BD، 560217، BD Pharmingen™ Alexa Fluor® 488 Mouse anti-Oct3/4

الاسم البديل: Oct3، OTF3، Oct4، OTF4، POU5F1
التفاعل: بشري (اختبار مراقبة الجودة)، فأر (تم تأكيد التفاعل أثناء التطوير)
النمط المصلي: IgG1 الفأري، κ
المستضد: بروتين Oct3 الفأري المؤتلف، الأحماض الأمينية 252-372
التطبيق: التصوير الحيوي (يتم اختباره بشكل روتيني)
حجم العينة لكل اختبار: 5 ميكرولتر
RRID: AB_1645305
محلول التخزين: محلول مائي منظم يحتوي على BSA ومثبت البروتين و ≤0.09% أزيد الصوديوم.
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
التحضير والتخزين: تم تنقية الجسم المضاد أحادي النسيلة من سائل مزرعة الأنسجة أو السائل الاستسقائي باستخدام كروماتوغرافيا التقارب. تم ربط الجسم المضاد بصبغة أليكسا فلور® 488 في ظل الظروف المثلى، وتمت إزالة صبغة أليكسا فلور® 488 غير المتفاعلة. يُحفظ غير مخفف في درجة حرارة 4 درجات مئوية، ويُحفظ بعيدًا عن الضوء لفترات طويلة. لا يُجمد.
إجراءات الفحص الموصى بها: 1. ازرع الخلايا في وسط زراعة مناسب بكثافة خلوية مناسبة في صفيحة تصوير BD Falcon™ ذات 96 بئرًا (رقم المنتج 353219)، واتركها في الحضانة من ليلة إلى 48 ساعة. 2. أزل وسط الزراعة من الآبار، واغسلها (مرة أو مرتين) بـ 100 ميكرولتر من محلول الفوسفات الملحي (PBS) بتركيز 1×. 3. ثبّت الخلايا بإضافة 100 ميكرولتر من الفورمالديهايد الطازج بتركيز 3.7% في محلول الفوسفات الملحي (PBS) أو محلول التثبيت BD Cytofix™ (رقم المنتج 554655) إلى كل بئر، واحضنها لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة. 4. أزل المُثبِّت من الآبار، واغسلها (مرة أو مرتين) بـ 100 ميكرولتر من محلول الفوسفات الملحي (PBS) بتركيز 1×. ٥. نفاذية الخلايا باستخدام الميثانول البارد (أ)، أو Triton™ X-100 (ب)، أو الصابونين (ج): أ. أضف ١٠٠ ميكرولتر من الميثانول بتركيز ٩٠٪ عند درجة حرارة -٢٠ درجة مئوية، أو محلول BD™ Phosflow Perm Buffer III (رقم المنتج ٥٥٨٠٥٠) عند درجة حرارة -٢٠ درجة مئوية، إلى كل بئر، ثم حضّن لمدة ٥ دقائق في درجة حرارة الغرفة. ب. أضف ١٠٠ ميكرولتر من Triton™ X-100 بتركيز ٠.١٪ إلى كل بئر، ثم حضّن لمدة ٥ دقائق في درجة حرارة الغرفة. Triton علامة تجارية مسجلة لشركة Dow Chemical Company. ج. أضف ١٠٠ ميكرولتر من محلول Perm/Wash buffer بتركيز ١× (رقم المنتج ٥٥٤٧٢٣) إلى كل بئر، ثم حضّن لمدة ١٥ إلى ٣٠ دقيقة في درجة حرارة الغرفة. استمر في استخدام محلول Perm/Wash buffer بتركيز ١× لجميع خطوات الغسل والتخفيف اللاحقة. ٦. أزل محلول النفاذية من الآبار، واغسل مرة أو مرتين باستخدام ١٠٠ ميكرولتر من المحلول المناسب (إما محلول فوسفات ملحي ١× أو محلول النفاذية/الغسل ١×، انظر الخطوة ٥.ج). ٧. خطوة الحجب (اختيارية): أزل محاليل الغسل واحجب الخلايا بإضافة ١٠٠ ميكرولتر من محلول الحجب BD Pharmingen™ Stain Buffer (FBS) (رقم المنتج ٥٥٤٦٥٦) أو ٣٪ من مصل بقري جنيني في محلول التخفيف المناسب إلى كل بئر، ثم حضّن لمدة ١٥ إلى ٣٠ دقيقة في درجة حرارة الغرفة. ٨. خفف الجسم المضاد إلى تركيزه الأمثل في محلول التخفيف المناسب. عاير الأجسام المضادة النقية (غير المقترنة) وكواشف الخطوة الثانية لتحديد التركيز الأمثل. في حال استخدام جسم مضاد مقترن معتمد للتصوير الحيوي، خففه بنسبة ١:١٠. ٩. أضف ٥٠ ميكرولتر من الجسم المضاد المخفف لكل بئر، واحضنه لمدة ٦٠ دقيقة في درجة حرارة الغرفة. احضنه في الظلام إذا كنت تستخدم أجسامًا مضادة موسومة بصبغة فلورية. ١٠. أزل الجسم المضاد، واغسل الآبار ثلاث مرات باستخدام ١٠٠ ميكرولتر من محلول الغسل. يمكن إضافة غسل اختياري بمنظف (١٠٠ ميكرولتر من محلول توين ٠٫٠٥٪ في محلول فوسفات ملحي ١×) قبل خطوات الغسل المعتادة. ١١. إذا كان الجسم المضاد المستخدم موسومًا بصبغة فلورية، فانتقل إلى الخطوة ١٢. أما إذا كنت تستخدم جسمًا مضادًا نقيًا غير موسوم، فكرر الخطوات من ٨ إلى ١٠ باستخدام كاشف الخطوة الثانية الموسوم بصبغة فلورية للكشف عن الجسم المضاد النقي. ١٢. بعد الغسلة الأخيرة، قم بتلوين النوى بإضافة ١٠٠ ميكرولتر من محلول هوكست ٣٣٣٤٢ بتركيز ٢ ميكروغرام/مل (مثلًا، سيغما-ألدريتش، رقم المنتج B2261) في محلول فوسفات ملحي (PBS) بتركيز ١× إلى كل بئر قبل ١٥ دقيقة على الأقل من التصوير. ١٣. اعرض الخلايا وحللها باستخدام جهاز تصوير مناسب. المرشحات الموصى بها لأجهزة BD Pathway™ هي: مرشح الإثارة، مرشح الانبعاث، مرشح ثنائي اللون: BD Pathway 855، ٤٨٨/١٠، ٥١٥، مرشح LP Fura/FITC؛ مرشح BD Pathway 435، ٤٨٢/٣٥، ٥٣٦/٤٠، مرشح FF506
إشعارات المنتج: يُرجى الرجوع إلى www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية. تم تخفيف هذا الكاشف مسبقًا للاستخدام بالحجم الموصى به لكل اختبار عند اتباع إجراء الفحص الموصى به. يتكون الاختبار عادةً من حوالي 10000 خلية مزروعة في بئر من صفيحة تصوير ذات 96 بئرًا. تُباع مُقترنات الأجسام المضادة المصبوغة بصبغات Alexa Fluor® و Pacific Blue™ و Cascade Blue® في هذا المنتج بموجب ترخيص من شركة Molecular Probes, Inc. للاستخدام البحثي فقط، باستثناء استخدامها مع المصفوفات الدقيقة، أو ككواشف خاصة بالمادة المُحللة. صبغات Alexa Fluor® (باستثناء Alexa Fluor® 430) وصبغة Pacific Blue™ وصبغة Cascade Blue® محمية ببراءات اختراع قيد الانتظار وصادرة. مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية تقع في الولايات المتحدة. تحذير: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. قم بتخفيف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. Alexa Fluor® علامة تجارية مسجلة لشركة Molecular Probes, Inc.، يوجين، أوريغون.