BD، 560699، BD Pharmingen™ PE-Cy™7 مضاد الفئران IL-4

الاسم البديل: IL4: إنترلوكين-4؛ BSF-1؛ عامل نمو الخلايا البائية 1؛ BCGF-1
التفاعل: الفأر (اختبار مراقبة الجودة)
النمط المصلي: IgG1، كابا للفئران
المستضد: إنترلوكين-4 الفأري المنقى جزئياً
التطبيق: التلوين داخل الخلايا (قياس التدفق الخلوي) (يتم اختباره بشكل روتيني)
التركيز: 0.2 ملغم/مل
RRID: AB_1727548
محلول التخزين: محلول مائي منظم يحتوي على ≤0.09% من أزيد الصوديوم.
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
التحضير والتخزين: يُحفظ غير مخفف في درجة حرارة 4 درجات مئوية، ويُحفظ بعيدًا عن الضوء لفترات طويلة. لا يُجمد. تم تنقية الجسم المضاد أحادي النسيلة من سائل مزرعة الأنسجة أو السائل الاستسقائي باستخدام كروماتوغرافيا التقارب. تم ربط الجسم المضاد بالصبغة في ظل الظروف المثلى، وتمت إزالة الجسم المضاد غير المرتبط والصبغة الحرة.
إجراءات الفحص الموصى بها: قياس التدفق الخلوي: يُعدّ الجسم المضاد 11B11 مفيدًا في التلوين المناعي الفلوري وتحليل التدفق الخلوي لتحديد وحصر الخلايا المنتجة للإنترلوكين-4 ضمن مجموعات الخلايا المختلطة. ويمكن للباحثين استخدام أحد الكواشف التالية كعنصر تحكم مفيد لإثبات خصوصية التلوين: (1) إنترلوكين-4 الفأري المؤتلف (رقم المنتج 550067) أو (2) الجسم المضاد 11B11 غير الموسوم (رقم المنتج 554434)، قبل التلوين. تحضير الخلايا: يمكن للباحثين الذين لا يرغبون في استخدام خلايا MiCK-2 بدلاً من ذلك تحفيز خلايا CD4+ الغنية بالخلايا الطحالية للفئران (مثل C57BL/6) باستخدام 10 ميكروغرام/مل من الأجسام المضادة NA/LE hamster anti-mouse CD3e المرتبطة بالصفيحة (النسيلة 145-2C11؛ رقم المنتج 553057) و2 ميكروغرام/مل من الأجسام المضادة NA/LE hamster anti-mouse CD28 القابلة للذوبان (النسيلة 37.51؛ رقم المنتج 553294) في وجود 10 نانوغرام/مل من IL-2 الفأر المؤتلف (رقم المنتج 550069) و20 نانوغرام/مل من IL-4 الفأر المؤتلف (رقم المنتج 550067) لمدة يومين، يليها توسيع إضافي للخلايا باستخدام IL-2 وIL-4 المؤتلف لمدة 3 أيام إضافية. بعد التوسع، يمكن تنشيط الخلايا باستخدام مزيج تنشيط الكريات البيضاء (رقم المنتج 550583)، أو بدلاً من ذلك، بمعالجة لمدة 4-6 ساعات باستخدام PMA (5 نانوغرام/مل، سيغما-ألدريتش، رقم المنتج P-8139) وأيونوميسين (500 نانوغرام/مل، سيغما-ألدريتش، رقم المنتج I-0634) بوجود 1 ميكروغرام/مل من بريفيلدين أ (BD GolgiPlug™ MN 555029). يُنصح الباحثون بتثبيت الخلايا وجعلها نفاذة قبل التلوين. يمكن استخدام خرز BD® CompBeads كبديل لتقييم تداخل الفلورة (التعويض). عندما ترتبط الأجسام المضادة المقترنة بالفلوركروم بخرز BD® CompBeads، فإنها تمتلك خصائص طيفية مشابهة جدًا للخلايا. مع ذلك، قد تظهر اختلافات طفيفة في الانبعاثات الطيفية لبعض الصبغات الفلورية مقارنةً بالخلايا، مما يؤدي إلى اختلاف قيم التداخل الطيفي عند مقارنتها بالضوابط البيولوجية. لذا، يُنصح بشدة عند استخدام أي كاشف لأول مرة، بمقارنة التداخل الطيفي بين الخلايا وخرز BD® CompBeads للتأكد من ملاءمة خرز BD® CompBeads لتطبيقك الخلوي المحدد.
ملاحظات المنتج: نظرًا لاختلاف التطبيقات، ينبغي على كل باحث معايرة الكاشف للحصول على أفضل النتائج. يجب استخدام عينة تحكم متماثلة النمط بنفس تركيز الجسم المضاد المطلوب. تحذير: تُظهر بعض مُقترنات APC-Cy7 وPE-Cy7 تغيرات في طيف انبعاثها عند التعرض المطول للفورمالديهايد. إذا تعذر تحليل العينات المُثبتة خلال أربع ساعات، نوصي باستخدام مُثبت BD™ (رقم المنتج 338036). يُرجى مراعاة الاحتياطات التالية: قد يُؤدي امتصاص الضوء المرئي إلى تغيير كبير في نقل الطاقة الذي يحدث في أي مُقترن فلوري مزدوج؛ لذلك، نوصي باتخاذ احتياطات خاصة (مثل تغليف القوارير أو الأنابيب أو الحوامل بورق الألومنيوم) لمنع تعريض الكواشف المُقترنة، بما في ذلك الخلايا المصبوغة بهذه الكواشف، لإضاءة الغرفة. يُعدّ PE-Cy7 فلوروكرومًا مزدوجًا يتكون من R-phycoerythrin (PE)، الذي يُثار بضوء طوله الموجي 488 نانومتر ويعمل كمانح للطاقة، مُقترنًا بصبغة السيانين Cy7، التي تعمل كمستقبل للطاقة وتُصدر فلورة قصوى عند 780 نانومتر. يتم جمع انبعاث فلوروكروم PE-Cy7 المزدوج في كاشف لأطوال موجية للفلورة تبلغ 750 نانومتر فأكثر. على الرغم من بذل قصارى الجهد لتقليل التباين بين الدفعات في كفاءة نقل طاقة الفلوركروم، فقد تُلاحظ اختلافات في الانبعاث المتبقي من PE. لذلك، نوصي بإجراء فحوصات تعويض فردية لكل مُقترن PE-Cy7. تم تحسين PE-Cy7 للاستخدام مع ليزر أيون الأرجون الأحادي الذي يُصدر ضوءًا بطول موجي 488 نانومتر، ولا يوجد تداخل يُذكر بين أطياف انبعاث PE-Cy7 وFITC. عند استخدام أجهزة قياس التدفق الخلوي ثنائية الليزر، التي قد تُثير كلاً من PE وCy7 بشكل مباشر، نوصي باستخدام تعويض الحزمة المتقاطعة أثناء جمع البيانات أو التعويض البرمجي أثناء تحليلها. تنبيه: ينتج عن أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. لذا، يُرجى تخفيف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف. للاطلاع على أطياف الفلوركروم وإعدادات الجهاز المناسبة، يُرجى زيارة صفحة قياس التدفق الخلوي متعدد الألوان على موقعنا الإلكتروني www.bdbiosciences.com/colors. للاطلاع على البروتوكولات الفنية، يُرجى زيارة www.bdbiosciences.com/us/s/resources. للاطلاع على صحائف بيانات السلامة (SDS)، يُرجى زيارة http://regdocs.bd.com. Cy هي علامة تجارية مسجلة لشركة Global Life Sciences Solutions Germany GmbH أو إحدى الشركات التابعة لها التي تُمارس أعمالها تحت اسم Cytiva.