BD، 562271، مجموعة فرز الخلايا العصبية البشرية BD Stemflow™

التفاعل: بشري (تم تأكيد التفاعل أثناء النمو)
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
RRID: AB_2869412
الوصف: صُممت مجموعة BD Stemflow™ لعزل الخلايا العصبية لتمكين عزل الخلايا الجذعية العصبية (NSCs) المشتقة من الخلايا الجذعية متعددة القدرات البشرية، أو عزل الخلايا العصبية والخلايا الدبقية من الخلايا الجذعية العصبية المتمايزة. باتباع مجموعة متنوعة من بروتوكولات التحفيز العصبي المُعتمدة، يتم فرز الخلايا الجذعية العصبية من مزرعة الخلايا غير المتجانسة باستخدام الأجسام المضادة المُقترنة بخمسة مؤشرات سطحية للخلايا. تُقلل هذه الطريقة بشكل كبير من التباين بين عمليات عزل الخلايا الجذعية العصبية مقارنةً بالطرق التقليدية مثل العزل اليدوي. بالإضافة إلى ذلك، يمكن استخدام أربعة من الأجسام المضادة الخمسة المُقترنة لعزل الخلايا العصبية من الخلايا الدبقية من الخلايا الجذعية العصبية المتمايزة. مكونات المجموعة: المكون، الوصف، الحجم. محلول تخزين لكل اختبار 51-9007757 PE مضاد CD24 بشري للفأر، 20 اختبار، 5 ميكرولتر، محلول مائي منظم يحتوي على BSA وأقل من 0.09% أزيد الصوديوم. 51-9007758 PerCP-Cy™5.5 مضاد CD271 بشري للفأر، 20 اختبار، 5 ميكرولتر، محلول مائي منظم يحتوي على BSA وأقل من 0.09% أزيد الصوديوم. 51-9007759 PerCP-Cy™5.5 مضاد CD44 بشري للفأر، 20 اختبار، 5 ميكرولتر، محلول مائي منظم يحتوي على BSA وأقل من 0.09% أزيد الصوديوم. 51-9007760 PE-Cy™7 مضاد CD15 بشري للفأر، 20 اختبار، 5 ميكرولتر، محلول مائي منظم يحتوي على BSA وأقل من 0.09% أزيد الصوديوم. 51-9007761 APC مضاد بشري للفأر اختبار CD184 20، 5 ميكرولتر، محلول مائي منظم يحتوي على BSA وأقل من 0.09% أزيد الصوديوم، 51-9007762، PE، تحكم نمطي متماثل للفأر IgG1، κ، اختبار 10، 5 ميكرولتر، محلول مائي منظم يحتوي على BSA وأقل من 0.09% أزيد الصوديوم، 51-9007763، PerCP-Cy™5.5، اختبار 10، 5 ميكرولتر، محلول مائي منظم يحتوي على تحكم نمطي متماثل لـ 51-007758 BSA وأقل من 0.09% أزيد الصوديوم، 51-9007764، PerCP-Cy™5.5، اختبار 10، 5 ميكرولتر، محلول مائي منظم يحتوي على تحكم نمطي متماثل لـ 51-9007759 BSA وأقل من 0.09% أزيد الصوديوم 51-9007765 PE-Cy™7 مضاد IgM الفأري، κ، للتحكم في النمط المتساوي، 10 اختبارات، 5 ميكرولتر، محلول مائي منظم يحتوي على BSA وأقل من 0.09% أزيد الصوديوم. 51-9007766 APC مضاد IgG1 الفأري، κ، للتحكم في النمط المتساوي، 10 اختبارات، 5 ميكرولتر، محلول مائي منظم يحتوي على BSA وأقل من 0.09% أزيد الصوديوم. 51-9007767 التحكم السلبي CompBead Plus، 1.5 مل، قطرة واحدة، محلول مائي منظم يحتوي على BSA وأقل من 0.09% أزيد الصوديوم. 51-9007768 مضاد Ig الفأري، κ، CompBead Plus، 1.5 مل، قطرة واحدة، محلول مائي منظم يحتوي على BSA وأقل من 0.09% أزيد الصوديوم. النوعية، الاستنساخ، الجزيء، النمط الظاهري NSC، النمط الظاهري العصبي، النمط الظاهري الدبقي، CD15، HI98 X-hapten، SSEA-1 -/+ منخفض NA CD24 ML5 مستضد ثابت حراريًا + + NA CD44 G44-26 H-CAM - - + CD184 12G5 CXCR4، Fusin + - + CD271 C40-1457 مستقبل NGF - NA NA
التحضير والتخزين: يُحفظ غير مخفف في درجة حرارة 4 درجات مئوية، ويُحفظ بعيدًا عن الضوء لفترات طويلة. لا يُجمد. تم ربط الجسم المضاد بـ R-PE في ظل الظروف المثلى، وتمت إزالة الجسم المضاد غير المرتبط وPE الحر. تم ربط الجسم المضاد بـ PerCP-Cy5.5 في ظل الظروف المثلى، وتمت إزالة الجسم المضاد غير المرتبط وPerCP-Cy5.5 الحر. لا يُنصح بتخزين مُقترنات PerCP-Cy5.5 في مُخفف غير مُحسَّن، فقد يؤدي ذلك إلى فقدان شدة الإشارة. تم ربط الجسم المضاد بـ PE-Cy7 في ظل الظروف المثلى، وتمت إزالة الجسم المضاد غير المرتبط وPE-Cy7 الحر. تم ربط الجسم المضاد بـ APC في ظل الظروف المثلى، وتمت إزالة الجسم المضاد غير المرتبط وAPC الحر.
إجراءات الفحص الموصى بها: لقد حصلنا على نتائج متسقة مع سلالة الخلايا الجذعية الجنينية البشرية H9 (WiCell، ماديسون، ويسكونسن)، واتبعنا طرق تحفيز الخلايا العصبية باستخدام الأجسام الجنينية الخالية من المصل، بالإضافة إلى تثبيط SMAD المزدوج (Noggin وSB431542). لتحفيز التمايز العصبي، نوصي بترك الخلايا الجذعية العصبية (NSC) لمدة لا تقل عن 3 أسابيع، حيث تتطلب الخلايا الدبقية الموجبة المزدوجة لـ CD44/CD184 فترات استزراع أطول للتمايز. (للمزيد من التفاصيل، يُرجى مراجعة Yuan et al. PLoS One. 2011 Mar 2;6(3):e17540). ونظرًا لاختلاف الخلايا وطرق الاستزراع، نوصي بإجراء تحليل زمني لتحديد التوقيت المناسب لتجارب فرز الخلايا. (جميع الخطوات مُنفذة باستخدام تقنيات معقمة). 1. افصل الخلايا المطلوبة من طبق الاستزراع. يُنصح الباحثون بفصل الخلايا عند درجة حرارة 37 درجة مئوية باستخدام محلول فصل الخلايا Accutase™ (رقم المنتج 561527). أ. يمكن استخدام رج خفيف عند الحاجة للحصول على معلق خلوي أحادي. ب. قد يستغرق فصل الخلايا العصبية ما يصل إلى 45 دقيقة. 2. اجمع الخلايا وقم بترسيبها بالطرد المركزي. أعد تعليق الخلايا في 10 مل من وسط الاستنبات الأساسي مع المكملات (مثل DMEM/F12 + 1X N2 + 1XB27) يحتوي على 100 وحدة/مل من إنزيم DNAse. حضّنها في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقائق. 3. رشّح الخلايا من خلال مصفاة خلايا بمسام 70 ميكرومتر، ثم قم بترسيبها بالطرد المركزي وأعد تعليقها بتركيز 10 ملايين خلية/مل في وسط الاستنبات الأساسي مع المكملات، وكذلك مع 5 ملي مولار من EDTA + 0.5% من BSA. ٤. ضع علامات على الأنابيب وأضف مُقترنات الأجسام المضادة المناسبة كما هو موضح (استخدم الجداول المناسبة المدرجة أدناه لتحضير الخلايا). أ. استخدم أنابيب معقمة مقاس ١٢×٧٥ مم مزودة بأغطية. ٥. أضف ١٠٠ ميكرولتر من الخلايا إلى الأنبوبين ٦ و٧. ٦. أضف ما يصل إلى ١ مل من الخلايا إلى الأنبوب ٨. أ. إذا كنت ترغب في فرز أكثر من ١٠ ملايين خلية، فنوصي بتكرار الأنبوب ٨ مع خلايا إضافية ترغب في فرزها. ٧. حضّن الخلايا على الجليد في الظلام لمدة ٢٠-٣٠ دقيقة. ٨. اغسل مرة واحدة بـ ٢ مل من الوسط الأساسي مع المُكمّلات، وكذلك ٥ ملي مولار من EDTA + ٠.٥٪ من BSA. ٩. أعد تعليق الخلايا في الوسط الأساسي مع المُكمّلات، وكذلك ٥ ملي مولار من EDTA + ٠.٥٪ من BSA بتركيز من ٢.٥ إلى ٥ ملايين خلية/مل. أو بدلاً من ذلك، يرجى الاتصال بمشغل جهاز فرز الخلايا الخاص بك للحصول على التركيز النهائي المقترح للخلايا المراد فرزها. تلوين الحث العصبي (فرز الخلايا الجذعية العصبية) إضافة ملصق الأنبوب (اختبار واحد/قطرة) 1. تعويض غير مُعلَّم: خرزة تعويض سلبية + خرزة تعويض مضادة للفأر 2. تعويض PE: خرزة تعويض سلبية + خرزة تعويض مضادة للفأر + CD24 PE 3. تعويض PerCP-Cy™5.5: خرزة تعويض سلبية + خرزة تعويض مضادة للفأر + CD271 PerCP-Cy™5.5 4. تعويض PE-Cy7: خرزة تعويض سلبية + خرزة تعويض مضادة للفأر + CD15 PE Cy™7 5. تعويض APC: خرزة تعويض سلبية + خرزة تعويض مضادة للفأر + CD184 APC 6. خلايا فقط: لا شيء 7. عنصر تحكم متماثل النمط: Ms IgG1, k PE + Ms IgG1 PerCP-Cy5.5 (عنصر تحكم متماثل النمط CD44) + Ms IgG1 PerCP-Cy5.5 (عنصر تحكم متماثل النمط CD271) (التحكم) + Ms IgM PE-Cy7 + Ms IgG1 APC 8. فرز العينة CD24 PE + CD44 PerCP-Cy5.5 + CD271 PerCP-Cy5.5 + CD15 PE-Cy7 + CD184 APC فرز الخلايا العصبية والخلايا الدبقية إضافة علامة الأنبوب (اختبار واحد/قطرة) 1. تعويض غير موسوم خرزة تعويض سلبية + خرزة تعويض مضادة للفأر 2. تعويض PE خرزة تعويض سلبية + خرزة تعويض مضادة للفأر + CD24 PE 3. تعويض PerCP-Cy™5.5 خرزة تعويض سلبية + خرزة تعويض مضادة للفأر + CD44 PerCP-Cy™5.5 4. تعويض PE-Cy7 خرزة تعويض سلبية + خرزة تعويض مضادة للفأر + CD15 PE Cy™7 5. تعويض APC خرزة تعويض سلبية + خرزة تعويض مضادة للفأر + CD184 APC 6. الخلايا وحدها: لا شيء. 7. عنصر تحكم متماثل النمط: Ms IgG1، k PE + Ms IgG1 PerCP-Cy5.5 (CD44 ITCL) + Ms IgM PE-Cy7 + Ms IgG1 APC. 8. فرز العينة: CD24 PE + CD44 PerCP-Cy5.5 + CD15 PE-Cy7 + CD184 APC.
إشعارات المنتج: يُرجى مراعاة الاحتياطات التالية: قد يؤدي امتصاص الضوء المرئي إلى تغيير كبير في نقل الطاقة في أي مُقترن فلوري مزدوج؛ لذا، نوصي باتخاذ احتياطات خاصة (مثل تغليف القوارير أو الأنابيب أو الحوامل بورق الألومنيوم) لمنع تعريض الكواشف المُقترنة، بما في ذلك الخلايا المصبوغة بها، لإضاءة الغرفة. يمكن استخدام الأجسام المضادة الموسومة بـ PerCP-Cy5.5 مع الكواشف الموسومة بـ FITC وR-PE في أجهزة قياس التدفق الخلوي أحادية الليزر دون تداخل طيفي كبير بين فلورة PerCP-Cy5.5 وFITC وR-PE. تم تحسين PerCP-Cy5.5 للاستخدام مع ليزر أيون الأرجون أحادي يُصدر ضوءًا بطول موجي 488 نانومتر. نظراً لطيف الامتصاص الواسع للفلوروكروم المزدوج، يجب توخي الحذر الشديد عند استخدام أجهزة قياس التدفق الخلوي ثنائية الليزر، حيث قد تُثير مباشرةً كلاً من PerCP وCy5.5™. نوصي باستخدام تعويض الحزمة المتقاطعة أثناء جمع البيانات أو التعويض البرمجي أثناء تحليلها. يخضع هذا المنتج لحقوق الملكية الفكرية لشركة Amersham Biosciences Corp. وجامعة كارنيجي ميلون، ويتم تصنيعه وبيعه بموجب ترخيص من شركة Amersham Biosciences Corp. هذا المنتج مرخص للبيع لأغراض البحث العلمي فقط، ولا يُرخص لأي استخدام آخر. إذا كنتَ بحاجة إلى ترخيص تجاري لاستخدام هذا المنتج ولم يكن لديك واحد، فيُرجى إعادة هذه المادة غير مفتوحة إلى BD Biosciences، 10975 Torreyana Rd، سان دييغو، كاليفورنيا 92121، وسيتم رد أي مبلغ مدفوع مقابلها. مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية تقع في الولايات المتحدة. تحذير: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. قم بتخفيف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. يرجى مراجعة الموقع الإلكتروني www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية.