BD، 560082، BD Pharmingen™ PE مضاد FoxP3 بشري للفأر

الاسم البديل: سكورفين؛ IPEX؛ JM2؛ AIID؛ XPID؛ DIETER؛ PIDX
التفاعل: الإنسان (اختبار مراقبة الجودة)، قرد الريسوس، قرد المكاك، قرد البابون (تم اختباره أثناء التطوير)
النمط المصلي: IgG1 للفأر BALB/c
المستضد: FoxP3
التطبيق: التلوين داخل الخلايا (قياس التدفق الخلوي) (يتم اختباره بشكل روتيني)
حجم العينة لكل اختبار: 20 ميكرولتر
RRID: AB_1645508
محلول التخزين: محلول مائي منظم يحتوي على BSA و ≤0.09% أزيد الصوديوم.
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
التحضير والتخزين: يُحفظ غير مخفف في درجة حرارة 4 درجات مئوية، ويُحفظ بعيدًا عن الضوء لفترات طويلة. لا يُجمد. تم تنقية الجسم المضاد أحادي النسيلة من سائل مزرعة الأنسجة أو السائل الاستسقائي باستخدام كروماتوغرافيا التقارب. تم ربط الجسم المضاد بـ R-PE في ظل الظروف المثلى، وتمت إزالة الجسم المضاد غير المرتبط وPE الحر.
إجراءات الفحص الموصى بها: إجراءات تحضير الخلايا وتلوينها باستخدام الأجسام المضادة المُقترنة لبروتين FoxP3 البشري 1. اترك المحاليل المنظمة لتصل إلى درجة حرارة الغرفة قبل الاستخدام. حضّر محاليل العمل من مجموعة محاليل BD Pharmingen Human FoxP3 Buffer Set، رقم المنتج 560098. (للحصول على تفاصيل حول تحضير المحلولين A وC، يُرجى مراجعة ورقة البيانات الفنية للمنتج رقم 560098). 2. حضّر خلايا الدم المحيطية أحادية النواة البشرية (PBMC). خفف الخلايا باستخدام محلول التلوين BD Pharmingen Stain Buffer (FBS)* إلى تركيز 1 × 10^7 خلية/مل. 3. ضع كمية مناسبة من كاشف التلوين السطحي في قاع كل أنبوب (12 × 75 مم). 4. أضف 100 ميكرولتر من الخلايا إلى كل أنبوب، ثم رجّها جيدًا، واحضنها لمدة 20 دقيقة في درجة حرارة الغرفة بعيدًا عن الضوء. 5. أضف 2 مل من محلول الغسل. 1. قم بالطرد المركزي عند 250 × g لمدة 10 دقائق، ثم أزل محلول الغسل. 2. لتثبيت الخلايا، أعد تعليق الراسب برفق في الحجم المتبقي من محلول الغسل، ثم أضف 2 مل من محلول الغسل البشري FoxP3 A بتركيز 1x. رجّ جيداً. حضّن لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة في الظلام. 3. قم بالطرد المركزي عند 500 × g لمدة 5 دقائق، ثم أزل المُثبِّت. تنبيه: انتبه إلى أن الراسب طافٍ. 4. لغسل الخلايا، أعد تعليق كل راسب في 2 مل من محلول التلوين BD Pharmingen (FBS)*، ثم قم بالطرد المركزي عند 500 × g لمدة 5 دقائق. أزل محلول الغسل. 5. لزيادة نفاذية الخلايا، أعد تعليق الراسب برفق في الحجم المتبقي من محلول الغسل، ثم أضف 0.5 مل من محلول الغسل البشري FoxP3 C بتركيز 1x إلى كل أنبوب. رجّ جيداً. حضّن لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة بعيدًا عن الضوء. 10. لغسل الخلايا، أضف 2 مل من محلول التلوين BD Pharmingen (FBS)* إلى كل أنبوب، ثم قم بالطرد المركزي بسرعة 500 × g لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة. أزل المحلول وكرر خطوة الغسل. أزل المحلول مرة أخرى. 11. أضف الجسم المضاد FoxP3 المقترن بتركيزات مناسبة لإعادة تعليق الراسب. رجّ برفق أو استخدم جهاز الخلط الدوامي. 12. حضّن لمدة 30 دقيقة في الظلام في درجة حرارة الغرفة. 13. كرر خطوة الغسل رقم 10. 14. أعد تعليق الخلايا في محلول الغسل وحللها فورًا. اختياري: أضف 300 ميكرولتر من الفورمالديهايد بتركيز 1% في محلول ملحي فوسفاتي (PBS) بتركيز 1x، وخزّن عند درجة حرارة 4 درجات مئوية. حلل الخلايا خلال 24 ساعة. * نوصي باستخدام محلول التلوين BD Pharmingen (FBS؛ رقم المنتج 554656) لجميع خطوات الغسل، وتغطية الأنابيب بأغطية أو غشاء بارافين أثناء خطوات الحضانة. كما نوصي بضبط جهد التشتت الأمامي والجانبي لتصوير الخلايا الليمفاوية بشكل منفصل عن الحطام، وبقايا خلايا الدم الحمراء، و/أو الصفائح الدموية قبل التصوير. ** احصل على ما لا يقل عن 15000 إلى 25000 خلية ليمفاوية موجبة لـ CD4.
ملاحظات المنتج: تم تخفيف هذا الكاشف مسبقًا للاستخدام بالحجم الموصى به لكل اختبار. نستخدم عادةً 1 × 10^6 خلية في عينة تجريبية بحجم 100 ميكرولتر (اختبار). للاطلاع على أطياف الفلوركروم وإعدادات الجهاز المناسبة، يُرجى زيارة صفحة قياس التدفق الخلوي متعدد الألوان على موقعنا الإلكتروني www.bdbiosciences.com/colors. تحذير: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. خفف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية تقع في الولايات المتحدة. يُرجى مراجعة www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية.