BD، 560064، BD Pharmingen™ Alexa Fluor® 555 مضاد E-Cadherin للفأر

الاسم البديل: CD324؛ CDH1؛ CADH1؛ كادرين-1؛ إكاد. سي دي إتش إي؛ قوس-1؛ لكام؛ الأشعة فوق البنفسجية. أوفومورولين
التفاعل: الإنسان (اختبار مراقبة الجودة)، الفأر (تم اختباره أثناء التطوير)، الجرذ، الكلب (تم تأكيد التفاعل أثناء التطوير)
النمط المصلي: IgG2a الفأري، κ
المستضد: بروتين إي-كاديرين البشري المؤتلف الطرفي الكربوكسيلي
التطبيق: التصوير الحيوي (يتم اختباره بشكل روتيني)
حجم العينة لكل اختبار: 5 ميكرولتر
RRID: AB_1645384
محلول التخزين: محلول مائي منظم يحتوي على BSA ومثبت البروتين و ≤0.09% أزيد الصوديوم.
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
التحضير والتخزين: يُحفظ غير مخفف في درجة حرارة 4 درجات مئوية، ويُحفظ بعيدًا عن الضوء لفترات طويلة. لا يُجمد. تم تنقية الجسم المضاد أحادي النسيلة من سائل مزرعة الأنسجة أو السائل الاستسقائي باستخدام كروماتوغرافيا التقارب. تم ربط الجسم المضاد بصبغة أليكسا فلور® 555 في ظل الظروف المثلى، وتمت إزالة صبغة أليكسا فلور® 555 غير المتفاعلة.
إجراءات الفحص الموصى بها: إجراءات الفحص الموصى بها لشرائح الأنسجة 1. استخلص الأعضاء أو الأنسجة المستهدفة واغسلها بمحلول الفوسفات الملحي (PBS). 2. ضع الأنسجة في كاسيتات وثبتها بمحلول فورمالين متعادل مخفف بنسبة 10% (Fisher SF100-4) لمدة 16 ساعة. 3. أزل المُثبِّت، ثم تابع عملية المعالجة والتضمين في البارافين باستخدام البروتوكولات القياسية.* 4. قُطِّع شرائح الأنسجة المُضمَّنة في البارافين (5 ميكرومتر) باستخدام الميكروتوم، ثم ألصق الشرائح على شرائح زجاجية مُلوِّنة (Fisher 12-550-17)، واتركها تجف في الهواء.* 5. أزل البارافين من الشرائح وأعد ترطيبها.* 6. عالج الشرائح بمحلول BD Retrievagen A (رقم المنتج 550524) عن طريق تسخينها في قدر ضغط عند 121 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة عند ضغط 17 رطل لكل بوصة مربعة.* 7. اترك الشرائح تبرد إلى درجة حرارة الغرفة في محلول Retrievagen A، ثم اشطفها بماء الصنبور، واحفظها في محلول ملحي فوسفاتي قبل تلوينها بالأجسام المضادة. 8. يمكن تلوين الشرائح في وقت واحد بمزيج من الأجسام المضادة المتعددة بتركيز مُحسَّن مسبقًا، لمدة ساعتين في درجة حرارة الغرفة. ٩. اغسل المقاطع بمحلول فوسفات ملحي (PBS) بتركيز ١×، ثم قم بتوسيم الحمض النووي الخلوي باستخدام ٢ ميكروغرام/مل من صبغة هوكست ٣٣٣٤٢ (رقم المنتج ٥٦١٩٠٨) لمدة ٣٠ دقيقة، ثم اغسلها بمحلول فوسفات ملحي (PBS) بتركيز ١×. ١٠. ضع أغطية الشرائح على المقاطع باستخدام لاصق أكوا ماونت (مختبرات ليرنر ١٣٨٠٠). ١١. اعرض العينات وحللها باستخدام جهاز تصوير مناسب، مثل نظام التصوير الحيوي عالي المحتوى BD Pathway™ ٤٣٥. * لمزيد من التفاصيل، يرجى زيارة الرابط التالي: http://www.bdbiosciences.com/research/cellularimaging/resources/index.jsp. بالنسبة للخلايا المستنبتة: ١. ازرع الخلايا في وسط استنبات مناسب بكثافة خلوية مناسبة في صفيحة تصوير ذات ٩٦ بئراً، واتركها تستنبت طوال الليل أو لمدة ٤٨ ساعة. ٢. أزل وسط الاستنبات من الآبار، واغسلها (مرة أو مرتين) بـ ١٠٠ ميكرولتر من محلول فوسفات ملحي (PBS) بتركيز ١×. 3. ثبّت الخلايا بإضافة 100 ميكرولتر من الفورمالديهايد الطازج بتركيز 3.7% في محلول ملحي فوسفاتي (PBS) أو محلول التثبيت BD Cytofix™ (رقم المنتج 554655) إلى كل بئر، ثم حضّنها لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة. 4. أزل المُثبِّت من الآبار، واغسلها (مرة أو مرتين) بـ 100 ميكرولتر من محلول ملحي فوسفاتي (PBS) بتركيز 1×. 5. اجعل الخلايا نفاذة باستخدام الميثانول البارد (أ)، أو Triton™ X-100 (ب)، أو الصابونين (ج): أ. أضف 100 ميكرولتر من الميثانول بتركيز 90% عند درجة حرارة -20 درجة مئوية أو محلول BD Phosflow™ Perm Buffer III (رقم المنتج 558050) عند درجة حرارة -20 درجة مئوية إلى كل بئر، ثم حضّنها لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة. ب. أضف 100 ميكرولتر من محلول تريتون X-100 بتركيز 0.1% إلى كل بئر، ثم حضّن لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة. ج. أضف 100 ميكرولتر من محلول النفاذية/الغسل بتركيز 1× (رقم المنتج 554723) إلى كل بئر، ثم حضّن لمدة 15 إلى 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. استمر في استخدام محلول النفاذية/الغسل بتركيز 1× لجميع خطوات الغسل والتخفيف اللاحقة. 6. أزل محلول النفاذية من الآبار، واغسل مرة أو مرتين باستخدام 100 ميكرولتر من المحلول المناسب (إما محلول فوسفات ملحي بتركيز 1× أو محلول النفاذية/الغسل بتركيز 1×، انظر الخطوة 5.ج). ٧. خطوة الحجب الاختيارية: أزل محاليل الغسل، واحجب الخلايا بإضافة ١٠٠ ميكرولتر من محلول الحجب BD Pharmingen™ Stain Buffer (FBS) (رقم المنتج ٥٥٤٦٥٦) أو ٣٪ FBS في محلول التخفيف المناسب إلى كل بئر، ثم حضّن لمدة ١٥ إلى ٣٠ دقيقة في درجة حرارة الغرفة. ٨. خفف الجسم المضاد إلى تركيزه الأمثل في محلول التخفيف المناسب. عاير الأجسام المضادة النقية (غير المقترنة) وكواشف الخطوة الثانية لتحديد التركيز الأمثل. في حال استخدام جسم مضاد مقترن معتمد من Bioimaging، خففه بنسبة ١:١٠. ٩. أضف ٥٠ ميكرولتر من الجسم المضاد المخفف لكل بئر، وحضّن لمدة ٦٠ دقيقة في درجة حرارة الغرفة. حضّن في الظلام في حال استخدام أجسام مضادة موسومة بالفلورسنت. ١٠. أزل الجسم المضاد، واغسل الآبار ثلاث مرات بـ ١٠٠ ميكرولتر من محلول الغسل. يمكن إضافة غسل اختياري بمنظف (100 ميكرولتر من محلول توين 0.05% في محلول فوسفات ملحي 1×) قبل خطوات الغسل المعتادة. 11. إذا كان الجسم المضاد المستخدم موسومًا بصبغة فلورية، فانتقل إلى الخطوة 12. أما إذا كنت تستخدم جسمًا مضادًا نقيًا غير موسوم، فكرر الخطوات من 8 إلى 10 باستخدام كاشف الخطوة الثانية الموسوم بصبغة فلورية للكشف عن الجسم المضاد النقي. 12. بعد الغسل الأخير، قم بتلوين النوى بإضافة 100 ميكرولتر من محلول هوكست 33342 (رقم المنتج 561908) بتركيز 2 ميكروغرام/مل في محلول فوسفات ملحي 1× إلى كل بئر قبل التصوير بـ 15 دقيقة على الأقل. 13. اعرض الخلايا وحللها باستخدام جهاز تصوير مناسب. المرشحات الموصى بها لأجهزة BD Pathway™ هي: مرشح الإثارة، مرشح الانبعاث، مرشح ثنائي اللون BD Pathway 855 548/20 570LP Fura/FITC، مرشح BD Pathway 435 543/22 593/40 FF562
إشعارات المنتج: يُرجى الرجوع إلى www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية. تم تخفيف هذا الكاشف مسبقًا للاستخدام بالحجم الموصى به لكل اختبار عند اتباع إجراء الفحص الموصى به. يتكون الاختبار عادةً من حوالي 10000 خلية مزروعة في بئر من صفيحة تصوير ذات 96 بئرًا. تُباع مُقترنات الأجسام المضادة المصبوغة بصبغات Alexa Fluor® و Pacific Blue™ و Cascade Blue® في هذا المنتج بموجب ترخيص من شركة Molecular Probes, Inc. للاستخدام البحثي فقط، باستثناء استخدامها مع المصفوفات الدقيقة، أو ككواشف خاصة بالمادة المُحللة. صبغات Alexa Fluor® (باستثناء Alexa Fluor® 430) وصبغة Pacific Blue™ وصبغة Cascade Blue® محمية ببراءات اختراع قيد الانتظار وصادرة. Alexa Fluor® هي علامة تجارية مسجلة لشركة Molecular Probes, Inc.، يوجين، أوريغون. تحذير: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. لذا، يُرجى تخفيف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية، وتقع في الولايات المتحدة. يجب استخدام عينة تحكم متماثلة النمط بنفس تركيز الجسم المضاد المطلوب. للاطلاع على أطياف الفلوركروم وإعدادات الجهاز المناسبة، يُرجى زيارة صفحة قياس التدفق الخلوي متعدد الألوان على موقعنا الإلكتروني www.bdbiosciences.com/colors. تريتون هي علامة تجارية لشركة داو كيميكال. قد لا يكون التفاعل المتبادل بين الأنواع الذي تم اكتشافه أثناء تطوير المنتج قد تم تأكيده في جميع الأشكال و/أو التطبيقات.