BD، 560749، BD Pharmingen™ مضاد SOX1 بشري نقي من الفئران

التفاعل: بشري (اختبار مراقبة الجودة)
النمط المصلي: IgG1 الفأري، κ
المستضد: ببتيد Sox1 البشري
التطبيقات: لطخة ويسترن (يتم اختبارها بشكل روتيني)، التصوير الحيوي، قياس التدفق الخلوي (يتم اختبارها أثناء التطوير)
الوزن الجزيئي المستهدف: 39 كيلو دالتون
التركيز: 0.5 ملغم/مل
RRID: AB_1727572
محلول التخزين: محلول مائي منظم يحتوي على ≤0.09% من أزيد الصوديوم.
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
التحضير والتخزين: تم تنقية الجسم المضاد أحادي النسيلة من سائل مزرعة الأنسجة أو السائل الاستسقائي بواسطة كروماتوغرافيا التقارب. يُحفظ غير مخفف عند درجة حرارة 4 درجات مئوية.
إجراءات الفحص الموصى بها: التصوير الحيوي 1. ازرع الخلايا في وسط زراعة مناسب بكثافة خلوية مناسبة في صفيحة تصوير BD Falcon™ ذات 96 بئرًا (رقم المنتج 353219)، واتركها في الحضانة من ليلة إلى 48 ساعة. 2. أزل وسط الزراعة من الآبار، واغسلها (مرة أو مرتين) بـ 100 ميكرولتر من محلول الفوسفات الملحي (PBS) بتركيز 1×. 3. ثبّت الخلايا بإضافة 100 ميكرولتر من الفورمالديهايد الطازج بتركيز 3.7% في محلول الفوسفات الملحي (PBS) أو محلول التثبيت BD Cytofix™ (رقم المنتج 554655) إلى كل بئر، واحضنها لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة. 4. أزل المُثبِّت من الآبار، واغسلها (مرة أو مرتين) بـ 100 ميكرولتر من محلول الفوسفات الملحي (PBS) بتركيز 1×. ٥. نفاذية الخلايا باستخدام إما Triton™ X-100 (أ) أو Saponin (ب): أ. أضف ١٠٠ ميكرولتر من Triton™ X-100 بتركيز ٠.١٪ إلى كل بئر، وحضّن لمدة ٥ دقائق في درجة حرارة الغرفة. ب. أضف ١٠٠ ميكرولتر من محلول النفاذية/الغسل بتركيز ١× (رقم المنتج ٥٥٤٧٢٣) إلى كل بئر، وحضّن لمدة ١٥ إلى ٣٠ دقيقة في درجة حرارة الغرفة. استمر في استخدام محلول النفاذية/الغسل بتركيز ١× لجميع خطوات الغسل والتخفيف اللاحقة. ٦. أزل محلول النفاذية من الآبار، واغسل مرة أو مرتين باستخدام ١٠٠ ميكرولتر من المحلول المناسب (إما محلول الفوسفات الملحي بتركيز ١× أو محلول النفاذية/الغسل بتركيز ١×، انظر الخطوة ٥.ب). ٧. خطوة الحجب الاختيارية: أزل محاليل الغسل، واحجب الخلايا بإضافة ١٠٠ ميكرولتر من محلول الحجب BD Pharmingen™ Stain Buffer (FBS) (رقم المنتج ٥٥٤٦٥٦) أو ٣٪ FBS في محلول التخفيف المناسب إلى كل بئر، ثم حضّن لمدة ١٥ إلى ٣٠ دقيقة في درجة حرارة الغرفة. ٨. خفف الجسم المضاد إلى تركيزه الأمثل في محلول التخفيف المناسب. عاير الأجسام المضادة النقية (غير المقترنة) وكواشف الخطوة الثانية لتحديد التركيز الأمثل. في حال استخدام جسم مضاد مقترن معتمد من Bioimaging، خففه بنسبة ١:١٠. ٩. أضف ٥٠ ميكرولتر من الجسم المضاد المخفف لكل بئر، وحضّن لمدة ٦٠ دقيقة في درجة حرارة الغرفة. حضّن في الظلام في حال استخدام أجسام مضادة موسومة بالفلورسنت. ١٠. أزل الجسم المضاد، واغسل الآبار ثلاث مرات بـ ١٠٠ ميكرولتر من محلول الغسل. يمكن إضافة غسل اختياري بمنظف (100 ميكرولتر من محلول توين 0.05% في محلول فوسفات ملحي 1×) قبل خطوات الغسل المعتادة. 11. إذا كان الجسم المضاد المستخدم موسومًا بصبغة فلورية، فانتقل إلى الخطوة 12. أما إذا كنت تستخدم جسمًا مضادًا نقيًا غير موسوم، فكرر الخطوات من 8 إلى 10 باستخدام كاشف الخطوة الثانية الموسوم بصبغة فلورية للكشف عن الجسم المضاد النقي. 12. بعد الغسل الأخير، قم بتلوين النوى بإضافة 100 ميكرولتر من محلول هوكست 33342 بتركيز 2 ميكروغرام/مل (مثلًا، سيغما-ألدريتش، رقم المنتج B2261) في محلول فوسفات ملحي 1× إلى كل بئر قبل التصوير بـ 15 دقيقة على الأقل. 13. اعرض الخلايا وحللها باستخدام جهاز تصوير مناسب.
ملاحظات المنتج: نظرًا لاختلاف التطبيقات، ينبغي على كل باحث معايرة الكاشف للحصول على أفضل النتائج. يُرجى مراجعة www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية. Triton علامة تجارية لشركة Dow Chemical. Alexa Fluor® علامة تجارية مسجلة لشركة Molecular Probes, Inc.، يوجين، أوريغون. تحذير: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. خفف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي.