BD، 561493، BD Pharmingen™ PerCP-Cy™5.5 مضاد FoxP3 البشري للفئران

الاسم البديل: بروتين صندوق الرأس الشوكي P3؛ سكرفين؛ AIID؛ IPEX؛ JM2؛ ديتر؛ PIDX؛ XPID
التفاعل: بشري (اختبار مراقبة الجودة)
النمط المصلي: IgG1، κ للفأر BALB/c
المستضد: بروتين FoxP3 البشري المؤتلف كامل الطول
التطبيق: التلوين داخل الخلايا (قياس التدفق الخلوي) (يتم اختباره بشكل روتيني)
حجم العينة لكل اختبار: 5 ميكرولتر
RRID: AB_10714077
محلول التخزين: محلول مائي منظم يحتوي على BSA و ≤0.09% أزيد الصوديوم.
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
التحضير والتخزين: يُحفظ غير مخفف في درجة حرارة 4 درجات مئوية، ويُحفظ بعيدًا عن الضوء لفترات طويلة. لا يُجمد. تم تنقية الجسم المضاد أحادي النسيلة من سائل مزرعة الأنسجة أو السائل الاستسقائي باستخدام كروماتوغرافيا التقارب. تم ربط الجسم المضاد بـ PerCP-Cy5.5 في ظل الظروف المثلى، وتم التخلص من الجسم المضاد غير المرتبط وPerCP-Cy5.5 الحر. لا يُنصح بتخزين مُقترنات PerCP-Cy5.5 في مخفف غير مُحسَّن، فقد يؤدي ذلك إلى فقدان شدة الإشارة.
إجراءات الفحص الموصى بها: إجراءات تحضير الخلايا وتلوينها باستخدام الأجسام المضادة لبروتين FoxP3 البشري المقترنة بصبغة فلورية. 1. اترك المحاليل المنظمة لتصل إلى درجة حرارة الغرفة قبل الاستخدام. حضّر محاليل العمل من مجموعة محاليل BD Pharmingen Human FoxP3 Buffer Set رقم 560098 (للحصول على تفاصيل حول تحضير المحلول المنظم، يُرجى مراجعة ورقة البيانات الفنية الخاصة برقم 560098). 2. حضّر خلايا الدم المحيطية أحادية النواة البشرية (PBMC). علّق الخلايا في محلول التلوين BD Pharmingen™ Stain Buffer (FBS)* حتى تركيز 10 ملايين خلية/مل. 3. ضع كمية مناسبة من كاشف التلوين السطحي في قاع كل أنبوب (12 × 75 مم). 4. أضف 100 ميكرولتر من الخلايا إلى كل أنبوب، ثم رجّها جيدًا، واحضنها لمدة 20 دقيقة في درجة حرارة الغرفة بعيدًا عن الضوء. 5. أضف 2 مل من محلول الغسل. 1. قم بالطرد المركزي على قوة 250 غرام لمدة 10 دقائق لترسيب الخلايا وإزالة محلول الغسل. 2. لتثبيت الخلايا، أعد تعليق الخلايا المترسبة برفق في الحجم المتبقي من محلول الغسل، ثم أضف 2 مل من محلول FoxP3 البشري A بتركيز 1×. رجّ جيداً. حضّن لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة في الظلام. 3. قم بالطرد المركزي على قوة 500 غرام لمدة 5 دقائق، ثم أزل المُثبِّت. تنبيه: انتبه لأن الخلايا المترسبة تطفو. 4. لغسل الخلايا، أعد تعليق كل خلية مترسبة في 2 مل من محلول BD Pharmingen Stain Buffer (FBS)*، ثم قم بالطرد المركزي على قوة 500 غرام لمدة 5 دقائق. أزل محلول الغسل. 5. لزيادة نفاذية الخلايا، أعد تعليق الخلايا المترسبة برفق في الحجم المتبقي من محلول الغسل، ثم أضف 0.5 مل من محلول FoxP3 البشري C بتركيز 1× إلى كل أنبوب. رجّ جيداً. حضّن لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة بعيدًا عن الضوء. 10. لغسل الخلايا، أضف 2 مل من محلول التلوين BD Pharmingen™ (FBS)* إلى كل أنبوب، ثم قم بالطرد المركزي بسرعة 500 غرام لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة. أزل المحلول وكرر خطوة الغسل. أزل المحلول مرة أخرى. 11. أضف الجسم المضاد FoxP3 المقترن بتركيزات مناسبة لإعادة تعليق الراسب. رجّ برفق أو استخدم جهاز الخلط الدوامي. 12. حضّن لمدة 30 دقيقة في الظلام في درجة حرارة الغرفة. 13. كرر خطوة الغسل رقم 10. 14. أعد تعليق الخلايا في محلول الغسل وحللها فورًا. اختياري: أضف 300 ميكرولتر من الفورمالديهايد بتركيز 1% في محلول ملحي فوسفاتي (PBS) بتركيز 1×، وخزّن عند درجة حرارة 4 درجات مئوية. حلل الخلايا خلال 24 ساعة. نوصي باستخدام محلول التلوين BD Pharmingen™ (FBS؛ رقم المنتج 554656) لجميع خطوات الغسل، وتغطية الأنابيب بأغطية أو غشاء بارافين أثناء خطوات الحضانة. كما نوصي بضبط جهد التشتت الأمامي والجانبي لتصوير الخلايا الليمفاوية بشكل منفصل عن الحطام، وبقايا خلايا الدم الحمراء، و/أو الصفائح الدموية قبل التصوير.
ملاحظات المنتج: تم تخفيف هذا الكاشف مسبقًا للاستخدام بالحجم الموصى به لكل اختبار. نستخدم عادةً 1 × 10^6 خلية في عينة تجريبية بحجم 100 ميكرولتر (اختبار). مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية تقع في الولايات المتحدة. يرجى الرجوع إلى www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية. Cy هي علامة تجارية لشركة Amersham Biosciences Limited. يُباع هذا المنتج المُقترن بموجب ترخيص لبراءات الاختراع التالية: براءات الاختراع الأمريكية أرقام 5,486,616؛ 5,569,587؛ 5,569,766؛ 5,627,027. يرجى مراعاة الاحتياطات التالية: يمكن أن يؤدي امتصاص الضوء المرئي إلى تغيير كبير في نقل الطاقة الذي يحدث في أي مُقترن فلوري مزدوج. لذا، نوصي باتخاذ احتياطات خاصة (مثل تغليف القوارير أو الأنابيب أو الحوامل بورق الألومنيوم) لمنع تعرض الكواشف المقترنة، بما في ذلك الخلايا المصبوغة بها، لضوء الغرفة. تنبيه: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. خفف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. يمكن استخدام الأجسام المضادة الموسومة بـ PerCP-Cy5.5 مع الكواشف الموسومة بـ FITC وR-PE في أجهزة قياس التدفق الخلوي أحادية الليزر دون تداخل طيفي كبير بين تألق PerCP-Cy5.5 وFITC وR-PE. تم تحسين PerCP-Cy5.5 للاستخدام مع ليزر أيون الأرجون أحادي ينبعث منه ضوء بطول موجي 488 نانومتر. نظراً لطيف الامتصاص الواسع للفلوركروم المزدوج، يجب توخي الحذر عند استخدام أجهزة قياس التدفق الخلوي ثنائية الليزر، حيث قد تُثير هذه الأجهزة كلاً من PerCP وCy5.5™ بشكل مباشر. نوصي باستخدام تعويض الحزمة المتقاطعة أثناء جمع البيانات أو التعويض البرمجي أثناء تحليلها. للاطلاع على أطياف الفلوركروم وإعدادات الجهاز المناسبة، يُرجى زيارة صفحة قياس التدفق الخلوي متعدد الألوان على موقعنا الإلكتروني www.bdbiosciences.com/colors. يخضع هذا المنتج لحقوق الملكية الفكرية لشركة Amersham Biosciences Corp. وجامعة كارنيجي ميلون، ويتم تصنيعه وبيعه بموجب ترخيص من شركة Amersham Biosciences Corp. هذا المنتج مُرخص للبيع لأغراض البحث العلمي فقط، ولا يُرخص لأي استخدام آخر. إذا كنتَ بحاجة إلى ترخيص تجاري لاستخدام هذا المنتج ولم يكن لديك ترخيص، يُرجى إعادة هذه المادة غير مفتوحة إلى BD Biosciences، 10975 Torreyana Rd، سان دييغو، كاليفورنيا 92121، وسيتم رد أي مبلغ مدفوع مقابلها.