BD، 560922، BD Pharmingen™ PE-Cy™7 Rat Anti-Human CCR7 (CD197)

الاسم البديل: CCR7، BLR-2، EBI-1، CMKBR7
التفاعل: بشري (اختبار مراقبة الجودة)
النمط المصلي: IgG2a، κ للفئران
المستضد: بروتين CCR7 البشري
التطبيق: قياس التدفق الخلوي (يتم اختباره بشكل روتيني)
حجم العينة لكل اختبار: 5 ميكرولتر
RRID: AB_396765
محلول التخزين: محلول مائي منظم يحتوي على BSA و ≤0.09% أزيد الصوديوم.
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
التحضير والتخزين: يُحفظ غير مخفف في درجة حرارة 4 درجات مئوية، ويُحفظ بعيدًا عن الضوء لفترات طويلة. لا يُجمد. تم تنقية الجسم المضاد أحادي النسيلة من سائل مزرعة الأنسجة أو السائل الاستسقائي باستخدام كروماتوغرافيا التقارب. تم ربط الجسم المضاد بـ PE-Cy7 في ظل الظروف المثلى، وتمت إزالة الجسم المضاد غير المرتبط وPE-Cy7 الحر.
إجراءات الفحص الموصى بها: يمكن استخدام الأجسام المضادة 3D12 النقية، والمقترنة بـ PE، والبيوتين، وPE-Cy7 (أرقام المنتجات: 552175، 552176، 552174، و557648) في التلوين المناعي الفلوري وتحليل التدفق الخلوي لخلايا الدم البيضاء البشرية وخطوط الخلايا التي تُعبر عن CCR7. التوصية: من المعروف أن مستقبلات الكيموكينات تُستَدخَل إلى داخل الخلايا أثناء المعالجة، مما يؤدي إلى انخفاض تردد التعبير. يجب إجراء دراسات النمط الظاهري المناعي لمستقبلات الكيموكينات على دم كامل طازج (أقل من 24 ساعة). يجب أن تتم الحضانة مع الجسم المضاد عند درجة حرارة 4 درجات مئوية في الظلام. وقد ثبت أن المعالجة الخلوية، مثل فصل الفيكول، أو التجميد، أو التعرض لدرجات حرارة منخفضة قبل التلوين، تُسبب انخفاضًا في شدة التلوين ونتائج غير متسقة. يُوصى بشدة باتباع إجراء تلوين متعدد الخطوات لتضخيم إشارات التألق المناعي في تحليل التعبير عن مستقبل CCR7 البشري باستخدام قياس التدفق الخلوي. يُوصى باستخدام مضاد CCR7 البشري النقي (رقم المنتج 552175) وإجراء تلوين من ثلاث خطوات للكشف عن التعبير المنخفض التردد.
ملاحظات المنتج: تم تخفيف هذا الكاشف مسبقًا للاستخدام بالحجم الموصى به لكل اختبار. نستخدم عادةً 1 × 10^6 خلية في عينة تجريبية بحجم 100 ميكرولتر (اختبار). للاطلاع على أطياف الفلوركروم وإعدادات الجهاز المناسبة، يُرجى الرجوع إلى صفحة قياس التدفق الخلوي متعدد الألوان على موقعنا الإلكتروني www.bdbiosciences.com/colors. يُعد PE-Cy7 فلوروكرومًا مزدوجًا يتكون من R-phycoerythrin (PE)، الذي يُثار بضوء طوله الموجي 488 نانومتر ويعمل كمانح للطاقة، مقترنًا بصبغة السيانين Cy7، التي تعمل كمستقبل للطاقة وتُصدر فلورة قصوى عند 780 نانومتر. يتم جمع انبعاث الفلوركروم المزدوج PE-Cy7 في كاشف لأطوال موجات الفلورة 750 نانومتر وما فوق. على الرغم من بذل قصارى الجهد لتقليل التباين بين الدفعات في كفاءة نقل طاقة الفلوركروم، قد تُلاحظ اختلافات في الانبعاث المتبقي من PE. لذا، نوصي بإجراء فحوصات تعويض فردية لكل مُقترن PE-Cy7. تم تحسين PE-Cy7 للاستخدام مع ليزر أيون الأرجون الأحادي الذي يُصدر ضوءًا بطول موجي 488 نانومتر، ولا يوجد تداخل يُذكر بين أطياف انبعاث PE-Cy7 وFITC. عند استخدام أجهزة قياس التدفق الخلوي ثنائية الليزر، التي قد تُثير كلاً من PE وCy7 مباشرةً، نوصي باستخدام تعويض الحزمة المتقاطعة أثناء جمع البيانات أو التعويض البرمجي أثناء تحليلها. يُرجى مراعاة الاحتياطات التالية: قد يُؤدي امتصاص الضوء المرئي إلى تغيير كبير في نقل الطاقة الحاصل في أي مُقترن فلوري مزدوج؛ لذلك، نوصي باتخاذ احتياطات خاصة (مثل تغليف القوارير أو الأنابيب أو الحوامل بورق الألومنيوم) لمنع تعريض الكواشف المُقترنة، بما في ذلك الخلايا المصبوغة بتلك الكواشف، لإضاءة الغرفة. تنبيه: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. لذا، يُرجى تخفيف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية، وتقع في الولايات المتحدة. تحذير: قد تُظهر بعض مُقترنات APC-Cy7 وPE-Cy7 تغيرات في طيف انبعاثها عند تعرضها لفترات طويلة للفورمالديهايد. إذا تعذر تحليل العينات المُثبتة خلال أربع ساعات، نوصي باستخدام مُثبت BD™ (رقم المنتج 338036). Cy علامة تجارية لشركة GE Healthcare. يُرجى مراجعة www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية.