BD، 560414، BD Pharmingen™ PE Rat anti-Mouse Foxp3

الاسم البديل: صندوق رأس الشوكة P3؛ بروتين صندوق رأس الشوكة P3؛ JM2؛ سكرفين؛ سكرفي؛ Sf
التفاعل: الفأر (اختبار مراقبة الجودة)
النمط المصلي: IgG2b، κ للفئران
المستضد: بروتين FoxP3 المؤتلف للفأر
التطبيق: التلوين داخل الخلايا (قياس التدفق الخلوي) (يتم اختباره بشكل روتيني)
التركيز: 0.2 ملغم/مل
RRID: AB_1645251
محلول التخزين: محلول مائي منظم يحتوي على ≤0.09% من أزيد الصوديوم.
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
التحضير والتخزين: تم تنقية الجسم المضاد أحادي النسيلة من سائل مزرعة الأنسجة أو السائل الاستسقائي باستخدام كروماتوغرافيا التقارب. يُحفظ غير مخفف عند درجة حرارة 4 درجات مئوية، ويُحفظ بعيدًا عن الضوء لفترات طويلة. لا يُجمد. تم ربط الجسم المضاد بالصبغة في ظل الظروف المثلى، وتمت إزالة الجسم المضاد غير المرتبط والصبغة الحرة.
إجراءات الفحص الموصى بها: إجراءات تحضير الخلايا وتلوينها باستخدام الأجسام المضادة المقترنة لبروتين Foxp3 في الفئران: 1. تحضير محاليل العمل من مجموعة محاليل BD Pharmingen™ Mouse Foxp3 Buffer Set (رقم المنتج 560409) (للحصول على تفاصيل حول تحضير المحلول، يُرجى مراجعة تعليمات TDS رقم المنتج 560409). 2. تسخين محلول النفاذية مسبقًا إلى 37 درجة مئوية قبل الاستخدام. حفظ محلول التثبيت على الجليد. 3. تحضير معلق خلوي أحادي من النسيج اللمفاوي المحيطي المطلوب. إزالة تكتلات الخلايا و/أو الحطام عن طريق تمرير المعلق عبر مصفاة خلايا من النايلون بمسام 70 ميكرومتر. استخدام محلول BD PharmLyse™ Lysing Buffer (رقم المنتج 555899) بتركيز 1× لتحليل خلايا الدم الحمراء إذا لزم الأمر. خفف الخلايا باستخدام محلول التلوين BD Pharmingen™ (FBS، رقم المنتج 554656) إلى عشرة ملايين خلية/مل. 4. ضع كمية مناسبة من كاشف CD4 أو أي كاشف تلوين سطحي آخر في قاع كل أنبوب (12 × 75 مم). 5. أضف 100 ميكرولتر من الخلايا إلى كل أنبوب، واخلط جيدًا. حضّن لمدة 20 دقيقة في درجة حرارة الغرفة في الظلام. 6. لغسل الخلايا، أضف 2 مل من محلول التلوين BD Pharmingen™ (FBS) إلى كل أنبوب. قم بالطرد المركزي بسرعة 250 × g لمدة 10 دقائق، ثم أزل المحلول. 7. لتثبيت الخلايا، أعد تعليق الراسب برفق في الحجم المتبقي من محلول التلوين، ثم أضف 2 مل من محلول تثبيت Foxp3 الفأري البارد BD Pharmingen™ المحضر حديثًا (1x). اخلط جيدًا. حضّن لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة 4 مئوية في الظلام. ٨. قم بالطرد المركزي بسرعة ٥٠٠ × جم لمدة ٥ دقائق، ثم أزل المُثبِّت. ٩. لغسل الخلايا، أعد تعليق كل راسب في ٢ مل من محلول BD Pharmingen™ Mouse Foxp3 Permeabilization buffer المُحضر حديثًا والمُسخن مسبقًا بتركيز ١×، ثم قم بالطرد المركزي بسرعة ٥٠٠ × جم لمدة ٥ دقائق. أزل محلول النفاذية. ١٠. لزيادة نفاذية الخلايا، أعد تعليق الراسب برفق في ٢ مل أخرى من محلول BD Pharmingen™ Mouse Foxp3 Permeabilization buffer المُحضر حديثًا والمُسخن مسبقًا بتركيز ١×. حضّن لمدة ٣٠ دقيقة عند ٣٧ درجة مئوية في الظلام. ١١. قم بالطرد المركزي بسرعة ٥٠٠ × جم لمدة ٥ دقائق، ثم أزل المحلول. ١٢. لغسل الخلايا، أضف ٢ مل من محلول BD Pharmingen™ Stain Buffer (FBS) إلى كل أنبوب، ثم قم بالطرد المركزي بسرعة ٥٠٠ × جم لمدة ٥ دقائق. أزل المحلول. ١٣. أضف ٢٠ ميكرولتر من الأجسام المضادة Foxp3 المقترنة والمخففة بمحلول التلوين BD Pharmingen™ (FBS) بالتركيزات المناسبة (راجع شرح الشكل لكل صيغة لمعرفة التركيز) لإعادة تعليق الراسب. رجّ أو حرّك برفق لفترة وجيزة. ١٤. حضّن لمدة ٢٠ دقيقة في درجة حرارة الغرفة في الظلام. ١٥. كرر خطوة الغسل رقم ١٢ مرتين. ١٦. أعد تعليق الخلايا في ٠.٥ مل من محلول التلوين BD Pharmingen™ (FBS) وحللها فورًا.* ملاحظة: نوصي باستخدام محلول التلوين BD Pharmingen™ لجميع خطوات الغسل وتغطية الأنابيب بأغطية أو غشاء بارافين أثناء خطوات التحضين. كما نوصي بتحسين جهد التشتت الأمامي والجانبي لتصوير الخلايا الليمفاوية بشكل منفصل عن الحطام وخلايا الدم الحمراء، إلخ، قبل التحليل. * احصل على ما لا يقل عن ١٥٠٠٠ إلى ٢٥٠٠٠ خلية ليمفاوية موجبة لـ CD4. يمكن استخدام خرز BD® CompBeads كبديل لتقييم تداخل الفلورة (التعويض). فعندما ترتبط الأجسام المضادة المقترنة بالفلوركروم بخرز BD® CompBeads، فإنها تُظهر خصائص طيفية مشابهة جدًا للخلايا. مع ذلك، قد توجد اختلافات طفيفة في الانبعاثات الطيفية لبعض الفلوركرومات مقارنةً بالخلايا، مما يؤدي إلى قيم تداخل تختلف عند مقارنتها بالضوابط البيولوجية. يُنصح بشدة، عند استخدام أي كاشف لأول مرة، بمقارنة التداخل على الخلايا وخرز BD® CompBeads للتأكد من ملاءمة خرز BD® CompBeads لتطبيقك الخلوي المحدد.
إشعارات المنتج: نظرًا لاختلاف التطبيقات، ينبغي على كل باحث معايرة الكاشف للحصول على أفضل النتائج. يُرجى مراجعة www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية. للاطلاع على أطياف الفلوركروم وإعدادات الجهاز المناسبة، يُرجى مراجعة صفحة قياس التدفق الخلوي متعدد الألوان على موقعنا الإلكتروني www.bdbiosciences.com/colors. تحذير: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. خفف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. يُرجى مراجعة http://regdocs.bd.com للاطلاع على صحائف بيانات السلامة (SDS).