BD، 560923، BD Pharmingen™ PE-Cy™7 مضاد TNF بشري للفئران

الاسم البديل: عامل نخر الورم ألفا؛ تنف-أ؛ تنف-α؛ TNFSF2؛ كاشكتين
التفاعل: الإنسان (اختبار مراقبة الجودة)، قرد الريسوس، قرد المكاك، قرد البابون (تم اختباره أثناء التطوير)
النمط المصلي: IgG1 الفأري، κ
المستضد: عامل نخر الورم البشري المؤتلف
التطبيق: التلوين داخل الخلايا (قياس التدفق الخلوي) (يتم اختباره بشكل روتيني)، ELISA (يتم اختباره أثناء التطوير)
حجم العينة لكل اختبار: 5 ميكرولتر
RRID: AB_396764
محلول التخزين: محلول مائي منظم يحتوي على BSA و ≤0.09% أزيد الصوديوم.
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
التحضير والتخزين: يُحفظ غير مخفف في درجة حرارة 4 درجات مئوية، ويُحفظ بعيدًا عن الضوء لفترات طويلة. لا يُجمد. تم تنقية الجسم المضاد أحادي النسيلة من سائل مزرعة الأنسجة أو السائل الاستسقائي باستخدام كروماتوغرافيا التقارب. تم ربط الجسم المضاد بـ PE-Cy7 في ظل الظروف المثلى، وتمت إزالة الجسم المضاد غير المرتبط وPE-Cy7 الحر.
إجراءات الفحص الموصى بها: التلوين المناعي الفلوري وتحليل التدفق الخلوي: يُعد الجسم المضاد MAb11 مفيدًا للتلوين المناعي الفلوري داخل الخلايا وتحليل التدفق الخلوي لتحديد وحصر الخلايا المنتجة لعامل نخر الورم (TNF) ضمن مجموعات الخلايا المختلطة. وتُعد الأجسام المضادة MAb11 المقترنة بـ FITC وPE وAPC وPE-Cy7 (أرقام المنتجات 554512 و554513 و554514 و557647 على التوالي) مناسبة بشكل خاص لهذه الدراسات (انظر الصورة). للحصول على أفضل نتائج التلوين المناعي الفلوري باستخدام تحليل التدفق الخلوي، يُنصح باستخدام هذا الجسم المضاد للسيتوكينات بتركيز 5 ميكرولتر لكل اختبار. وقد وُصفت تقنية التلوين واستخدام ضوابط الحجب بالتفصيل من قِبل سي. بروسين ودي. ميتكالف.³ للاطلاع على المنهجية المحددة، يُرجى زيارة موقعنا الإلكتروني http://www.bdbiosciences.com/us/s/resources، والانتقال إلى قسم البروتوكولات تحت عنوان "السيتوكينات (التلوين داخل الخلايا)" أو "التدفق داخل الخلايا". الكشف باستخدام مقايسة ELISA: يمكن استخدام الجسم المضاد MAb11 المُؤشَّر بالبيوتين (رقم المنتج 554511) كجسم مضاد للكشف في مقايسة ELISA الساندويتشية لقياس مستويات بروتين TNF البشري، وذلك بالاقتران مع الجسم المضاد MAb1 المُستنسخ (رقم المنتج 551220؛ جسم مضاد مُنقَّى من الفئران ضد TNF البشري) كجسم مضاد لالتقاط البروتين، وبروتين TNF البشري المُعاد تركيبه (رقم المنتج 554618) كمعيار. للاطلاع على المنهجية المحددة، يرجى زيارة قسم البروتوكولات تحت "ELISA و ELISPOT" على موقعنا الإلكتروني، http://www.bdbiosciences.com/us/s/resources.
ملاحظات المنتج: تم تخفيف هذا الكاشف مسبقًا للاستخدام بالحجم الموصى به لكل اختبار. نستخدم عادةً 1 × 10^6 خلية في عينة تجريبية بحجم 100 ميكرولتر (اختبار). يجب استخدام عنصر تحكم متماثل النمط بنفس تركيز الجسم المضاد المطلوب. مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية تقع في الولايات المتحدة. تحذير: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. خفف مركبات الأزيد في الماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. PE-Cy7 هو فلوروكروم مزدوج يتكون من R-phycoerythrin (PE)، الذي يتم إثارته بضوء طول موجته 488 نانومتر ويعمل كمانح للطاقة، مقترنًا بصبغة السيانين Cy7، التي تعمل كمستقبل للطاقة وتتألق بشكل أقصى عند 780 نانومتر. يتم جمع انبعاث الفلوركروم المزدوج PE-Cy7 في كاشف لأطوال موجية للفلورة تبلغ 750 نانومتر فأكثر. على الرغم من بذل قصارى الجهد لتقليل التباين بين الدفعات في كفاءة نقل طاقة الفلوركروم، فقد تُلاحظ اختلافات في الانبعاث المتبقي من PE. لذلك، نوصي بإجراء فحوصات تعويض فردية لكل مُقترن PE-Cy7. تم تحسين PE-Cy7 للاستخدام مع ليزر أيون الأرجون الأحادي الذي يُصدر ضوءًا بطول موجي 488 نانومتر، ولا يوجد تداخل كبير بين أطياف انبعاث PE-Cy7 وFITC. عند استخدام أجهزة قياس التدفق الخلوي ثنائية الليزر، والتي قد تُثير كلاً من PE وCy7 مباشرةً، نوصي باستخدام تعويض الحزمة المتقاطعة أثناء جمع البيانات أو التعويض البرمجي أثناء تحليل البيانات. يُرجى مراعاة الاحتياطات التالية: يمكن أن يُغير امتصاص الضوء المرئي بشكل كبير نقل الطاقة الذي يحدث في أي مُقترن فلوري مزدوج؛ لذا، نوصي باتخاذ احتياطات خاصة (مثل تغليف القوارير أو الأنابيب أو الحوامل بورق الألومنيوم) لمنع تعريض الكواشف المقترنة، بما في ذلك الخلايا المصبوغة بهذه الكواشف، لإضاءة الغرفة. تحذير: تُظهر بعض مُقترنات APC-Cy7 وPE-Cy7 تغيرات في طيف انبعاثها مع التعرض المطول للفورمالديهايد. إذا تعذر عليك تحليل العينات المُثبتة خلال أربع ساعات، نوصي باستخدام مُثبت BD™ Stabilizing Fixative (رقم المنتج 338036). للاطلاع على أطياف الفلوركروم وإعدادات الجهاز المناسبة، يُرجى زيارة صفحة قياس التدفق الخلوي متعدد الألوان على موقعنا الإلكتروني www.bdbiosciences.com/colors. Cy هي علامة تجارية لشركة GE Healthcare. قد لا يكون التفاعل المتبادل بين الأنواع الذي تم اكتشافه أثناء تطوير المنتج قد تم تأكيده على جميع الأشكال و/أو التطبيقات. يُرجى مراجعة www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية.