اختبار. قم بالطرد المركزي عند 500 × g لمدة 10 دقائق، ثم أزل محلول الغسل. 7. أعد تعليق الخلايا في محلول BD Pharmingen Stain Buffer (FBS)* حتى يصل حجمها إلى 100 ميكرولتر لكل اختبار؛ ثم قسّم 100 ميكرولتر من معلق الخلايا إلى أنابيب قياس 12 × 75 مم. 8. أضف الأجسام المضادة وحيدة النسيلة النقية المضادة لـ FoxP3 البشري بتركيزات مناسبة، بمقدار 20 ميكرولتر لكل اختبار، إلى الأنابيب. رجّ الأنابيب برفق أو استخدم جهاز الخلط الدوامي. حضّن لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة في مكان مظلم. ٩. اغسل الخلايا مرتين بإضافة ٢ مل من محلول التلوين BD Pharmingen (FBS)* إلى كل أنبوب، ثم قم بالطرد المركزي بسرعة ٥٠٠ × جم لمدة ٥ دقائق في درجة حرارة الغرفة. أزل محلول الغسل. ١٠. أضف الجسم المضاد الثانوي (APC Rat Anti-Mouse IgG1، رقم المنتج ٥٥٠٨٧٤) بالتركيز المناسب. حضّن لمدة ٣٠ دقيقة في درجة حرارة الغرفة مع حمايتها من الضوء. ١١. كرر الغسل كما في الخطوة ٩. ١٢. حجب الجسم المضاد الثانوي بمصل الفأر الطبيعي بنسبة ١:١٠ في محلول PBS بتركيز ١×، ١٠٠ ميكرولتر لكل اختبار. حضّن لمدة ١٠ دقائق في درجة حرارة الغرفة. ١٣. أضف أحجام الاختبار من الأجسام المضادة أحادية النسيلة المضادة لسطح الإنسان، وحضّن لمدة ٢٠ دقيقة في درجة حرارة الغرفة مع حمايتها من الضوء. ١٤. أضف ٢ مل من محلول التلوين BD Pharmingen (FBS)* إلى كل أنبوب، ثم قم بالطرد المركزي بسرعة ٥٠٠ × جم لمدة ٥ دقائق في درجة حرارة الغرفة، ثم أزل محلول الغسل. ١٥. أعد تعليق الخلايا في محلول الغسل وحللها فورًا. اختياري: أضف ٣٠٠ ميكرولتر من الفورمالديهايد بتركيز ١٪ في محلول فوسفات ملحي (PBS) بتركيز ١x، واحفظها في درجة حرارة ٤ درجات مئوية. حلل الخلايا خلال ٢٤ ساعة. ملاحظة: تنبيه: انتبه إلى أن الراسب يكون طافيًا بعد التثبيت، لذا يلزم توخي الحذر لتجنب استنشاق الخلايا. * نوصي باستخدام محلول التلوين BD Pharmingen (FBS؛ رقم المنتج ٥٥٤٦٥٦) للتلوين السطحي الأولي وجميع خطوات الغسل، وتغطية الأنابيب بأغطية أو غشاء بارافين أثناء خطوات الحضانة. كما نوصي بضبط جهد التشتت الأمامي والجانبي لتصوير الخلايا الليمفاوية بشكل منفصل عن الحطام وبقايا خلايا الدم الحمراء و/أو الصفائح الدموية قبل التصوير. ** احصل على ما لا يقل عن ١٥٠٠٠ إلى ٢٥٠٠٠ خلية ليمفاوية موجبة لـ CD4.
ملاحظات المنتج: نظرًا لاختلاف التطبيقات، ينبغي على كل باحث معايرة الكاشف للحصول على أفضل النتائج. تحذير: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. خفف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. يجب استخدام عنصر تحكم متماثل النمط بنفس تركيز الجسم المضاد المطلوب. يرجى مراجعة www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية.