BD، 561908، محلول BD Pharmingen™ Hoechst 33342

التحضير والتخزين: يُحفظ غير مخفف في درجة حرارة 4 درجات مئوية، ويُحفظ بعيداً عن الضوء لفترات طويلة. لا يُجمد.
إجراءات الفحص الموصى بها: التلوين المناعي الفلوري للخلايا الحية لتصوير النواة 1. خفف محلول هوكست 33342 إلى تركيز 5-10 ميكروغرام/مل في وسط كامل مباشرةً قبل الاستخدام. 2. أضف محلول هوكست 33342 إلى كل عينة واحضنها عند 37 درجة مئوية لمدة 30-60 دقيقة. يعتمد وقت التلوين المطلوب على نوع الخلية. 3. أزل محلول هوكست من الخلايا في نهاية فترة التحضين وأضف محلول التلوين BD Pharmingen™ (FBS) (رقم المنتج 554656) أو محلول الفوسفات الملحي (PBS) بتركيز 1×. يمكن أيضًا تحليل الخلايا دون غسل، ولكن قد يؤدي ذلك إلى زيادة التشويش الناتج عن الصبغة غير المرتبطة. 4. انتقل إلى التصوير. التلوين المناعي الفلوري للخلايا المثبتة لتصوير النواة 1. ثبت الخلايا واجعلها نفاذة حسب الرغبة. ٢. خفف محلول هوكست ٣٣٣٤٢ إلى تركيز ٢ ميكروغرام/مل في محلول فوسفات ملحي (PBS) بتركيز ١× مباشرةً قبل الاستخدام. ٣. أضف ٢ ميكروغرام/مل من محلول هوكست ٣٣٣٤٢ إلى كل عينة قبل ١٥ دقيقة على الأقل من التحليل. ٤. ابدأ التصوير. تلوين الخلايا الحية لتحليل محتوى الحمض النووي باستخدام قياس التدفق الخلوي: ١. احصل على معلق خلوي أحادي. ٢. أعد تعليق الخلايا بتركيز ١×١٠^٦ خلية/مل أو أقل في وسط كامل يحتوي على ٥-١٠ ميكروغرام/مل من هوكست ٣٣٣٤٢. ملاحظة: بدلاً من ذلك، يمكن إضافة هوكست ٣٣٣٤٢ مباشرةً إلى وسط الاستنبات دون ترسيب إذا لم تتجاوز كثافة خلايا الاستنبات ١×١٠^٦ خلية/مل. ٣. حضّن عند درجة حرارة ٣٧ درجة مئوية لمدة ٣٠-٦٠ دقيقة. قد تختلف الكثافة الخلوية المثلى، وتركيز صبغة هوكست 33342، ومدة التلوين لتحليل محتوى الحمض النووي باختلاف نوع الخلية. ينبغي تحسين ظروف التحليل في التجارب الأولية للحصول على أفضل النتائج. 4. افصل الخلايا بالطرد المركزي، ثم اسحب الوسط الحاوي على صبغة هوكست 33342. 5. أعد تعليق الخلايا في محلول التلوين BD Pharmingen™ (FBS) أو محلول الفوسفات الملحي (PBS) بتركيز 1×، ثم تابع التحليل باستخدام قياس التدفق الخلوي. تلوين الخلايا المثبتة لتحليل محتوى الحمض النووي باستخدام قياس التدفق الخلوي: 1. احصل على معلق خلوي أحادي. 2. عالج الخلايا على الجليد لمدة 30 دقيقة باستخدام إيثانول بارد بنسبة 70-80%. أ. يوفر التثبيت بالإيثانول عادةً أكثر الرسوم البيانية وضوحًا. مع ذلك، استُخدم هذا الكاشف بنجاح لتحليل محتوى الحمض النووي باستخدام مجموعة محلول عامل النسخ (رقم المنتج 562574) أو محلول التثبيت BD Cytofix™ (رقم المنتج 554655) وبروتوكول BD Phosflow™ Perm III (رقم المنتج 558050). 3. اغسل الخلايا مرة واحدة بمحلول التلوين BD Pharmingen™ (FBS). 4. خفف محلول Hoechst 33342 إلى تركيز 1-5 ميكروغرام/مل في محلول التلوين BD Pharmingen™ (FBS) أو محلول الفوسفات الملحي (PBS) بتركيز 1× مباشرةً قبل الاستخدام. 5. لون الخلايا لمدة 15 دقيقة بكثافة خلوية 1×10^6 خلية/مل. لا حاجة للغسل قبل التحليل. أ. قد تختلف الكثافة الخلوية المثلى وتركيز Hoechst 33342 لتحليل محتوى الحمض النووي باختلاف نوع الخلية. ينبغي تحسين ظروف التحليل في التجارب الأولية للحصول على أفضل النتائج. 6. انتقل إلى التحليل باستخدام قياس التدفق الخلوي. يتوفر هذا المنتج أيضًا كجزء من مجموعة دورة الخلية (رقم المنتج 558662). يُرجى مراجعة ورقة البيانات الفنية للمجموعة للاطلاع على بروتوكول مفصل لاستخدام صبغة هوكست 333342 مع التلوين المناعي الفلوري للخلايا المزروعة.
إشعارات المنتج: يُرجى مراجعة www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية. تم تطوير هذا الجسم المضاد واعتماده لتطبيقات التصوير الحيوي. مع ذلك، لا يُجرى اختبار التصوير الحيوي الروتيني على كل دفعة. يُنصح الباحثون بمعايرة الكاشف للحصول على أفضل أداء. نظرًا لاختلاف التطبيقات، ينبغي على كل باحث معايرة الكاشف للحصول على أفضل النتائج. Alexa Fluor® علامة تجارية مسجلة لشركة Molecular Probes, Inc.، يوجين، أوريغون. FlowJo علامة تجارية لشركة Tree Star Inc.