BD، 560409، مجموعة BD Pharmingen™ لمخازن بيانات Foxp3 للفئران

التطبيق: التلوين داخل الخلايا (قياس التدفق الخلوي) (يتم اختباره بشكل روتيني)
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
RRID: AB_2869340
الوصف: تم تحسين مجموعة BD Pharmingen™ Mouse Foxp3 Buffer Set للاستخدام مع مستنسخ Foxp3 mAb MF23. وهي مخصصة لتثبيت ونفاذية الخلايا الليمفاوية للفئران من أجل التلوين داخل الخلايا لبروتين Foxp3 الخاص بالفئران والتلوين السطحي لعلامات CD المناسبة.
التحضير والتخزين: يُحفظ غير مخفف عند درجة حرارة 4 درجات مئوية.
إجراءات الفحص الموصى بها: مُركّز تثبيت Foxp3 للفأر (20x) (المكون 51-9006124): 10 مل. يُحفظ في درجة حرارة 4 درجات مئوية ويُحفظ بعيدًا عن الضوء لفترات طويلة. هذا محلول مركز 20x يجب تخفيفه قبل الاستخدام باستخدام محلول فوسفات ملحي عادي 1x بدون مصل بقري جنيني. تحضير محلول التثبيت 1x: يُخفف جزء واحد من مُركّز التثبيت مع 19 جزءًا من محلول فوسفات ملحي 1x. يُحضر 2 مل لكل اختبار (1x10^6 خلية). يُوضع على الثلج. لا يُخزن محلول التثبيت 1x، بل يُحضر طازجًا في كل مرة. مُركّز نفاذية Foxp3 للفأر (5x) (المكون 51-9006125): 80 مل. يُحفظ في درجة حرارة 4 درجات مئوية. هذا محلول مركز 5x يجب تخفيفه قبل الاستخدام باستخدام محلول فوسفات ملحي عادي 1x بدون مصل بقري جنيني. تحضير محلول النفاذية بتركيز 1×: خفف جزءًا واحدًا من مُركّز النفاذية بأربعة أجزاء من محلول الفوسفات الملحي (PBS) بتركيز 1×. حضّر 4 مل لكل اختبار (1×10^6 خلية). سخّن المحلول مسبقًا إلى 37 درجة مئوية قبل الاستخدام. لا تخزّن محلول النفاذية بتركيز 1×، بل حضّره طازجًا في كل مرة. إجراءات تحضير الخلايا وتلوينها للأجسام المضادة المُقترنة لبروتين Foxp3 المضاد للفأر: 1. حضّر معلقًا خلويًا أحاديًا من النسيج اللمفاوي المحيطي المطلوب. أزل تجمعات الخلايا و/أو الحطام بتمرير المعلق عبر مصفاة خلايا من النايلون Falcon® بمسام 70 ميكرومتر (رقم المنتج من Corning: 352235). استخدم محلول التحلل BD PharmLyse™ بتركيز 1× (رقم المنتج: 555899) لتحليل خلايا الدم الحمراء إذا لزم الأمر. 1. خفف الخلايا باستخدام محلول التلوين BD Pharmingen™ (FBS، رقم المنتج 554656) إلى تركيز 10 ملايين خلية/مل. 2. ضع كمية مناسبة من كاشف CD4 أو أي كاشف تلوين سطحي آخر في قاع كل أنبوب (12 × 75 مم). 3. أضف 100 ميكرولتر من الخلايا إلى كل أنبوب، واخلط جيدًا. حضّن لمدة 20 دقيقة في درجة حرارة الغرفة في الظلام. 4. لغسل الخلايا، أضف 2 مل من محلول التلوين BD Pharmingen™ (FBS) إلى كل أنبوب. قم بالطرد المركزي بسرعة 250 × g لمدة 10 دقائق، ثم أزل المحلول. 5. لتثبيت الخلايا، أعد تعليق الراسب برفق في الحجم المتبقي من محلول التلوين، ثم أضف 2 مل من محلول تثبيت Foxp3 الفأري البارد BD Pharmingen™ المحضر حديثًا بتركيز 1×. اخلط جيدًا. حضّن لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة 4 مئوية في الظلام. ٦. قم بالطرد المركزي بسرعة ٥٠٠ × جم لمدة ٥ دقائق، ثم أزل المُثبِّت. ٧. لغسل الخلايا، أعد تعليق كل راسب في ٢ مل من محلول BD Pharmingen™ Mouse Foxp3 Permeabilization buffer المُحضر حديثًا والمُسخن مسبقًا بتركيز ١×، ثم قم بالطرد المركزي بسرعة ٥٠٠ × جم لمدة ٥ دقائق. أزل محلول النفاذية. ٨. لزيادة نفاذية الخلايا، أعد تعليق الراسب برفق في ٢ مل أخرى من محلول BD Pharmingen™ Mouse Foxp3 Permeabilization buffer المُحضر حديثًا والمُسخن مسبقًا بتركيز ١×. حضّن لمدة ٣٠ دقيقة عند ٣٧ درجة مئوية في الظلام. ٩. قم بالطرد المركزي بسرعة ٥٠٠ × جم لمدة ٥ دقائق، ثم أزل المحلول. ١٠. لغسل الخلايا، أضف ٢ مل من محلول BD Pharmingen™ Stain Buffer (FBS) إلى كل أنبوب، ثم قم بالطرد المركزي بسرعة ٥٠٠ × جم لمدة ٥ دقائق. أزل المحلول. ١١. أضف ٢٠ ميكرولتر من الأجسام المضادة Foxp3 المقترنة والمخففة بمحلول التلوين BD Pharmingen™ (FBS) بالتركيزات المناسبة (راجع شرح الشكل لكل صيغة لمعرفة التركيز) لإعادة تعليق الراسب. رجّ أو حرّك برفق لفترة وجيزة. ١٢. حضّن لمدة ٢٠ دقيقة في درجة حرارة الغرفة في الظلام. ١٣. كرر خطوة الغسل رقم ١٠ مرتين. ١٤. أعد تعليق الخلايا في ٠.٥ مل من محلول التلوين BD Pharmingen™ (FBS) وحللها فورًا. احصل على ما لا يقل عن ١٥٠٠٠ إلى ٢٥٠٠٠ خلية ليمفاوية موجبة لـ CD4. ملاحظة: يُوصى باستخدام محلول التلوين BD Pharmingen™ لجميع خطوات الغسل وتغطية الأنابيب أثناء خطوات التحضين بأغطية أو غشاء بارافين. كما يُوصى بتحسين جهد التشتت الأمامي والجانبي لتصوير الخلايا الليمفاوية بشكل منفصل عن الحطام وخلايا الدم الحمراء، وما إلى ذلك، قبل التحليل. خطر: يحتوي مُركّز تثبيت Foxp3 للفئران (20x) (المكوّن 51-9006124) على 4.2% فورمالديهايد (وزن/وزن). بيانات المخاطر: ضار عند الاستنشاق. يُسبب تهيج الجلد. يُسبب تلفًا خطيرًا للعين. قد يُسبب رد فعل تحسسي للجلد. يُشتبه في تسببه بعيوب وراثية. قد يُسبب السرطان. طريقة التعرض: الاستنشاق. قد يُسبب تهيجًا في الجهاز التنفسي. بيانات الاحتياطات: ارتدِ ملابس واقية/واقي للعينين. ارتدِ قفازات واقية. لا تستنشق الرذاذ/الأبخرة/البخاخ. في حالة ملامسة العينين: اشطفهما بحذر بالماء لعدة دقائق. أزل العدسات اللاصقة، إن وُجدت وكان من السهل إزالتها. استمر في الشطف. في حالة حدوث تهيج أو طفح جلدي: استشر طبيبًا.
إشعارات المنتج: يرجى الرجوع إلى www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية.
الوصف: الكمية/الحجم: رقم القطعة: معرف EntrezGene
غير متوفر : 100.0 : غير متوفر : غير متوفر