BD، 560235، BD Pharmingen™ مضاد TAZ نقي من الفئران

الاسم البديل: WWTR1
التفاعل: بشري (اختبار مراقبة الجودة)، فأر (تم اختباره أثناء التطوير)
النمط المصلي: IgG2b، κ للفأر BALB/c
المستضد: بروتين TAZ البشري المؤتلف
التطبيق: لطخة ويسترن (يتم اختبارها بشكل روتيني)، التصوير الحيوي (يتم اختباره أثناء التطوير)
الوزن الجزيئي المستهدف: 49 كيلو دالتون
التركيز: 0.5 ملغم/مل
RRID: AB_1645338
محلول التخزين: محلول مائي منظم يحتوي على ≤0.09% من أزيد الصوديوم.
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
التحضير والتخزين: تم تنقية الجسم المضاد أحادي النسيلة من سائل مزرعة الأنسجة أو السائل الاستسقائي بواسطة كروماتوغرافيا التقارب. يُحفظ غير مخفف عند درجة حرارة 4 درجات مئوية.
إجراءات التحليل الموصى بها: لمزيد من المعلومات، يُرجى الرجوع إلى: http://www.bdbiosciences.com/pharmingen/protocols/Western_Blotting.shtml والتصوير الحيوي: http://www.bdbiosciences.com/pharmingen/protocols/Bioimaging_Certified.shtml البروتوكول الموصى به للتصوير الحيوي: 1. ازرع الخلايا في وسط زراعة مناسب بكثافة خلوية مناسبة في صفيحة تصوير BD Falcon™ ذات 96 بئرًا (رقم المنتج 353219)، وازرعها طوال الليل إلى 48 ساعة. 2. أزل وسط الزراعة من الآبار، واغسلها (مرة أو مرتين) بـ 100 ميكرولتر من محلول الفوسفات الملحي (PBS) بتركيز 1×. 3. ثبّت الخلايا بإضافة 100 ميكرولتر من الفورمالديهايد الطازج بتركيز 3.7% في محلول ملحي فوسفاتي (PBS) أو محلول التثبيت BD Cytofix™ (رقم المنتج 554655) إلى كل بئر، ثم حضّنها لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة. 4. أزل المُثبِّت من الآبار، واغسلها (مرة أو مرتين) بـ 100 ميكرولتر من محلول ملحي فوسفاتي (PBS) بتركيز 1×. 5. اجعل الخلايا نفاذة باستخدام الميثانول البارد (أ)، أو Triton™ X-100 (ب)، أو الصابونين (ج): أ. أضف 100 ميكرولتر من الميثانول بتركيز 90% عند درجة حرارة -20 درجة مئوية أو محلول BD™ Phosflow Perm Buffer III (رقم المنتج 558050) عند درجة حرارة -20 درجة مئوية إلى كل بئر، ثم حضّنها لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة. ب. أضف 100 ميكرولتر من محلول تريتون™ X-100 بتركيز 0.1% إلى كل بئر، ثم حضّن لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة. ج. أضف 100 ميكرولتر من محلول النفاذية/الغسل بتركيز 1× (رقم المنتج 554723) إلى كل بئر، ثم حضّن لمدة 15 إلى 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. استمر في استخدام محلول النفاذية/الغسل بتركيز 1× لجميع خطوات الغسل والتخفيف اللاحقة. 6. أزل محلول النفاذية من الآبار، واغسل مرة أو مرتين باستخدام 100 ميكرولتر من المحلول المناسب (إما محلول فوسفات ملحي بتركيز 1× أو محلول النفاذية/الغسل بتركيز 1×، انظر الخطوة 5.ج). ٧. خطوة الحجب الاختيارية: أزل محاليل الغسل، واحجب الخلايا بإضافة ١٠٠ ميكرولتر من محلول الحجب BD Pharmingen™ Stain Buffer (FBS) (رقم المنتج ٥٥٤٦٥٦) أو ٣٪ من مصل بقري جنيني في محلول التخفيف المناسب إلى كل بئر، ثم حضّن لمدة ١٥ إلى ٣٠ دقيقة في درجة حرارة الغرفة. ٨. خفف الجسم المضاد إلى تركيزه الأمثل في محلول التخفيف المناسب. عاير الأجسام المضادة النقية (غير المقترنة) وكواشف الخطوة الثانية لتحديد التركيز الأمثل. في حال استخدام جسم مضاد مقترن معتمد من Bioimaging، خففه بنسبة ١:١٠. ٩. أضف ٥٠ ميكرولتر من الجسم المضاد المخفف لكل بئر، وحضّن لمدة ٦٠ دقيقة في درجة حرارة الغرفة. حضّن في الظلام في حال استخدام أجسام مضادة موسومة بالفلورسنت. ١٠. أزل الجسم المضاد، واغسل الآبار ثلاث مرات بـ ١٠٠ ميكرولتر من محلول الغسل. يمكن إضافة غسل اختياري بمنظف (100 ميكرولتر من محلول توين 0.05% في محلول فوسفات ملحي 1×) قبل خطوات الغسل المعتادة. 11. إذا كان الجسم المضاد المستخدم موسومًا بصبغة فلورية، فانتقل إلى الخطوة 12. أما إذا كنت تستخدم جسمًا مضادًا نقيًا غير موسوم، فكرر الخطوات من 8 إلى 10 باستخدام كاشف الخطوة الثانية الموسوم بصبغة فلورية للكشف عن الجسم المضاد النقي. 12. بعد الغسل الأخير، قم بتلوين النوى بإضافة 100 ميكرولتر من محلول هوكست 33342 بتركيز 2 ميكروغرام/مل (مثلًا، سيغما-ألدريتش، رقم المنتج B2261) في محلول فوسفات ملحي 1× إلى كل بئر قبل التصوير بـ 15 دقيقة على الأقل. 13. اعرض الخلايا وحللها باستخدام جهاز تصوير مناسب.
ملاحظات المنتج: نظرًا لاختلاف التطبيقات، ينبغي على كل باحث معايرة الكاشف للحصول على أفضل النتائج. يُرجى الرجوع إلى www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية. تحذير: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. خفف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. تريتون علامة تجارية لشركة داو كيميكال. تم تطوير هذا الجسم المضاد واعتماده لتطبيقات التصوير الحيوي. مع ذلك، لا يُجرى اختبار التصوير الحيوي الروتيني على كل دفعة. يُنصح الباحثون بمعايرة الكاشف للحصول على أفضل أداء.