BD، 561181، BD Pharmingen™ Alexa Fluor® 488 Mouse anti-Human FoxP3

الاسم البديل: بروتين صندوق الرأس الشوكي P3؛ سكرفين؛ AIID؛ IPEX؛ JM2؛ ديتر؛ PIDX؛ XPID
التفاعل: بشري (اختبار مراقبة الجودة)
النمط المصلي: IgG1، κ للفأر BALB/c
المستضد: بروتين FoxP3 البشري المؤتلف كامل الطول
التطبيق: التلوين داخل الخلايا (قياس التدفق الخلوي) (يتم اختباره بشكل روتيني)
حجم العينة لكل اختبار: 5 ميكرولتر
RRID: AB_10565976
محلول التخزين: محلول مائي منظم يحتوي على BSA و ≤0.09% أزيد الصوديوم.
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
التحضير والتخزين: تم تنقية الجسم المضاد أحادي النسيلة من سائل مزرعة الأنسجة أو السائل الاستسقائي باستخدام كروماتوغرافيا التقارب. تم ربط الجسم المضاد بصبغة أليكسا فلور® 488 في ظل الظروف المثلى، وتمت إزالة صبغة أليكسا فلور® 488 غير المتفاعلة. يُحفظ غير مخفف في درجة حرارة 4 درجات مئوية، ويُحفظ بعيدًا عن الضوء لفترات طويلة. لا يُجمد.
إجراءات الفحص الموصى بها: إجراءات تحضير الخلايا وتلوينها باستخدام الأجسام المضادة لبروتين FoxP3 البشري المقترنة بصبغة فلورية. 1. اترك المحاليل المنظمة لتصل إلى درجة حرارة الغرفة قبل الاستخدام. حضّر محاليل العمل من مجموعة محاليل BD Pharmingen Human FoxP3 Buffer Set رقم 560098 (للحصول على تفاصيل حول تحضير المحلول المنظم، يُرجى مراجعة ورقة البيانات الفنية الخاصة بتعليمات المحلول المنظم رقم 560098). 2. حضّر خلايا الدم المحيطية أحادية النواة البشرية (PBMC). علّق الخلايا في محلول التلوين BD Pharmingen™ Stain Buffer (FBS)* حتى تركيز 10 ملايين خلية/مل. 3. ضع كمية مناسبة من كاشف التلوين السطحي في قاع كل أنبوب (12 × 75 مم). 4. أضف 100 ميكرولتر من الخلايا إلى كل أنبوب، ثم رجّها جيدًا، واحضنها لمدة 20 دقيقة في درجة حرارة الغرفة بعيدًا عن الضوء. 5. أضف 2 مل من محلول الغسل. 6. لفصل الخلايا، قم بالطرد المركزي بسرعة 250 × g لمدة 10 دقائق لإزالة محلول الغسل. 7. لتثبيت الخلايا، أعد تعليق الخلايا برفق في الحجم المتبقي من محلول الغسل، ثم أضف 2 مل من محلول FoxP3 البشري A بتركيز 1x. رجّ جيداً. حضّن لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة في الظلام. 8. قم بالطرد المركزي بسرعة 500 × g لمدة 5 دقائق، ثم أزل المُثبِّت. تنبيه: انتبه لأن الخلايا طافية. 9. لغسل الخلايا، أعد تعليق كل خلية في 2 مل من محلول BD Pharmingen Stain Buffer (FBS)*، ثم قم بالطرد المركزي بسرعة 500 × g لمدة 5 دقائق. أزل محلول الغسل. 10. لزيادة نفاذية الخلايا، أعد تعليق الخلايا برفق في الحجم المتبقي من محلول الغسل، ثم أضف 0.5 مل من محلول FoxP3 البشري C بتركيز 1x إلى كل أنبوب. رجّ جيداً. حضّن لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة بعيدًا عن الضوء. 10. لغسل الخلايا، أضف 2 مل من محلول التلوين BD Pharmingen (FBS)* إلى كل أنبوب، ثم قم بالطرد المركزي بسرعة 500 × g لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة. أزل المحلول وكرر خطوة الغسل. أزل المحلول مرة أخرى. 11. أضف الجسم المضاد FoxP3 المقترن بتركيزات مناسبة لإعادة تعليق الراسب. رجّ برفق أو استخدم جهاز الخلط الدوامي. 12. حضّن لمدة 30 دقيقة في الظلام في درجة حرارة الغرفة. 13. كرر خطوة الغسل رقم 10. 14. أعد تعليق الخلايا في محلول الغسل وحللها فورًا. اختياري: أضف 300 ميكرولتر من الفورمالديهايد بتركيز 1% في محلول PBS بتركيز 1x، وخزّن عند درجة حرارة 4 درجات مئوية. حلل الخلايا خلال 24 ساعة. نوصي باستخدام محلول التلوين BD Pharmingen™ (FBS؛ رقم المنتج 554656) لجميع خطوات الغسل، وتغطية الأنابيب بأغطية أو غشاء بارافين أثناء خطوات الحضانة. كما نوصي بضبط جهد التشتت الأمامي والجانبي لتصوير الخلايا الليمفاوية بشكل منفصل عن الحطام، وبقايا خلايا الدم الحمراء، و/أو الصفائح الدموية قبل التصوير.
ملاحظات المنتج: تم تخفيف هذا الكاشف مسبقًا للاستخدام بالحجم الموصى به لكل اختبار. نستخدم عادةً 1 × 10^6 خلية في عينة تجريبية بحجم 100 ميكرولتر (اختبار). يُرجى مراجعة www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية. للاطلاع على أطياف الفلوركروم وإعدادات الجهاز المناسبة، يُرجى مراجعة صفحة قياس التدفق الخلوي متعدد الألوان على موقعنا الإلكتروني www.bdbiosciences.com/colors. تُباع مُقترنات الأجسام المضادة المصبوغة بصبغات Alexa Fluor® و Pacific Blue™ و Cascade Blue® في هذا المنتج بموجب ترخيص من شركة Molecular Probes, Inc. للاستخدام البحثي فقط، باستثناء استخدامها مع المصفوفات الدقيقة، أو ككواشف خاصة بتحليل مُحدد. تخضع صبغات Alexa Fluor® (باستثناء Alexa Fluor® 430) وصبغة Pacific Blue™ وصبغة Cascade Blue® لبراءات اختراع قيد الانتظار والصادرة. يتم جمع انبعاث الفلوركروم Alexa Fluor® 488 بنفس إعدادات الجهاز المستخدمة لقياس إيزوثيوسيانات الفلورسين (FITC). Alexa Fluor® علامة تجارية مسجلة لشركة Molecular Probes, Inc.، يوجين، أوريغون. تنبيه: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. خفف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية، وتقع في الولايات المتحدة.