BD، 562026، BD Pharmingen™ FITC Rat Anti-Mouse IgG1

الاسم البديل: Ighg1؛ الغلوبولين المناعي الثقيل الثابت غاما 1؛ Igh-4
التفاعل: الفأر (اختبار مراقبة الجودة)
النمط المصلي: فأر LOU، المعروف أيضًا باسم Louvain، LOU/C، LOU/M IgG1، κ
المستضد: IgG1 الفأر المجمع
التطبيق: قياس التدفق الخلوي (يتم اختباره بشكل روتيني)، التلوين داخل الخلايا (قياس التدفق الخلوي) (يتم اختباره أثناء التطوير)
التركيز: 0.5 ملغم/مل
RRID: AB_10926376
محلول التخزين: محلول مائي منظم يحتوي على مثبت البروتين و ≤0.09% أزيد الصوديوم.
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
التحضير والتخزين: يُحفظ غير مخفف في درجة حرارة 4 درجات مئوية، ويُحفظ بعيدًا عن الضوء لفترات طويلة. لا يُجمد. تم تنقية الجسم المضاد أحادي النسيلة من سائل مزرعة الأنسجة أو السائل الاستسقائي باستخدام كروماتوغرافيا التقارب. تم ربط الجسم المضاد بـ FITC في ظل الظروف المثلى، وتمت إزالة FITC غير المتفاعل.
إجراءات الفحص الموصى بها: يمكن استخدام الجسم المضاد A85-1 المرتبط بـ FITC ككاشف أولي أو ثانوي في التلوين المناعي الفلوري. بروتوكول التلوين المناعي الفلوري للغلوبولين المناعي داخل الخلايا (Ig): 1. تحضير معلق خلوي أحادي وتحديد عدد الخلايا. 2. تعليق الخلايا في محلول التلوين BD Pharmingen™ مع مصل بقري جنيني (رقم المنتج 554656) بتركيز 2 × 10^7 خلية/مل، ونقلها إلى صفائح ميكروية ذات قاع على شكل حرف U بمقدار 50 ميكرولتر/بئر للتلوين المناعي الفلوري. 3. قم بحجب مستقبلات Fcγ بإضافة 0.2 ميكروغرام من الجسم المضاد 2.4G2 النقي (Mouse BD Fc Block™ purified anti-mouse CD16/CD32 mAb 2.4G2) (رقم المنتج 553141/553142) في 50 ميكرولتر من محلول التلوين إلى كل بئر. 4. حضّن لمدة 5 دقائق على الجليد. 5. أضف 200 ميكرولتر من محلول التلوين لكل بئر وأعد تعليق الخلايا. قم بالطرد المركزي عند 250 × g لمدة 5 دقائق ثم اسحب السائل الطافي. 6. قم بحجب الغلوبولين المناعي السطحي باستخدام الجسم المضاد A85-1 mAb النقي (رقم المنتج 553440) بإضافة 1.0 ميكروغرام لكل عينة في 50 ميكرولتر من محلول التلوين لكل بئر. 7. حضّن لمدة 15 دقيقة على الجليد. ٨. اغسل مرتين كما هو موضح في الخطوة ٥. ٩. أعد تعليق الخلايا في ١٠٠ ميكرولتر من محلول التلوين داخل الخلايا BD Cytofix/Cytoperm™ (مجموعة BD Cytofix/Cytoperm™، رقم المنتج ٥٥٤٧١٤) لكل بئر. ١٠. حضّن لمدة ٣٠ دقيقة في درجة حرارة الغرفة. ١١. اغسل مرتين باستخدام ٢٠٠ ميكرولتر من محلول Perm/Wash بتركيز ١x (المرفق مع مجموعة BD Cytofix/Cytoperm) لكل بئر. قم بالطرد المركزي عند ٢٥٠ × جم لمدة ٥ دقائق، واسحب السائل الطافي بين الغسلات. ١٢. لوّن الغلوبولين المناعي داخل الخلايا بإضافة ≤١ ميكروغرام من الجسم المضاد أحادي النسيلة A85-1 المرتبط بـ FITC في ٥٠ ميكرولتر من محلول Perm/Wash بتركيز ١x لكل بئر. ملاحظة: يمكن إضافة أجسام مضادة أخرى موصى بها لتلوين المؤشرات داخل الخلايا خلال هذه الخطوة كما هو موضح في الخطوة 12. 13. حضّن لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. 14. اغسل مرتين كما هو موضح في الخطوة 11. 15. أعد تعليق العينات وانقلها في 100 ميكرولتر من محلول التلوين إلى أنابيب مناسبة للتحليل باستخدام جهاز قياس التدفق الخلوي. ارفع حجم كل أنبوب إلى 400 ميكرولتر باستخدام محلول التلوين. 16. حلل العينات باستخدام جهاز قياس التدفق الخلوي. ملاحظة: يمكن تلوين المؤشرات السطحية خلال هذه الخطوة كما هو موضح في "التلوين المناعي الفلوري لكريات الدم البيضاء للفئران والجرذان لقياس التدفق الخلوي" في قسم البروتوكولات الفنية على موقعنا الإلكتروني على الرابط التالي: http://www.bdbiosciences.com/support/resources/flowcytometry/index.jsp
ملاحظات المنتج: نظرًا لاختلاف التطبيقات، ينبغي على كل باحث معايرة الكاشف للحصول على أفضل النتائج. يُرجى مراجعة www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية. تحذير: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. خفف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. للاطلاع على أطياف الفلوركروم وإعدادات الجهاز المناسبة، يُرجى مراجعة صفحة قياس التدفق الخلوي متعدد الألوان على موقعنا الإلكتروني www.bdbiosciences.com/colors. يجب استخدام عنصر تحكم متماثل النمط بنفس تركيز الجسم المضاد المطلوب.