BD، 560889، BD Pharmingen™ Alexa Fluor® 647 مضاد FoxP3 بشري للفأر

الاسم البديل: سكورفين؛ IPEX؛ JM2؛ AIID؛ XPID؛ DIETER؛ PIDX
التفاعل: الإنسان (اختبار مراقبة الجودة)، قرد الريسوس، قرد المكاك، قرد البابون (تم اختباره أثناء التطوير)
النمط المصلي: IgG1 للفأر BALB/c
المستضد: FoxP3
التطبيق: التلوين داخل الخلايا (قياس التدفق الخلوي) (يتم اختباره بشكل روتيني)
حجم العينة لكل اختبار: 20 ميكرولتر
RRID: AB_1645411
محلول التخزين: محلول مائي منظم يحتوي على BSA و ≤0.09% أزيد الصوديوم.
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
التحضير والتخزين: يُحفظ غير مخفف في درجة حرارة 4 درجات مئوية، ويُحفظ بعيدًا عن الضوء لفترات طويلة. لا يُجمد. تم تنقية الجسم المضاد أحادي النسيلة من سائل مزرعة الأنسجة أو السائل الاستسقائي باستخدام كروماتوغرافيا التقارب. تم ربط الجسم المضاد بصبغة أليكسا فلور® 647 في ظل الظروف المثلى، وتمت إزالة صبغة أليكسا فلور® 647 غير المتفاعلة.
إجراءات الفحص الموصى بها: إجراءات تحضير الخلايا وتلوينها باستخدام الأجسام المضادة البشرية FoxP3 المقترنة 1. اترك المحاليل المنظمة لتصل إلى درجة حرارة الغرفة قبل الاستخدام. حضّر محاليل العمل من مجموعة محاليل BD Pharmingen Human FoxP3 Buffer Set رقم 560098 (للحصول على تفاصيل حول تحضير المحلول المنظم، يُرجى مراجعة تعليمات TDS رقم 560098). 2. حضّر خلايا الدم المحيطية أحادية النواة البشرية (PBMC). خفف الخلايا باستخدام محلول التلوين BD Pharmingen Stain Buffer (FBS)* إلى عشرة ملايين خلية/مل. 3. ضع كمية مناسبة من كاشف التلوين السطحي في قاع كل أنبوب 12 × 75 مم. 4. أضف 100 ميكرولتر من الخلايا إلى كل أنبوب، ثم رجّها جيدًا، واحضنها لمدة 20 دقيقة في درجة حرارة الغرفة بعيدًا عن الضوء. 5. أضف 2 مل من محلول الغسل. قم بالطرد المركزي بسرعة 250 × g لمدة 10 دقائق، ثم أزل محلول الغسل. ٦. لتثبيت الخلايا، أعد تعليق الراسب برفق في الحجم المتبقي من محلول الغسل، ثم أضف ٢ مل من محلول FoxP3 البشري A بتركيز ١x. رجّ جيداً. حضّن لمدة ١٠ دقائق في درجة حرارة الغرفة في الظلام. ٧. افصل بالطرد المركزي عند ٥٠٠ × جم لمدة ٥ دقائق، ثم أزل المُثبِّت. تنبيه: انتبه لأن الراسب طافٍ. ٨. لغسل الخلايا، أعد تعليق كل راسب في ٢ مل من محلول تلوين BD Pharmingen (FBS)*، ثم افصل بالطرد المركزي عند ٥٠٠ × جم لمدة ٥ دقائق. أزل محلول الغسل. ٩. لزيادة نفاذية الخلايا، أعد تعليق الراسب برفق في الحجم المتبقي من محلول الغسل، ثم أضف ٠.٥ مل من محلول FoxP3 البشري C بتركيز ١x إلى كل أنبوب. رجّ جيداً. حضّن لمدة ٣٠ دقيقة في درجة حرارة الغرفة بعيدًا عن الضوء. ١٠. لغسل الخلايا، أضف ٢ مل من محلول BD Pharmingen Stain Buffer (FBS)* إلى كل أنبوب، ثم قم بالطرد المركزي بسرعة ٥٠٠ × جم لمدة ٥ دقائق في درجة حرارة الغرفة. أزل المحلول وكرر خطوة الغسل. أزل المحلول مرة أخرى. ١١. أضف الجسم المضاد FoxP3 المقترن بتركيزات مناسبة لإعادة تعليق الراسب. رجّ برفق أو استخدم جهاز الخلط الدوامي. ١٢. حضّن لمدة ٣٠ دقيقة في الظلام في درجة حرارة الغرفة. ١٣. كرر خطوة الغسل رقم ١٠. ١٤. أعد تعليق الخلايا في محلول الغسل وحللها فورًا. اختياري: أضف ٣٠٠ ميكرولتر من الفورمالديهايد بتركيز ١٪ في محلول PBS بتركيز ١×، وخزّن عند درجة حرارة ٤ درجات مئوية. حلل الخلايا خلال ٢٤ ساعة. * نوصي باستخدام محلول BD Pharmingen Stain Buffer (FBS؛ رقم المنتج ٥٥٤٦٥٦) لجميع خطوات الغسل، وتغطية الأنابيب أثناء خطوات التحضين بأغطية أو غشاء بارافين. نوصي أيضًا بتحسين جهد التشتت الأمامي والجانبي لتصوير الخلايا الليمفاوية بشكل منفصل عن الحطام وبقايا خلايا الدم الحمراء و/أو الصفائح الدموية قبل التصوير. ** احصل على ما لا يقل عن 15000 إلى 25000 خلية ليمفاوية موجبة لـ CD4.
ملاحظات المنتج: تم تخفيف هذا الكاشف مسبقًا للاستخدام بالحجم الموصى به لكل اختبار. نستخدم عادةً 1 × 10^6 خلية في عينة تجريبية بحجم 100 ميكرولتر (اختبار). يجب استخدام عنصر تحكم متماثل النمط بنفس تركيز الجسم المضاد المطلوب. مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية، وتقع في الولايات المتحدة. تحذير: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. خفف مركبات الأزيد في الماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. للاطلاع على أطياف الفلوركروم وإعدادات الجهاز المناسبة، يرجى زيارة صفحة قياس التدفق الخلوي متعدد الألوان على موقعنا الإلكتروني www.bdbiosciences.com/colors. تُباع مُقترنات الأجسام المضادة المُصبوغة بصبغات Alexa Fluor® و Pacific Blue™ و Cascade Blue® في هذا المنتج بموجب ترخيص من شركة Molecular Probes, Inc. للاستخدام البحثي فقط، باستثناء استخدامها مع المصفوفات الدقيقة أو ككواشف خاصة بالمواد المُحللة. وتخضع صبغات Alexa Fluor® (باستثناء Alexa Fluor® 430) و Pacific Blue™ و Cascade Blue® لبراءات اختراع قيد الانتظار وصادرة. ويتم جمع انبعاث الفلوركروم Alexa Fluor® 647 بنفس إعدادات الجهاز المُستخدمة مع الألوفيوكوسيانين (APC). Alexa Fluor® هي علامة تجارية مسجلة لشركة Molecular Probes, Inc.، يوجين، أوريغون. قد لا يكون التفاعل المتبادل بين الأنواع الذي تم اكتشافه أثناء تطوير المنتج قد تم تأكيده في جميع الأشكال و/أو التطبيقات. يرجى مراجعة www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية.