BD، 560753، مجموعة فرز الخلايا التائية التنظيمية البشرية BD Pharmingen™

التطبيق: قياس التدفق الخلوي، فرز الخلايا المنشطة بالفلورة (تم اختباره أثناء التطوير)
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
RRID: AB_2869362
الوصف: يحمي الجهاز المناعي الأفراد من طيف واسع من الكائنات الدقيقة الممرضة، مع تجنب الاستجابات المناعية غير المناسبة أو المفرطة، مثل الاستجابات المناعية الذاتية أو التحسسية التي قد تكون ضارة. وتتوسط المناعة التكيفية بشكل كبير مجموعات الخلايا اللمفاوية التائية والبائية القادرة على التعرف بدقة على مجموعة متنوعة من المستضدات الغريبة. ومن خلال عمليات التوسع النسيلي السريع والتمايز، تُنتج الخلايا اللمفاوية المحفزة بالمستضدات مجموعة واسعة من الخلايا الفعالة وخلايا الذاكرة القوية للتخلص من المستضد الغريب الضار. وهناك فئة مميزة من الخلايا التائية، تُسمى الخلايا التائية التنظيمية (Treg)، تحمي من استجابة الجهاز المناعي للمستضدات الذاتية، وتكبح الاستجابة المفرطة للمستضدات الغريبة التي قد تكون ضارة بالمضيف. وتُنتج الخلايا التائية التنظيمية الطبيعية CD4+ (nTreg) في الغدة الزعترية كمجموعة فرعية ناضجة وظيفيًا من الخلايا التائية. تهاجر هذه الخلايا إلى مجموعة الخلايا التائية المحيطية، وتُظهر باستمرار مستويات متوسطة إلى عالية من CD25 (السلسلة ألفا لمستقبل IL-2) وFoxp3 (عامل النسخ Foxp3). يُعد عامل النسخ Foxp3 عضوًا في عائلة عوامل النسخ ذات الرأس المتشعب/الحلزون المجنح، وهو منظم رئيسي لتطور ووظيفة الخلايا التائية التنظيمية (Treg). يُشكل CD127 (السلسلة ألفا لمستقبل IL-7) علامة سطحية خلوية مفيدة أخرى لتحديد الخلايا التائية التنظيمية. ينخفض ​​مستوى CD127 على سطح الخلايا التائية التنظيمية، ويرتبط ذلك عكسيًا بتعبير Foxp3. يمكن أن تنشأ الخلايا التائية التنظيمية CD4+ المستحثة (iTreg) من الخلايا التائية CD4+ الساذجة الناضجة في المحيط والتي لا تُظهر تعبيرًا عن CD25 وFoxp3 (خلايا CD4+CD25-Foxp3-). تشير الدراسات الحديثة إلى إمكانية تقسيم خلايا CD4+FoxP3+ T البشرية الطبيعية إلى مجموعات فرعية متميزة ظاهريًا ووظيفيًا، وذلك بناءً على مستويات التعبير المشترك لجينات Foxp3 وCD25 وCD45RA. يُعدّ مؤشر CD45RA مفيدًا بشكل خاص لتحديد خلايا Treg الطبيعية CD4+ في حالة الراحة (CD45RA+)، وكذلك خلايا Treg CD4+ المنشطة في الجسم الحي (CD45RA-)، عند استخدامه مع مؤشرات Foxp3 وCD25 وCD127. توفر الدراسات الظاهرية والوظيفية باستخدام هذه المؤشرات أساسًا لتحليلات عالية الدقة لديناميكيات توليد وتمايز خلايا Treg خلال مراحل النمو والشيخوخة والحالات المرضية. توفر مجموعة فرز الخلايا التائية التنظيمية البشرية BD™ كواشف تُمكّن الباحثين من تلوين خلايا الدم المحيطية أحادية النواة (PBMC) الحية، أو جزء مُخصّب من خلايا CD4+ التائية من PBMC، وتنقية خلايا CD4+CD25+CD127lo (CD45RA+ اختياريًا). يمكن بعد ذلك اختبار هذه الخلايا وظيفيًا أو استخدامها كخلايا طليعية لتوسيع مزارع التمايز وإنتاج خلايا Treg مُنشّطة. كما يمكن تنقية أجزاء خلوية أخرى، مثل خلايا CD4+CD25-CD127+ (خلايا CD4+ التائية الساذجة)، في الوقت نفسه عن طريق الفرز الخلوي التدفقّي لإجراء توصيف وظيفي لاحق. بالإضافة إلى ذلك، يتضمن المنتج جسمًا مضادًا فلوريًا بشريًا لـ CD45RA لتسهيل المزيد من التوصيف أو الفرز للخلايا اللمفاوية التائية الساذجة (CD45RA+) أو المُنشّطة/الذاكرة (CD45RA-) من نوع CD4+Foxp3+ أو CD4+Foxp3-.
التحضير والتخزين: يُحفظ غير مخفف في درجة حرارة 4 درجات مئوية، ويُحفظ بعيدًا عن الضوء لفترات طويلة. لا يُجمد. تم تنقية الجسم المضاد أحادي النسيلة من سائل مزرعة الأنسجة أو السائل الاستسقائي باستخدام كروماتوغرافيا التقارب. تم ربط الجسم المضاد بصبغة PerCP-Cy5.5 في ظل الظروف المثلى، وتم التخلص من الجسم المضاد غير المرتبط وصبغة PerCP-Cy5.5 الحرة. لا يُنصح بتخزين مُقترنات PerCP-Cy5.5 في مخفف غير مُحسَّن، فقد يؤدي ذلك إلى فقدان شدة الإشارة. تم ربط الجسم المضاد بالصبغة في ظل الظروف المثلى، وتم التخلص من الجسم المضاد غير المرتبط والصبغة الحرة. تم ربط الجسم المضاد بالصبغة في ظل الظروف المثلى، وتم التخلص من الصبغة غير المتفاعلة.
إجراءات الفحص الموصى بها: عزل الخلايا أحادية النواة من الدم المحيطي (PBMC): تحضير الخلايا أحادية النواة من الدم المحيطي عن طريق الطرد المركزي بتدرج الكثافة. تلوين الأجسام المضادة لفرز الخلايا: يصف الإجراء التالي كيفية تلوين الضوابط وعينة الخلايا لفرزها. لا تتطلب المجموعة استخدام ضوابط النمط المتساوي لإجراء فرز ناجح. تم توصيف كل مجموعة جيدًا والتحقق من أنماط التلوين. ومع ذلك، يمكنك استخدام ضوابط النمط المتساوي الخاصة بك (FMO) حسب الرغبة. ملاحظة: اتبع إجراءات التلوين والفرز المعقمة إذا كنت تخطط لتوسيع مجموعة الخلايا التائية التنظيمية المعزولة. 1. ضع علامة على خمسة أنابيب 12 × 75 مم للتعويض. اتبع التعليمات من رقم المنتج 552843: مجموعة جزيئات التعويض المضادة للفأر Ig، κ/الضابط السلبي (FBS). 2. حضّر الخرز لقياس التدفق الخلوي وفقًا لإجراء الفحص الموصى به. الأنبوب 1: خرز تعويض غير مصبوغ، الأنبوب 2: خرز تعويض FITC، الأنبوب 3: خرز تعويض PE، الأنبوب 4: خرز تعويض PerCP-Cy5.5، الأنبوب 5: خرز تعويض AlexaFluor® 647، الأنبوب 6: اختياري: أنبوب تعويض Horizon V450 لتلوين FoxP3 بعد الفرز. 2. أضف الأجسام المضادة التالية من القوارير الفردية الموجودة في المجموعة إلى الأنابيب المحددة في الخطوة رقم 1. - أنبوب تعويض FITC: 20 ميكرولتر من CD45RA FITC، - أنبوب تعويض PE: 20 ميكرولتر من CD25 PE، - أنبوب تعويض PerCP-Cy5.5: 20 ميكرولتر من CD4 PerCP-Cy5.5، - أنبوب تعويض AlexaFluor® 647: 20 ميكرولتر من CD127 APC. حضّر الخرز لقياس التدفق الخلوي كما هو موضح في تعليمات Cat. رقم 552843، مجموعة جزيئات تعويضية للتحكم السلبي (FBS) ومضاد Ig الفأر، كابا. 3. تلوين العينة: قسّم العينة المراد فرزها إلى أجزاء متساوية في أنبوب سعة 50 مل لتلوين الخلايا الليمفاوية أحادية النواة في الدم المحيطي (PBMC) أو الخلايا المُخصبة بـ CD4. بالنسبة لأعداد PBMC الإجمالية الأقل من 100 مليون، يكون تركيز التلوين 20 مليون لكل 1.0 مل. أما بالنسبة لأعداد PBMC الإجمالية الأكبر من 100 مليون، فيكون تركيز التلوين 100 مليون لكل 1.0 مل. ملاحظة: حجم الاختبار يساوي 200 ميكرولتر لكل 100 مليون خلية. محلول الغسل هو محلول ملحي فوسفاتي (PBS) بتركيز 1x + 1% مصل بشري AB. 4. إضافة الأجسام المضادة: 200 ميكرولتر من كل من مزيج الأجسام المضادة وCD45RA لكل 100 مليون خلية. على سبيل المثال: - 120 مليون خلية، أضف 240 ميكرولتر من الكوكتيل وCD45RA ليصل الحجم النهائي إلى 1.2 مل. - 50 مليون خلية، أضف 100 ميكرولتر من الكوكتيل وCD45RA ليصل الحجم النهائي إلى 2.5 مل. 5. حضّن العينة بعيدًا عن الضوء عند درجة حرارة 18-22 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة. 6. أضف كمية كافية من محلول الغسل (مثلاً 49 مل) لملء أنبوب سعة 50 مل، ثم قم بالطرد المركزي عند 250 × g لمدة 15 دقيقة. 7. اسحب السائل الطافي وأعد تعليق العينة بتركيز 5-10 ملايين خلية/مل في محلول الغسل. 8. جهّز أنابيب الاستقبال. قم بتغطية 12 أنبوبًا من البولي بروبيلين (75 مم × 12) بـ 0.2 مل من مصل AB البشري، ثم اقلبها، وأضف 0.2 مل من الوسط الزرعي [(تركيبة: X-VIVO-15 (Cambrex) + 10% مصل AB البشري (Sigma) + 0.2% محلول أسيتيل سيستئين)] أو استخدم محلول غسيل PBS. 9. استخدم جهاز فرز الخلايا FACSAria™ لعزل مجموعات الخلايا المطلوبة. خيارات فرز المجموعات: المجموعة الأساسية: خلايا CD4+/CD25int-hi/CD127lo، خلايا CD4+/CD25int-hi/CD127lo/CD45RA+، خلايا CD4+/CD25int-hi/CD127lo/CD45RA-، خلايا CD4+/CD25-/CD127lo، خلايا CD4+/CD25-/CD127lo/CD45RA-. ١٠. اجمع الأجزاء في أنابيب بولي بروبيلين مقاس ١٢ × ٧٥ مم مطلية بمصل AB بشري، وتحتوي على وسط زراعي. ١١. قم بطرد الأجزاء مركزياً عند ٢٥٠ × جم لمدة ١٠ دقائق، ثم أزل السائل الطافي دون تحريك الراسب. أعد تعليق الخلايا في محلول الغسل واستخلص ما لا يقل عن ٣٠٠٠٠ خلية لتلوين FoxP3 أو للحصول على عينات بعد الفرز، و/أو ما لا يقل عن ٥٠٠٠٠ خلية للتكاثر. ملاحظة: تأكد من استخدام محلول فوسفات ملحي ١× + ١٪ مصل AB بشري عند الحصول على الأجزاء بعد الفرز. ١٢. تابع بروتوكول تلوين FoxP3 المعدل (المذكور أدناه)، أو التكاثر، أو التثبيط، أو أي بروتوكول لاحق آخر من اختيارك. بروتوكول الفرز: يمكن استخدام فوهة ٧٠ أو ١٠٠ ميكرون لهذه العملية. تسمح فوهة قطرها 70 ميكرون بمعدلات تدفق وضغوط عالية كافية لفرز حوالي 100 مليون خلية أحادية النواة في الدم المحيطي (PBMC) خلال 0.5 إلى 2.5 ساعة، للحصول على حوالي 90,000 خلية تنظيمية من نوع CD45RA+، وذلك حسب المتبرع. قد تسمح فوهة قطرها 100 ميكرون بنقاء وحيوية أعلى، مع مضاعفة وقت الفرز تقريبًا. قد يتطلب الأمر فرز 200 مليون خلية أو أكثر لاستخلاص خلايا T من نوع CD25brightCD45RA- بشكل كافٍ. راجع الشكل وشرحه للاطلاع على إرشادات الفرز الكاملة. بروتوكول تلوين FoxP3 بعد الفرز: يصف الإجراء التالي بروتوكولًا مُعدَّلًا لتلوين FoxP3 لعينات ما بعد الفرز. تعامل مع الخلايا بأقل قدر ممكن وتجنب قوى التسارع العالية بعد الفرز. سيوفر فرز ناجح لـ 100-250 مليون خلية أحادية النواة في الدم المحيطي (PBMC) عددًا كافيًا من الخلايا لاختبار حيويتها وتعبير FoxP3 في تجربة تحقق، ومن المرجح أن يوفر عددًا كافيًا من الخلايا للتوسع. مع ذلك، نوصي بالاحتفاظ بكسور CD45RA لقياسات النقاء، وتلوين الخلايا بـ FoxP3 عندما تكون الخلايا وفيرة في مراحل لاحقة من التكاثر. نوصي بالتلوين في أنابيب أو صفائح صغيرة من البولي بروبيلين. لا يلزم تلوين السطح إذا تم تثبيت الكسور بعد الفرز واختبارها في يوم الفرز، ولكن نسبة الإشارة إلى الضوضاء لفلورة FITC ستنخفض بهذه الطريقة. بدلاً من ذلك، يمكن تلوين الخلايا المتكاثرة بشكل مشترك باستخدام CD3 (رقم المنتج 555333) و/أو CD4 (رقم المنتج 565999)، أو مزيج خلايا T التنظيمية البشرية (رقم المنتج 560249)، أو التلوين باستخدام 10 ميكرولتر من هذه المجموعة لكل اختبار. 1. اترك المحاليل المنظمة لتصل إلى درجة حرارة الغرفة قبل الاستخدام. حضّر محاليل العمل لمجموعة BD Pharmingen Human FoxP3 Buffer Set (رقم المنتج 560098) واتبع هذا البروتوكول المعدل: 2. ضع علامات على خمسة أنابيب طرد مركزي صغيرة من البولي بروبيلين سعة 0.65 مل (VWR MN 87003-290): الأنبوب 1: جزء ما قبل الفرز، الأنبوب 2: CD4+CD25++CD127lowCD45RA- Horizon V450 للتحكم في النمط المتساوي (رقم المنتج 560373)، الأنبوب 3: CD4+CD25++CD127lowCD45RA- Horizon V450 FoxP3 (رقم المنتج 560460)، الأنبوب 4: CD4+CD25++CD127lowCD45RA+ Horizon V450 للتحكم في النمط المتساوي، الأنبوب 5: CD4+CD25++CD127lowCD45RA+ Horizon V450 FoxP3. 3. حضّر أجزاء بشرية مفروزة لتلوين FoxP3. ٤. بعد الفرز، قم بتدوير أنابيب الاستقبال في جهاز الطرد المركزي بسرعة ٢٥٠ ضعف قوة الجاذبية الأرضية لمدة ١٠ دقائق، ثم أزل محلول الغسل برفق. ٥. خفف الخلايا إلى ٣٠٠٠٠ خلية على الأقل لكل ٥٠ ميكرولتر في محلول التلوين BD Pharmingen (FBS).* ملاحظة: استخدم ٢٠٠٠٠٠ خلية للأنبوب ١ للمساعدة في ضبط تشتت الضوء الأمامي (FSC) وتشتت الضوء الجانبي (SSC) عند الحصول على الخلايا المثبتة. ٦. أضف ٥٠٠ ميكرولتر من محلول التلوين BD Pharmingen (FBS). قم بالطرد المركزي بسرعة ٢٥٠ ضعف قوة الجاذبية الأرضية لمدة ٥ دقائق، ثم أزل محلول الغسل برفق. ٧. لتثبيت الخلايا، أضف ٢٥٠ ميكرولتر من المحلول A بتركيز ١x لكل أنبوب، وقم بالرج برفق لمدة ثانية واحدة، ثم حضّن لمدة ١٠ دقائق في درجة حرارة الغرفة بعيدًا عن الضوء. ملاحظة: هذه خطوة اختيارية، يمكنك تخزين الأنابيب طوال الليل في درجة حرارة ٤ درجات مئوية، ثم استكمال الإجراء في اليوم التالي. اترك العينة لتصل إلى درجة حرارة الغرفة قبل الخطوة 8. 8. قم بالطرد المركزي بسرعة 250 × g لمدة 5 دقائق، ثم أزل المُثبِّت. تنبيه: انتبه إلى أن الراسب طافٍ. 9. لزيادة نفاذية الخلايا، أعد تعليق الراسب برفق في الحجم المتبقي من محلول التثبيت، ثم أضف 250 ميكرولتر من محلول العمل 1x من محلول Human FoxP3 Buffer C إلى كل أنبوب. رجّ برفق لمدة ثانية واحدة، ثم حضّن لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة بعيدًا عن الضوء. 10. أضف 500 ميكرولتر من محلول BD Pharmingen Stain Buffer (FBS). قم بالطرد المركزي بسرعة 250 × g لمدة 5 دقائق، ثم أزل محلول الغسل برفق مع ترك حوالي 50 ميكرولتر من المحلول المتبقي. 11. أضف جسمًا مضادًا لـ FoxP3 مرتبطًا بـ V450 و/أو عنصر تحكم متماثل النمط بتركيز 0.5x من حجم الاختبار الموضح على القارورة. رجّ برفق لمدة ثانية واحدة. ١٢. حضّن لمدة ٣٠ دقيقة في الظلام عند درجة حرارة الغرفة. ١٣. كرر خطوة الغسل رقم ٩. ١٤. أعد تعليق الخلايا في ٣٠٠ ميكرولتر من محلول الفوسفات الملحي (PBS) بتركيز ١x، ثم حللها فورًا. للحصول على أفضل النتائج، احصل على ما بين ٥٠٠ و ٢٠٠٠ خلية موجبة لـ CD4. ملاحظة: اضبط إعدادات التشتت الأمامي (FSC) مقابل التشتت الجانبي (SSC) باستخدام جزء الفرز المسبق. قد يؤثر انتقال الإشارة من أنبوب إلى آخر على تفسير البيانات التي تم جمعها من أجزاء صغيرة جدًا من الخلايا. يُنصح بأخذ أنبوب من محلول الفوسفات الملحي (PBS) بين كل تشغيل لتحديد الخلفية و/أو انتقال الإشارة من الأنابيب السابقة في التشغيل. * نوصي باستخدام محلول التلوين BD Pharmingen (FBS؛ رقم المنتج ٥٥٤٦٥٦) للتلوين السطحي الأولي وجميع خطوات الغسل، وتغطية الأنابيب بأغطية أو غشاء بارافين أثناء خطوات التحضين. كما نوصي بضبط جهد التشتت الأمامي والجانبي لتصوير الخلايا الليمفاوية بشكل منفصل عن الحطام و/أو الصفائح الدموية قبل التحليل. يمكن استخدام خرز BD® CompBeads كبديل لتقييم تداخل الفلورة (التعويض). فعندما ترتبط الأجسام المضادة المقترنة بالفلوركروم بخرز BD® CompBeads، فإنها تُظهر خصائص طيفية مشابهة جدًا للخلايا. مع ذلك، قد توجد اختلافات طفيفة في الانبعاثات الطيفية لبعض الفلوركرومات مقارنةً بالخلايا، مما يؤدي إلى قيم تداخل تختلف عند مقارنتها بالضوابط البيولوجية. يُنصح بشدة، عند استخدام أي كاشف لأول مرة، بمقارنة التداخل على الخلايا وخرز BD® CompBeads للتأكد من ملاءمة خرز BD® CompBeads لتطبيقك الخلوي المحدد.
إشعارات المنتج: يُرجى مراجعة www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية. يتم جمع انبعاث الفلوركروم Alexa Fluor® 647 بنفس إعدادات الجهاز المستخدمة للألوفيوكوسيانين (APC). مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية (USDA) تقع في الولايات المتحدة. تحذير: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. يجب تخفيف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. يمكن استخدام الأجسام المضادة الموسومة بـ PerCP-Cy5.5 مع الكواشف الموسومة بـ FITC وR-PE في أجهزة قياس التدفق الخلوي أحادية الليزر دون تداخل طيفي كبير بين فلورة PerCP-Cy5.5 وFITC وR-PE. تم تحسين PerCP-Cy5.5 للاستخدام مع ليزر أيون الأرجون أحادي ينبعث منه ضوء بطول موجي 488 نانومتر. نظراً لطيف الامتصاص الواسع للفلوركروم المزدوج، يجب توخي الحذر عند استخدام أجهزة قياس التدفق الخلوي ثنائية الليزر، حيث قد تُثير هذه الأجهزة كلاً من PerCP وCy5.5™ بشكل مباشر. نوصي باستخدام تعويض الحزمة المتقاطعة أثناء جمع البيانات أو التعويض البرمجي أثناء تحليلها. للاطلاع على أطياف الفلوركروم وإعدادات الجهاز المناسبة، يُرجى زيارة صفحة قياس التدفق الخلوي متعدد الألوان على موقعنا الإلكتروني www.bdbiosciences.com/colors. يجب استخدام عنصر تحكم متماثل النمط بنفس تركيز الجسم المضاد المطلوب. يُقدَّم هذا المنتج بموجب ترخيص ملكية فكرية بين شركة Life Technologies Corporation وشركة BD Businesses. يمنح شراء هذا المنتج المشتري حقاً غير قابل للتحويل لاستخدام الكمية المشتراة من المنتج ومكوناته في الأبحاث التي يُجريها (سواءً كان المشتري جهة أكاديمية أو ربحية). لا يجوز للمشتري بيع أو نقل (أ) هذا المنتج، أو (ب) مكوناته، أو (ج) المواد المصنعة باستخدام هذا المنتج أو مكوناته إلى طرف ثالث، أو استخدام هذا المنتج أو مكوناته أو المواد المصنعة باستخدام هذا المنتج أو مكوناته لأغراض تجارية. وتشمل الأغراض التجارية أي نشاط يقوم به أي طرف مقابل عوض، وقد تشمل، على سبيل المثال لا الحصر: (1) استخدام المنتج أو مكوناته في التصنيع؛ (2) استخدام المنتج أو مكوناته لتقديم خدمة أو معلومات أو بيانات؛ (3) استخدام المنتج أو مكوناته لأغراض علاجية أو تشخيصية أو وقائية؛ أو (4) إعادة بيع المنتج أو مكوناته، سواءً أكانت إعادة البيع لأغراض بحثية أم لا. للحصول على معلومات حول شراء ترخيص لهذا المنتج لأي استخدام آخر، يُرجى التواصل مع شركة لايف تكنولوجيز، وحدة أعمال تحليل الخلايا، قسم تطوير الأعمال، 29851 طريق ويلو كريك، يوجين، أوريغون 97402، الولايات المتحدة الأمريكية، هاتف: 5414658300. فاكس: (541) 335-0504. Cy علامة تجارية مسجلة لشركة GE Healthcare. يُرجى زيارة الموقع الإلكتروني http://regdocs.bd.com للاطلاع على صحائف بيانات السلامة (SDS). Alexa Fluor™ علامة تجارية مسجلة لشركة Life Technologies Corporation. Cy علامة تجارية مسجلة لشركة Global Life Sciences Solutions Germany GmbH أو إحدى الشركات التابعة لها التي تُمارس أعمالها تحت اسم Cytiva. يُرجى مراعاة الاحتياطات التالية: نوصي باتخاذ احتياطات خاصة (مثل تغليف القوارير أو الأنابيب أو الحوامل بورق الألومنيوم) لحماية الكواشف المُقترنة، بما في ذلك الخلايا المصبوغة بهذه الكواشف، من التعرض لأي إضاءة في الغرفة. إذ يُمكن أن يؤثر امتصاص الضوء المرئي بشكل كبير على أطياف الانبعاث والعائد الكمي لمركبات الفلوركروم المزدوجة.
الوصف: الكمية/الحجم: رقم القطعة: معرف EntrezGene
غير متوفر : 10.0 : غير متوفر : غير متوفر