BD، 560327، BD Pharmingen™ مضاد GATA4 نقي من الفئران

الاسم البديل: MGC126629، GATA-4
التفاعل: الفأر (اختبار مراقبة الجودة)، الإنسان (تم الإبلاغ عنه)
النمط المصلي: IgG1، κ للفأر BALB/c
المستضد: ببتيد GATA4 البشري
التطبيق: لطخة ويسترن (يتم اختبارها بشكل روتيني)، التصوير الحيوي (يتم اختباره أثناء التطوير)
الوزن الجزيئي المستهدف: 42 - 50 كيلو دالتون
التركيز: 0.5 ملغم/مل
RRID: AB_1645188
محلول التخزين: محلول مائي منظم يحتوي على ≤0.09% من أزيد الصوديوم.
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
التحضير والتخزين: يُحفظ غير مخفف عند درجة حرارة 4 درجات مئوية. تم تنقية الجسم المضاد أحادي النسيلة من سائل مزرعة الأنسجة أو السائل الاستسقائي بواسطة كروماتوغرافيا التقارب.
إجراءات التحليل الموصى بها: لمزيد من المعلومات، يُرجى الرجوع إلى: http://www.bdbiosciences.com/pharmingen/protocols/Western_Blotting.shtml والتصوير الحيوي: http://www.bdbiosciences.com/pharmingen/protocols/Bioimaging_Certified.shtml البروتوكول الموصى به للتصوير الحيوي: 1. ازرع الخلايا في وسط زراعة مناسب بكثافة خلوية مناسبة في صفيحة تصوير BD Falcon™ ذات 96 بئرًا (رقم المنتج 353219)، وازرعها طوال الليل إلى 48 ساعة. 2. أزل وسط الزراعة من الآبار، واغسلها (مرة أو مرتين) بـ 100 ميكرولتر من محلول الفوسفات الملحي (PBS) بتركيز 1×. 3. ثبّت الخلايا بإضافة 100 ميكرولتر من الفورمالديهايد الطازج بتركيز 3.7% في محلول ملحي فوسفاتي (PBS) أو محلول التثبيت BD Cytofix™ (رقم المنتج 554655) إلى كل بئر، ثم حضّنها لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة. 4. أزل المُثبِّت من الآبار، واغسلها (مرة أو مرتين) بـ 100 ميكرولتر من محلول ملحي فوسفاتي (PBS) بتركيز 1×. 5. اجعل الخلايا نفاذة باستخدام الميثانول البارد (أ)، أو Triton™ X-100 (ب)، أو الصابونين (ج): أ. أضف 100 ميكرولتر من الميثانول بتركيز 90% عند درجة حرارة -20 درجة مئوية أو محلول BD™ Phosflow Perm Buffer III (رقم المنتج 558050) عند درجة حرارة -20 درجة مئوية إلى كل بئر، ثم حضّنها لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة. ب. أضف 100 ميكرولتر من محلول تريتون™ X-100 بتركيز 0.1% إلى كل بئر، ثم حضّن لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة. ج. أضف 100 ميكرولتر من محلول النفاذية/الغسل بتركيز 1× (رقم المنتج 554723) إلى كل بئر، ثم حضّن لمدة 15 إلى 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. استمر في استخدام محلول النفاذية/الغسل بتركيز 1× لجميع خطوات الغسل والتخفيف اللاحقة. 6. أزل محلول النفاذية من الآبار، واغسل مرة أو مرتين باستخدام 100 ميكرولتر من المحلول المناسب (إما محلول فوسفات ملحي بتركيز 1× أو محلول النفاذية/الغسل بتركيز 1×، انظر الخطوة 5.ج). ٧. خطوة الحجب الاختيارية: أزل محاليل الغسل، واحجب الخلايا بإضافة ١٠٠ ميكرولتر من محلول الحجب BD Pharmingen™ Stain Buffer (FBS) (رقم المنتج ٥٥٤٦٥٦) أو ٣٪ FBS في محلول التخفيف المناسب إلى كل بئر، ثم حضّن لمدة ١٥ إلى ٣٠ دقيقة في درجة حرارة الغرفة. ٨. خفف الجسم المضاد إلى تركيزه الأمثل في محلول التخفيف المناسب. عاير الأجسام المضادة النقية (غير المقترنة) وكواشف الخطوة الثانية لتحديد التركيز الأمثل. في حال استخدام جسم مضاد مقترن معتمد من Bioimaging، خففه بنسبة ١:١٠. ٩. أضف ٥٠ ميكرولتر من الجسم المضاد المخفف لكل بئر، وحضّن لمدة ٦٠ دقيقة في درجة حرارة الغرفة. حضّن في الظلام في حال استخدام أجسام مضادة موسومة بالفلورسنت. ١٠. أزل الجسم المضاد، واغسل الآبار ثلاث مرات بـ ١٠٠ ميكرولتر من محلول الغسل. يمكن إضافة غسل اختياري بمنظف (100 ميكرولتر من محلول توين 0.05% في محلول فوسفات ملحي 1×) قبل خطوات الغسل المعتادة. 11. إذا كان الجسم المضاد المستخدم موسومًا بصبغة فلورية، فانتقل إلى الخطوة 12. وإلا، إذا كنت تستخدم جسمًا مضادًا نقيًا غير موسوم، فكرر الخطوات من 8 إلى 10 باستخدام كاشف الخطوة الثانية الموسوم بصبغة فلورية للكشف عن الجسم المضاد النقي. 12. بعد الغسل الأخير، قم بتلوين النوى بشكل معاكس بإضافة 100 ميكرولتر من محلول هوكست 33342 بتركيز 2 ميكروغرام/مل (مثلًا، سيغما-ألدريتش، رقم المنتج B2261) في محلول فوسفات ملحي 1× إلى كل بئر قبل التصوير بـ 15 دقيقة على الأقل. 13. اعرض الخلايا وحللها باستخدام جهاز تصوير مناسب. إجراء الفحص الموصى به لشرائح الأنسجة: 1. استخلص الأعضاء أو الأنسجة المستهدفة واغسلها بمحلول فوسفات ملحي. ٢. ضع الأنسجة في الكاسيتات وثبّتها بمحلول فورمالين متعادل مخفف بنسبة ١٠٪ (Fisher SF100-4) لمدة ١٦ ساعة. ٣. أزل المُثبِّت وتابع عملية المعالجة والتضمين في البارافين باستخدام البروتوكولات القياسية.* ٤. قُطِّع شرائح الأنسجة المُضمَّنة في البارافين (٥ ميكرومتر) باستخدام الميكروتوم، وألصق الشرائح على شرائح زجاجية ملونة (Fisher 12-550-17)، واتركها تجف في الهواء.* ٥. أزل البارافين وأعد ترطيب الشرائح.* ٦. عالج الشرائح بمحلول BD Retrievagen A (رقم المنتج ٥٥٠٥٢٤) عن طريق تسخينها في قدر ضغط عند ١٢١ درجة مئوية لمدة ١٥ دقيقة عند ضغط ١٧ رطل لكل بوصة مربعة.* ٧. اترك الشرائح تبرد إلى درجة حرارة الغرفة في محلول Retrievagen A، ثم اشطفها بماء الصنبور، واحفظها في محلول ملحي فوسفاتي قبل تلوينها بالأجسام المضادة. ٨. يمكن تلوين المقاطع في آنٍ واحد بمزيج من الأجسام المضادة المتعددة بتركيز مُحسَّن مسبقًا، لمدة ساعتين في درجة حرارة الغرفة. ٩. اغسل المقاطع بمحلول فوسفات ملحي (PBS) بتركيز ١×. ١٠. إذا لزم الأمر، قم بتوسيم الحمض النووي الخلوي باستخدام ٢ ميكروغرام/مل من صبغة هوكست ٣٣٣٤٢ لمدة ٣٠ دقيقة، ثم اغسله بمحلول فوسفات ملحي (PBS) بتركيز ١×. ١١. ضع الشرائح الزجاجية على المقاطع باستخدام جهاز Aqua-Mount (Lerner Labs ١٣٨٠٠). ١٢. اعرض العينات وحللها باستخدام جهاز تصوير مناسب، مثل نظام التصوير الحيوي عالي المحتوى BD Pathway™ ٤٣٥. * لمزيد من التفاصيل، يُرجى زيارة الرابط التالي: http://www.bdbiosciences.com/pharmingen/protocols/Paraffin_Sections.shtml
ملاحظات المنتج: نظرًا لاختلاف التطبيقات، ينبغي على كل باحث معايرة الكاشف للحصول على أفضل النتائج. يُرجى الرجوع إلى www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية. تم تطوير هذا الجسم المضاد واعتماده لتطبيقات التصوير الحيوي. مع ذلك، لا يُجرى اختبار التصوير الحيوي الروتيني على كل دفعة. يُنصح الباحثون بمعايرة الكاشف للحصول على أفضل أداء. تحذير: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. خفف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. تريتون علامة تجارية لشركة داو كيميكال.