BD، 560429، مجموعة BD™ المصفوفة الخرزية الخلوية (CBA) لـ TGF-β1 البشري أحادي البليكس فليكس

نطاق القياس: 40-10000 بيكوغرام/مل
التفاعل: الإنسان (اختبار مراقبة الجودة)، الفأر، الجرذ، الخنزير، البقرة (تم الإبلاغ عنه)
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
RRID: AB_2869346
الوصف: مجموعة BD™ Human TGF-β1 Flex هي عبارة عن فحص مناعي قائم على الخرز، قادر على قياس TGF-β1 البشري الذائب في عينات المصل وسوائل مزارع الخلايا. تم تحديد التفاعل البشري عن طريق اختبار العينات باستخدام مجموعة BD CBA Human TGF-β1 Flex. تمت مراجعة بيولوجيا ووظيفة TGF-β1 بشكل موسع في الأدبيات العلمية. مجموعة BD CBA Human TGF-β1 Flex هي فحص أحادي. لا ينبغي استخدام مجموعة BD CBA Human TGF-β1 Flex مع ما يلي: - مجموعات BD CBA Human, Mouse or Rat Soluble Protein Flex - مجموعات BD CBA Cell Signaling Flex - مجموعات BD CBA Human Soluble Receptor Protein Flex - مجموعات BD CBA Human Immunoglobulin Flex - فحوصات غير تابعة لشركة BD تعتمد على الخرز. ملاحظة: لا يُنصح باستخدام عينات البلازما مع هذا الفحص.
إجراءات التحليل الموصى بها: تحضير كاشف تنشيط TGF-β1: يلزم استخدام الكواشف التالية لتنشيط TGF-β1 الكامن إلى شكله المناعي: كواشف لعينات سائل مزرعة الخلايا: 1. حمض الهيدروكلوريك 1N (100 مل) - يُضاف ببطء 8.33 مل من حمض الهيدروكلوريك 12N إلى 91.67 مل من الماء منزوع الأيونات. يُخلط جيداً. 2. هيدروكسيد الصوديوم 1.2N/HEPES 0.5 مولار (100 مل) - يُضاف ببطء 12 مل من هيدروكسيد الصوديوم 10N إلى 75 مل من الماء منزوع الأيونات. يُخلط جيداً. يُضاف 11.9 غرام من HEPES. يُخلط جيداً. يُكمل الحجم النهائي إلى 100 مل بالماء منزوع الأيونات. المواد الكيميائية لعينات المصل: 1. حمض الخليك 2.5 مولار/يوريا 8 مولار (100 مل): يُضاف 48.1 غ من اليوريا ببطء إلى 40 مل من الماء منزوع الأيونات. يُخلط المزيج حتى يذوب. يُضاف 14.4 مل من حمض الخليك الجليدي ببطء. يُخلط جيدًا. يُكمل الحجم النهائي إلى 100 مل بالماء منزوع الأيونات. 2. هيدروكسيد الصوديوم 2.7 مولار/هيبس 1 مولار (100 مل): يُضاف 27 مل من هيدروكسيد الصوديوم 10 مولار ببطء إلى 56 مل من الماء منزوع الأيونات. يُخلط المزيج جيدًا. يُضاف 23.8 غ من هيبس. يُخلط جيدًا. يُكمل الحجم النهائي إلى 100 مل بالماء منزوع الأيونات. تفعيل عينة TGF-β1: لتفعيل TGF-β1 الكامن وتحويله إلى شكله المناعي، يجب تحميض العينات إلى درجة حموضة 3.0 أو أقل لفترة زمنية محددة، ثم إعادة معادلتها إلى درجة حموضة 7.2 - 7.6 قبل الاختبار. استخدم أنابيب بولي بروبيلين. لا تقم بتفعيل معيار Flex Set. التخفيفات الموصى بها هي إرشادات عامة، وقد يلزم تحسينها. تفعيل عينات سائل مزرعة الخلايا: 1. أضف 0.1 مل من حمض الهيدروكلوريك 1 مولار إلى 0.5 مل من العينة واخلط جيدًا. 2. حضّن لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة. 3. عادل بإضافة 0.1 مل من هيدروكسيد الصوديوم 1.2 مولار/HEPES 0.5 مولار واخلط جيدًا. 4. العينة جاهزة الآن للاختبار. 5. يجب ضرب التركيز المحسوب للعينات المستخدمة في التحليل بمعامل تخفيف 1.4. تفعيل عينات المصل: 1. أضف 0.1 مل من حمض الخليك 2.5 مولار/يوريا 8 مولار إلى 0.1 مل من العينة واخلط جيدًا. 2. حضّن لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة. 3. عادل المحلول بإضافة 0.1 مل من هيدروكسيد الصوديوم 2.7 مولار/هيبس 1 مولار واخلط جيدًا. 4. خفف عينات المصل 10 أضعاف باستخدام مخفف الفحص قبل إجراء الفحص. 5. يجب ضرب التركيز المحسوب للعينات المستخدمة في الفحص بمعامل تخفيف 30. ملاحظة: يُعد TGF-β1 محفوظًا بدرجة عالية بين الأنواع، ويتفاعل هذا الفحص بشكل متقاطع مع أنواع متعددة، بما في ذلك الفئران والجرذان والأبقار والخنازير. لذلك، من المتوقع أن يحتوي الوسط المُكيَّف الذي يحتوي على مصل الثدييات (عند تحميضه) على مستوى أساسي كبير من TGF-β1، والذي قد يختلف باختلاف نوع المصل، والدفعة، ونسبة المصل المستخدمة. هناك عدة طرق للتعامل مع مستوى TGF-β1 الأساسي: 1. تحديد مستوى TGF-β1 الأساسي في وسط الاستنبات وحده وطرحه من قيم العينة. 2. استخدام وسط استنبات خالٍ من مصل الثدييات. 3. التبديل إلى وسط خالٍ من المصل للمدة المطلوبة قبل جمع العينات. تحضير معيار BD CBA Human TGF-β1 Flex Set: يلزم تحضير منحنى معياري. يوضح البروتوكول أدناه كيفية تخفيف المعيار لاستخدامه في مجموعة BD CBA Human TGF-β1 Flex Set. يرجى اتباع التعليمات أدناه لأنها تختلف عن تلك الواردة في دليل مجموعة Human Soluble Protein Master Buffer Kit. يُحفظ المعيار المجفف بالتجميد والمكونات الأخرى عند درجة حرارة 4 درجات مئوية. 1. افتح قارورة واحدة من المعيار المجفف بالتجميد. 2. انقل كرة المعيار المجففة بالتجميد إلى أنبوب بولي بروبيلين. ضع ملصق "المعيار العلوي" على الأنبوب. يُنصح الباحثون بشدة بنقل المعيار المجفف بالتجميد إلى أنبوب البولي بروبيلين لإعادة تكوينه، حيث أن الطرق الأخرى قد تؤدي إلى زيادة التباين. 4. أعد تكوين المعيار بإضافة 1.0 مل من مخفف المعايرة. اترك المعيار المُعاد تكوينه ليتوازن لمدة 15 دقيقة على الأقل قبل إجراء التخفيفات. امزج البروتين المُعاد تكوينه باستخدام الماصة فقط. تجنب الخلط بقوة أو استخدام جهاز الخلط الدوامي. عند إعادة تكوينه في 1.0 مل من مخفف المعايرة، يكون تركيز البروتين في المعيار 10,000 بيكوغرام/مل. تخلص من المعيار المُعاد تكوينه غير المستخدم، ولا تقم بتخزينه أو إعادة استخدامه. 5. ضع ملصقات على 12 أنبوبًا بحجم 75 مم ورتبها بالترتيب التالي: 1:2، 1:4، 1:8، 1:16، 1:32، 1:64، 1:128، و1:256. ٦. اسحب ٥٠٠ ميكرولتر من مخفف المعايرة باستخدام ماصة وضعها في كل أنبوب من الأنابيب المتبقية. ٧. قم بإجراء تخفيف متسلسل بنقل ٥٠٠ ميكرولتر من أنبوب المعيار الأعلى إلى أنبوب التخفيف ١:٢ واخلط جيدًا (اخلط باستخدام الماصة فقط، لا تستخدم جهاز الخلط الدوامي). استمر في إجراء التخفيفات المتسلسلة بنقل ٥٠٠ ميكرولتر من أنبوب ١:٢ إلى أنبوب ١:٤ وهكذا حتى أنبوب ١:٢٥٦. جهّز أنبوبًا واحدًا يحتوي على مخفف المعايرة ليكون بمثابة عينة التحكم السلبية بتركيز ٠ بيكوغرام/مل. ٨. يُوصى بأن تكون الآبار أو الأنابيب العشرة الأولى في التجربة هي المعايير. يجب تشغيل المعايير بالترتيب من الأقل تركيزًا (٠ بيكوغرام/مل) إلى الأكثر تركيزًا (المعيار الأعلى). تحضير خرزات الالتقاط لمجموعة BD CBA Human TGF-β1 Flex Set: تأتي خرزات الالتقاط في مجموعة BD CBA Human TGF-β1 Flex Set بتركيز 50 ضعفًا، ويجب تخفيفها إلى التركيز الأمثل في محلول تخفيف خرزات الالتقاط قبل إضافتها إلى أنبوب أو بئر الاختبار. لا يُستخدم محلول تخفيف خرزات الالتقاط الخاص بالمصل/البلازما، والموجود في مجموعة Human Soluble Protein Master Buffer Kit، في هذا الاختبار، حتى عند اختبار عينات المصل. 1. حدد عدد الاختبارات في التجربة. يُنصح المستخدم بتحضير عدد إضافي من الاختبارات لضمان وجود كمية كافية من المادة المُحضّرة. 2. رجّ قارورة خرزات الالتقاط المركزة باستخدام جهاز الرجّ لمدة 15 ثانية على الأقل لإعادة تعليق الخرزات جيدًا. 3. حدد الحجم الإجمالي للخرزات المخففة اللازمة للتجربة. يتطلب كل أنبوب/بئر 50 ميكرولتر من الخرزات المخففة. يمكن حساب الحجم الإجمالي للخرز المخفف بضرب عدد الاختبارات (المحدد في الخطوة 1) في 50 ميكرولتر. 4. حدد الحجم المطلوب لخرز الالتقاط. يتم توفير الخرز بحيث يكون 1.0 ميكرولتر = اختبار واحد. لذلك، فإن الحجم المطلوب (ميكرولتر) من الخرز يساوي عدد الاختبارات. 5. حدد حجم مخفف خرز الالتقاط اللازم لتخفيف الخرز. يمكن حساب حجم مخفف خرز الالتقاط بطرح حجم الخرز من الحجم الإجمالي للخرز المخفف اللازم لإجراء التحليل. 6. اسحب خرز الالتقاط ومخفف خرز الالتقاط باستخدام ماصة وضعها في أنبوب مُعَلَّم بعبارة "خرز الالتقاط المخفف". تحضير كاشف الكشف PE لمجموعة BD CBA Human TGF-β1 Flex Set: يأتي كاشف الكشف PE المرفق مع مجموعة BD CBA Human TGF-β1 Flex Set بتركيز 50 ضعفًا (1 ميكرولتر/اختبار)، ويجب تخفيفه إلى الحجم الأمثل لكل اختبار (50 ميكرولتر/اختبار) قبل إضافته إلى الأنبوب أو البئر. ملاحظة: يجب حماية كاشف الكشف PE من التعرض للضوء المباشر لأنه قد يتلاشى لونه ويفقد شدة تألقه. 1. حدد عدد الاختبارات المراد إجراؤها في التجربة. يُنصح المستخدم بتحضير عدد إضافي من الاختبارات لضمان وجود كمية كافية من المادة. 2. حدد الحجم الإجمالي لكاشف الكشف PE المخفف اللازم للتجربة. يتطلب كل أنبوب/بئر 50 ميكرولتر من كاشف الكشف PE المخفف. يمكن حساب الحجم الإجمالي لمحلول PE المخفف بضرب عدد الاختبارات (المحدد أعلاه). 3. حدد الحجم المطلوب لكاشف الكشف عن TGF-β1 PE. يُزوَّد كاشف الكشف عن PE بحيث يكون 1.0 ميكرولتر = اختبار واحد. لذلك، فإن الحجم المطلوب (ميكرولتر) من كاشف الكشف عن PE يساوي عدد الاختبارات. 4. حدد حجم مخفف كاشف الكشف اللازم لتخفيف كواشف الكشف عن PE. يمكن حساب حجم مخفف كاشف الكشف بطرح حجم كاشف الكشف عن TGF-β1 PE المختبر من الحجم الإجمالي لمحلول PE المخفف المطلوب. 5. اسحب كاشف الكشف ومخفف كاشف الكشف باستخدام ماصة وضعها في أنبوب مُعَلَّم بـ "كاشف الكشف عن TGF-β1 PE". يُحفظ في درجة حرارة 4 درجات مئوية، بعيدًا عن الضوء حتى يصبح جاهزًا للاستخدام. إجراء فحص BD CBA Human TGF-β1 Flex Set: بعد تحضير وتخفيف مكونات الفحص الفردية، انقل المعايير أو العينات، وخرزات الالتقاط، وكواشف الكشف PE إلى آبار أو أنابيب الفحص المناسبة للحضانة والتحليل. يُرجى اتباع التعليمات أدناه لأنها قد تختلف عن تلك الواردة في دليل مجموعة محلول البروتين البشري الذائب الرئيسي. يجب على الباحثين ملاحظة أنه في بعض الحالات، قد يلزم استخدام محلول غسيل إضافي، والذي يمكن شراؤه بشكل منفصل (رقم المنتج 560105). ملاحظة: احمِ خرزات الالتقاط وكواشف الكشف PE من التعرض المباشر للضوء. بالنسبة للألواح: 1. حضّر جميع الكواشف كما هو موضح في الأقسام السابقة قبل بدء التجربة. 2. بلل اللوح مسبقًا بإضافة 100 ميكرولتر من محلول الغسيل إلى كل بئر. لإزالة الحجم الزائد، ضعه على مشعب تفريغ. لا تتجاوز ضغط التفريغ 10 بوصات زئبقية. اسحب السائل حتى يتم تصريف جميع الآبار (2-10 ثوانٍ). 3. رجّ خرزات الالتقاط المخففة باستخدام جهاز الرجّ لمدة 5 ثوانٍ على الأقل. أضف 50 ميكرولتر من خرزات الالتقاط المخففة إلى كل بئر من آبار الاختبار. 4. أضف 50 ميكرولتر من المحلول القياسي أو العينات إلى آبار الاختبار. 5. اخلط الصفيحة لمدة 5 دقائق باستخدام جهاز رجّ رقمي بسرعة 500 دورة في الدقيقة (لا تتجاوز 600 دورة في الدقيقة) واحضن الصفيحة لمدة ساعتين في درجة حرارة الغرفة. 6. ضع الصفيحة على مشعب التفريغ واسحب السائل (لا تتجاوز ضغط التفريغ 10 بوصات زئبقية) حتى يتم تصريف جميع الآبار (2-10 ثوانٍ). 7. أضف 50 ميكرولتر من كاشف الكشف PE المخفف إلى كل بئر من آبار الاختبار. ٨. اخلط محتويات الصفيحة لمدة ٥ دقائق باستخدام جهاز رج رقمي بسرعة ٥٠٠ دورة في الدقيقة، ثم حضّن الصفيحة في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعتين. ٩. ضع الصفيحة على مشعب التفريغ، ثم قم بسحب الهواء (لا تتجاوز ضغط التفريغ ١٠ بوصات زئبقية) حتى يتم تصريف جميع الآبار (٢-١٠ ثوانٍ). ١٠. أضف ١٥٠ ميكرولتر من محلول الغسل إلى كل بئر من آبار الاختبار. ١١. ضع الصفيحة على مشعب التفريغ، ثم قم بسحب الهواء (لا تتجاوز ضغط التفريغ ١٠ بوصات زئبقية) حتى يتم تصريف جميع الآبار (٢-١٠ ثوانٍ). ١٢. أضف ١٥٠ ميكرولتر من محلول الغسل إلى كل بئر من آبار الاختبار. رجّ صفيحة الآبار الدقيقة على جهاز رج رقمي بسرعة ٥٠٠ دورة في الدقيقة لمدة ٥ دقائق لإعادة تعليق الخرز. ١٣. ابدأ بتحليل العينات باستخدام جهاز قياس التدفق الخلوي. ملاحظة: يُفضل تحليل العينات في يوم التجربة. قد يؤدي تخزين العينات لفترات طويلة بعد اكتمال التحليل إلى زيادة الخلفية وانخفاض الحساسية. بالنسبة للأنابيب: 1. حضّر جميع الكواشف كما هو موضح في الأقسام السابقة قبل بدء التجربة. 2. رجّ خرزات الالتقاط المخففة باستخدام جهاز الرجّ لمدة 5 ثوانٍ على الأقل. أضف 50 ميكرولتر من خرزات الالتقاط المخففة إلى كل أنبوب تحليل. 3. أضف 50 ميكرولتر من المحلول القياسي أو العينة إلى كل أنبوب تحليل. 4. اخلط أنابيب التحليل برفق واحضنها لمدة ساعتين في درجة حرارة الغرفة. 5. أضف 1.0 مل من محلول الغسل إلى كل أنبوب تحليل وقم بالطرد المركزي عند 200 × g لمدة 5 دقائق. 6. اسحب السائل الطافي بعناية من كل أنبوب تحليل وتخلص منه، مع ترك حوالي 100 ميكرولتر من السائل في كل أنبوب تحليل. يجب أن يتم السحب بشكل متسق قدر الإمكان. 7. أضف 50 ميكرولتر من كاشف الكشف PE المخفف إلى كل أنبوب تحليل. ٦. امزج محتويات أنابيب الاختبار برفق، ثم حضّنها لمدة ساعتين في درجة حرارة الغرفة. ٨. أضف ١ مل من محلول الغسل إلى كل أنبوب اختبار، ثم قم بالطرد المركزي عند ٢٠٠ × g لمدة ٥ دقائق. ٩. اسحب السائل الطافي من كل أنبوب اختبار بعناية، وتخلص منه، مع ترك حوالي ١٠٠ ميكرولتر من السائل في كل أنبوب. يجب أن يكون السحب منتظمًا قدر الإمكان. ١٠. أضف ٣٠٠ ميكرولتر من محلول الغسل إلى كل أنبوب اختبار. رجّ أنابيب الاختبار لفترة وجيزة لإعادة تعليق الخرز. ١١. ابدأ بتحليل العينات باستخدام جهاز قياس التدفق الخلوي. يُنصح برجّ كل أنبوب لفترة وجيزة قبل التحليل. ملاحظة: يُفضل تحليل العينات في يوم التجربة نفسه. قد يؤدي تخزين العينات لفترة طويلة بعد اكتمال الاختبار إلى زيادة التشويش وانخفاض الحساسية. يجب استخدام مجموعة BD CBA Human TGF-β1 Flex Set مع مجموعة BD CBA Human Soluble Protein Master Buffer Kit (رقم المنتج 558264، 100 اختبار، أو 558265، 500 اختبار)، وجهاز قياس التدفق الخلوي، وبرنامج FCAP Array™ (رقم المنتج 641488). أعلى نقطة معايرة لمجموعة BD CBA Human TGF-β1 Flex Set هي 10000 بيكوغرام/مل. يوضح الشكل 1 مثالًا لمنحنى المعايرة. حد الكشف: الحد النظري للكشف هو 14.9 بيكوغرام/مل، وقد تم تحديده بتقييم النتيجة المقدرة لمتوسط ​​شدة الفلورة (MFI) لعينة التحكم السلبية (0 بيكوغرام/مل، ن = 30) + انحرافين معياريين.
إشعارات المنتج: مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية، وتقع في الولايات المتحدة. ProClin هي علامة تجارية لشركة Rohm and Haas. تحذير: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. خفف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. تحذير: يحتوي معيار CBA المجفف بالتجميد على 0.02% (وزن/وزن) من خليط CMIT/MIT (3:1)، وهو خليط من: 5-كلورو-2-ميثيل-4-أيزوثيازولين-3-ون [رقم EC 247-500-7] و2-ميثيل-4-أيزوثيازولين-3-ون [رقم EC 220-239-6] (3:1). بيان المخاطر: قد يسبب رد فعل تحسسي جلدي. بيانات الاحتياطات: لا يُسمح بإخراج ملابس العمل الملوثة من مكان العمل. ارتدِ قفازات واقية/واقي للعينين/واقي للوجه. ارتدِ ملابس واقية. تجنب استنشاق الرذاذ/الأبخرة. في حال حدوث تهيج أو طفح جلدي: استشر طبيباً. في حال ملامسة الجلد: اغسل جيداً بالماء. انزع الملابس الملوثة واغسلها قبل إعادة استخدامها. تخلص من المحتويات/العبوة وفقاً للوائح المحلية/الإقليمية/الوطنية/الدولية. يرجى مراجعة http://regdocs.bd.com للاطلاع على صحائف بيانات السلامة (SDS).
الوصف: الكمية/الحجم: رقم القطعة: معرف EntrezGene
غير متوفر : 100.0 : غير متوفر : غير متوفر