BD، 560259، BD Pharmingen™ مضاد نانوي نقي للفأر

التفاعل: الفأر (اختبار مراقبة الجودة)
النمط المصلي: IgG1، κ للفأر BALB/c
المستضد: بروتين نانوغ المؤتلف للفأر
التطبيق: التصوير الحيوي، لطخة ويسترن (يتم اختبارها بشكل روتيني)
الوزن الجزيئي المستهدف: 42 كيلو دالتون
التركيز: 0.5 ملغم/مل
RRID: AB_1645261
محلول التخزين: محلول مائي منظم يحتوي على ≤0.09% من أزيد الصوديوم.
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
التحضير والتخزين: يُحفظ غير مخفف عند درجة حرارة 4 درجات مئوية. تم تنقية الجسم المضاد أحادي النسيلة من سائل مزرعة الأنسجة أو السائل الاستسقائي بواسطة كروماتوغرافيا التقارب.
إجراءات التحليل الموصى بها: لمزيد من المعلومات حول تطبيقات تقنية ويسترن بلوت والتصوير الحيوي، يُرجى الرجوع إلى قسم "موارد التطبيقات" على موقعنا الإلكتروني: www.bdbiosciences.com/us/s/resources. البروتوكول الموصى به للتصوير الحيوي: 1. ازرع الخلايا في وسط زراعة مناسب بكثافة خلوية مناسبة في صفيحة تصوير ذات 96 بئرًا، واتركها تُزرع من ليلة إلى 48 ساعة. 2. أزل وسط الزراعة من الآبار، واغسلها (مرة أو مرتين) بـ 100 ميكرولتر من محلول الفوسفات الملحي (PBS) بتركيز 1×. 3. ثبّت الخلايا بإضافة 100 ميكرولتر من الفورمالديهايد الطازج بتركيز 3.7% في محلول الفوسفات الملحي (PBS) أو محلول التثبيت BD Cytofix™ (رقم المنتج 554655) إلى كل بئر، ثم حضّنها لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة. ٤. أزل المُثبِّت من الآبار، واغسلها (مرة أو مرتين) بـ ١٠٠ ميكرولتر من محلول الفوسفات الملحي (PBS) بتركيز ١×. ٥. اجعل الخلايا نفاذة باستخدام الميثانول البارد (أ)، أو تريتون™ X-100 (ب)، أو الصابونين (ج): أ. أضف ١٠٠ ميكرولتر من ميثانول ٩٠٪ عند درجة حرارة -٢٠ درجة مئوية أو محلول BD™ Phosflow Perm Buffer III (رقم المنتج ٥٥٨٠٥٠) عند درجة حرارة -٢٠ درجة مئوية إلى كل بئر، واحضنها لمدة ٥ دقائق في درجة حرارة الغرفة. ب. أضف ١٠٠ ميكرولتر من تريتون™ X-100 بتركيز ٠.١٪ إلى كل بئر، واحضنها لمدة ٥ دقائق في درجة حرارة الغرفة. ج. أضف ١٠٠ ميكرولتر من محلول Perm/Wash buffer بتركيز ١× (رقم المنتج ٥٥٤٧٢٣) إلى كل بئر، واحضنها لمدة ١٥ إلى ٣٠ دقيقة في درجة حرارة الغرفة. استمر في استخدام محلول النفاذية/الغسل بتركيز 1× لجميع خطوات الغسل والتخفيف اللاحقة. 6. أزل محلول النفاذية من الآبار، واغسل مرة أو مرتين باستخدام 100 ميكرولتر من المحلول المناسب (إما محلول فوسفات ملحي بتركيز 1× أو محلول النفاذية/الغسل بتركيز 1×، انظر الخطوة 5ج). 7. خطوة الحجب (اختيارية): أزل محاليل الغسل، واحجب الخلايا بإضافة 100 ميكرولتر من محلول الحجب BD Pharmingen™ Stain Buffer (FBS) (رقم المنتج 554656) أو 3% من مصل بقري جنيني في محلول التخفيف المناسب إلى كل بئر، ثم حضّن لمدة 15 إلى 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. 8. خفف الجسم المضاد إلى تركيزه الأمثل في محلول التخفيف المناسب. عاير الأجسام المضادة النقية (غير المقترنة) وكواشف الخطوة الثانية لتحديد التركيز الأمثل. في حال استخدام جسم مضاد مقترن معتمد للتصوير الحيوي، خففه بنسبة 1:10. ٩. أضف ٥٠ ميكرولتر من الجسم المضاد المخفف لكل بئر، واحضنه لمدة ٦٠ دقيقة في درجة حرارة الغرفة. احضنه في الظلام إذا كنت تستخدم أجسامًا مضادة موسومة بصبغة فلورية. ١٠. أزل الجسم المضاد، واغسل الآبار ثلاث مرات باستخدام ١٠٠ ميكرولتر من محلول الغسل. يمكن إضافة غسل اختياري بمنظف (١٠٠ ميكرولتر من محلول توين ٠٫٠٥٪ في محلول فوسفات ملحي ١×) قبل خطوات الغسل المعتادة. ١١. إذا كان الجسم المضاد المستخدم موسومًا بصبغة فلورية، فانتقل إلى الخطوة ١٢. أما إذا كنت تستخدم جسمًا مضادًا نقيًا غير موسوم، فكرر الخطوات من ٨ إلى ١٠ باستخدام كاشف الخطوة الثانية الموسوم بصبغة فلورية للكشف عن الجسم المضاد النقي. ١٢. بعد الغسلة الأخيرة، قم بتلوين النوى بإضافة ١٠٠ ميكرولتر من محلول هوكست ٣٣٣٤٢ بتركيز ٢ ميكروغرام/مل (مثلًا، سيغما-ألدريتش، رقم المنتج B2261) في محلول فوسفات ملحي (PBS) بتركيز ١× إلى كل بئر قبل ١٥ دقيقة على الأقل من التصوير. ١٣. اعرض الخلايا وحللها باستخدام جهاز تصوير مناسب.
إشعارات المنتج: نظرًا لاختلاف التطبيقات، ينبغي على كل باحث معايرة الكاشف للحصول على أفضل النتائج. يجب استخدام عنصر تحكم متماثل النمط بنفس تركيز الجسم المضاد المطلوب. تحذير: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. خفف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. للاطلاع على أطياف الفلوركروم وإعدادات الجهاز المناسبة، يرجى زيارة صفحة قياس التدفق الخلوي متعدد الألوان على موقعنا الإلكتروني www.bdbiosciences.com/colors. تريتون هي علامة تجارية لشركة داو كيميكال. يرجى زيارة http://regdocs.bd.com للاطلاع على صحائف بيانات السلامة (SDS). أزيد الصوديوم مثبط عكسي لعملية الأيض التأكسدي؛ لذلك، يجب عدم استخدام مستحضرات الأجسام المضادة التي تحتوي على هذه المادة الحافظة في مزارع الخلايا أو حقنها في الحيوانات. يمكن إزالة أزيد الصوديوم بغسل الخلايا المصبوغة أو الأجسام المضادة المرتبطة بالصفيحة، أو بغسل الأجسام المضادة الذائبة في محلول منظم خالٍ من أزيد الصوديوم. ولأن السموم الداخلية قد تؤثر أيضًا على نتائج الدراسات الوظيفية، نوصي باستخدام الأجسام المضادة من نوع NA/LE (خالية من الأزيد/منخفضة السموم الداخلية)، إن توفرت، للاستخدام في المختبر وفي الجسم الحي. Alexa Fluor® علامة تجارية مسجلة لشركة Molecular Probes, Inc.، يوجين، أوريغون. يُرجى مراجعة www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية.