BD، 562421، BD Horizon™ PE-CF594 مضاد FoxP3 البشري للفأر

الاسم البديل: سكورفين؛ IPEX؛ JM2؛ AIID؛ XPID؛ DIETER؛ PIDX
التفاعل: بشري (اختبار مراقبة الجودة)
النمط المصلي: IgG1 للفأر BALB/c
المستضد: FoxP3
التطبيق: التلوين داخل الخلايا (قياس التدفق الخلوي) (يتم اختباره بشكل روتيني)
حجم العينة لكل اختبار: 5 ميكرولتر
RRID: AB_11153143
محلول التخزين: محلول مائي منظم يحتوي على BSA و ≤0.09% أزيد الصوديوم.
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
التحضير والتخزين: يُحفظ غير مخفف في درجة حرارة 4 درجات مئوية، ويُحفظ بعيدًا عن الضوء لفترات طويلة. لا يُجمد. تم تنقية الجسم المضاد أحادي النسيلة من سائل مزرعة الأنسجة أو السائل الاستسقائي باستخدام كروماتوغرافيا التقارب. تم ربط الجسم المضاد بـ BD Horizon™ PE-CF594 في ظل الظروف المثلى، وتمت إزالة الجسم المضاد غير المرتبط و PE-CF594 الحر.
إجراءات الفحص الموصى بها: إجراءات تحضير الخلايا وتلوينها باستخدام الأجسام المضادة البشرية FoxP3 المقترنة 1. اترك المحاليل المنظمة لتصل إلى درجة حرارة الغرفة قبل الاستخدام. حضّر محاليل العمل من مجموعة محاليل BD Pharmingen™ Human FoxP3 Buffer Set (رقم المنتج 560098) (للحصول على تفاصيل حول تحضير المحلول المنظم، يُرجى مراجعة تعليمات TDS رقم المنتج 560098). 2. حضّر خلايا الدم المحيطية أحادية النواة البشرية (PBMC). خفف الخلايا باستخدام محلول التلوين BD Pharmingen Stain Buffer (FBS)* إلى تركيز 1 × 10^7 خلية/مل. 3. ضع كمية مناسبة من كاشف التلوين السطحي في قاع كل أنبوب (12 × 75 مم). 4. أضف 100 ميكرولتر من الخلايا لكل أنبوب، ثم رجّها جيدًا، واحضنها لمدة 20 دقيقة في درجة حرارة الغرفة، مع حمايتها من الضوء. 5. أضف 2 مل من محلول الغسل. قم بالطرد المركزي بسرعة 250 × g لمدة 10 دقائق، ثم أزل محلول الغسل. ٦. لتثبيت الخلايا، أعد تعليق كتلة الخلايا برفق في الحجم المتبقي من محلول الغسل، ثم أضف ٢ مل من محلول FoxP3 البشري A بتركيز ١x. رجّ جيداً. حضّن لمدة ١٠ دقائق في درجة حرارة الغرفة في الظلام. ٧. افصل الخلايا بالطرد المركزي عند ٥٠٠ × جم لمدة ٥ دقائق، ثم أزل المُثبِّت. تنبيه: انتبه لأن كتلة الخلايا طافية. ٨. لغسل الخلايا، أعد تعليق كل كتلة خلايا في ٢ مل من محلول BD Pharmingen Stain Buffer (FBS)*، ثم افصل بالطرد المركزي عند ٥٠٠ × جم لمدة ٥ دقائق. أزل محلول الغسل. ٩. لزيادة نفاذية الخلايا، أعد تعليق كتلة الخلايا برفق في الحجم المتبقي من محلول الغسل، ثم أضف ٠.٥ مل من محلول FoxP3 البشري C بتركيز ١x إلى كل أنبوب. رجّ جيداً. حضّن لمدة ٣٠ دقيقة في درجة حرارة الغرفة، مع حمايتها من الضوء. ١٠. لغسل الخلايا، أضف ٢ مل من محلول التلوين BD Pharmingen (FBS)* إلى كل أنبوب، ثم قم بالطرد المركزي بسرعة ٥٠٠ × جم لمدة ٥ دقائق في درجة حرارة الغرفة. أزل المحلول وكرر خطوة الغسل. ١١. أضف الجسم المضاد FoxP3 المقترن بتركيزات مناسبة لإعادة تعليق الخلايا. رجّ برفق أو استخدم جهاز الخلط الدوامي. ١٢. حضّن لمدة ٣٠ دقيقة في الظلام في درجة حرارة الغرفة. ١٣. كرر خطوة الغسل رقم ١٠. ١٤. أعد تعليق الخلايا في محلول الغسل وحللها باستخدام قياس التدفق الخلوي فورًا. اختياري: أضف ٣٠٠ ميكرولتر من الفورمالديهايد بتركيز ١٪ في محلول ملحي فوسفاتي ١x، وخزّن عند درجة حرارة ٤ درجات مئوية. حلل الخلايا خلال ٢٤ ساعة. * يُوصى بما يلي: 1) استخدام محلول التلوين BD Pharmingen™ (FBS؛ رقم المنتج 554656) لجميع خطوات الغسل، وتغطية الأنابيب بأغطية أو غشاء Parafilm M® أثناء خطوات الحضانة، و2) ضبط جهد تشتت الضوء الأمامي والجانبي الأمثل لتمييز الخلايا الليمفاوية عن الحطام، وبقايا خلايا الدم الحمراء، و/أو الصفائح الدموية قبل التصوير. ** يجب الحصول على ما لا يقل عن 15000 إلى 25000 خلية ليمفاوية موجبة لـ CD4.
ملاحظات المنتج: تم تخفيف هذا الكاشف مسبقًا للاستخدام بالحجم الموصى به لكل اختبار. نستخدم عادةً 1 × 10^6 خلية في عينة تجريبية بحجم 100 ميكرولتر (اختبار). مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية تقع في الولايات المتحدة. يجب استخدام عنصر تحكم متماثل النمط بنفس تركيز الجسم المضاد المطلوب. تحذير: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. خفف مركبات الأزيد في الماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. يرجى مراعاة الاحتياطات التالية: يمكن أن يؤدي امتصاص الضوء المرئي إلى تغيير كبير في نقل الطاقة الذي يحدث في أي مركب فلوري مزدوج؛ لذلك، نوصي باتخاذ احتياطات خاصة (مثل تغليف القوارير أو الأنابيب أو الحوامل بورق الألومنيوم) لمنع تعرض الكواشف المقترنة، بما في ذلك الخلايا المصبوغة بهذه الكواشف، لإضاءة الغرفة. للاطلاع على أطياف الفلوركروم وإعدادات الجهاز المناسبة، يُرجى زيارة صفحة قياس التدفق الخلوي متعدد الألوان على موقعنا الإلكتروني www.bdbiosciences.com/colors. تكساس ريد علامة تجارية مسجلة لشركة موليكولار بروبس، يوجين، أوريغون. CF™ علامة تجارية لشركة بيوتيوم. عند الإثارة بواسطة ليزر أصفر-أخضر (561 نانومتر)، قد يكون التألق أكثر سطوعًا منه عند الإثارة بواسطة ليزر أزرق (488 نانومتر). يُقدَّم هذا المنتج بموجب اتفاقية بين بيوتيوم وبي دي بيوساينسز. يخضع تصنيع هذا المنتج أو استخدامه أو بيعه أو عرضه للبيع أو استيراده لبراءة اختراع واحدة أو أكثر أو طلبات براءات اختراع قيد الانتظار مملوكة أو مرخصة لشركة بيوتيوم. يُسمح باستخدام هذا المنتج، وبالكمية التي اشتراها المشتري فقط، لأغراض البحث الداخلي الخاص بالمشتري، بما يتوافق مع كتيب المنتج المرفق. لا يُمنح أي حق آخر في استخدام أو بيع أو نقل (أ) هذا المنتج، أو (ب) مكوناته، صراحةً أو ضمنًا أو بموجب مبدأ الإغلاق القضائي. هذا المنتج مخصص للاستخدام البحثي فقط. تتطلب الاستخدامات التشخيصية ترخيصًا منفصلاً من شركة Biotium, Inc. للحصول على معلومات حول شراء ترخيص لهذا المنتج، بما في ذلك لأغراض أخرى غير البحث، يُرجى التواصل مع شركة Biotium, Inc.، 3159 Corporate Place, Hayward, CA 94545، هاتف: (510) 265-1027، فاكس: (510) 265-1352، بريد إلكتروني: btinfo@biotium.com. نظرًا لطيف الامتصاص الواسع للفلوروكروم المزدوج، يجب توخي الحذر عند استخدام أجهزة قياس التدفق الخلوي متعددة الليزر، حيث قد تُثير هذه الأجهزة كلاً من PE وCF™594 بشكل مباشر. جميع العلامات التجارية الأخرى هي ملك لأصحابها. يُرجى مراجعة www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية.