BD، 562505، BD Pharmingen™ Alexa Fluor® 488 مضاد بيتا-كاتينين للفأر

الاسم البديل: CTNNB1؛ CTNB1؛ كاتينين بيتا-1؛ كاتينين (بروتين مرتبط بالكادهيرين) بيتا 1
التفاعل: بشري (اختبار مراقبة الجودة)، فأر (تم اختباره أثناء التطوير)
النمط المصلي: IgG1 الفأري
المستضد: بيتا-كاتينين الفأري، الأحماض الأمينية 571-781
التطبيقات: التصوير الحيوي، التألق المناعي (يتم اختباره بشكل روتيني)، التلوين داخل الخلايا (قياس التدفق الخلوي) (يتم اختباره أثناء التطوير)
حجم العينة لكل اختبار: 5 ميكرولتر
RRID: AB_11154224
محلول التخزين: محلول مائي منظم يحتوي على BSA ومثبت البروتين و ≤0.09% أزيد الصوديوم.
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
التحضير والتخزين: يُحفظ غير مخفف في درجة حرارة 4 درجات مئوية، ويُحفظ بعيدًا عن الضوء لفترات طويلة. لا يُجمد. تم تنقية الجسم المضاد أحادي النسيلة من سائل مزرعة الأنسجة أو السائل الاستسقائي باستخدام كروماتوغرافيا التقارب. تم ربط الجسم المضاد بصبغة أليكسا فلور® 488 في ظل الظروف المثلى، وتمت إزالة صبغة أليكسا فلور® 488 غير المتفاعلة.
إجراءات الفحص الموصى بها: إجراءات الفحص الموصى بها للتصوير الحيوي: http://www.bdbiosciences.com/support/resources/protocols/ceritifed_reagents.jsp 1. ازرع حوالي 10000 خلية في وسط زراعة مناسب في صفيحة تصوير BD Falcon™ ذات 96 بئرًا (رقم المنتج 353219) واتركها طوال الليل. 2. أزل وسط الزراعة من الآبار وثبّت الخلايا بإضافة 100 ميكرولتر من الفورمالديهايد الطازج بتركيز 3.7% في محلول ملحي فوسفاتي أو محلول تثبيت BD Cytofix™ (رقم المنتج 554655) إلى كل بئر، ثم حضّنها لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة. 3. أزل المُثبِّت من الآبار، واجعل الخلايا نفاذة باستخدام الميثانول البارد أو Triton™ X-100. أضف 100 ميكرولتر من ميثانول 90% عند درجة حرارة -20 درجة مئوية أو محلول BD Phosflow™ Perm Buffer III (رقم المنتج 558050) عند درجة حرارة -20 درجة مئوية إلى كل بئر، ثم حضّن لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة. أو ب. أضف 100 ميكرولتر من محلول Triton™ X-100 بتركيز 0.1% (Sigma-Aldrich، رقم المنتج X-100) إلى كل بئر، ثم حضّن لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة. 4. أزل عامل النفاذية من الآبار، واغسلها مرتين باستخدام 100 ميكرولتر من محلول PBS بتركيز 1×. 5. أزل محلول PBS، ثم احجب الخلايا بإضافة 100 ميكرولتر من محلول الحجب، مثل محلول BD Pharmingen™ Stain Buffer (FBS) (رقم المنتج 554656) أو محلول FBS بتركيز 3% في محلول PBS بتركيز 1× إلى كل بئر، ثم حضّن لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. ٦. في هذه الأثناء، ضع ٥ ميكرولتر (حجم اختبار واحد) من الأجسام المضادة الفلورية المعتمدة للتصوير الحيوي في ٤٥ ميكرولتر من محلول التلوين؛ واحفظها بعيدًا عن الضوء. ٧. أزل محلول الحجب وأضف ٥٠ ميكرولتر من الجسم المضاد الفلوري المُحضر لكل بئر، ثم حضّنه لمدة ٦٠ دقيقة في درجة حرارة الغرفة، واحفظه بعيدًا عن الضوء. ٨. أزل الجسم المضاد الفلوري واغسل الآبار ثلاث مرات بـ ١٠٠ ميكرولتر من محلول الفوسفات الملحي (PBS) بتركيز ١×. ٩. أزل محلول الفوسفات الملحي (PBS) وقم بتلوين النوى بشكل معاكس بإضافة ١٠٠ ميكرولتر من محلول هوكست ٣٣٣٤٢ (رقم المنتج ٥٦١٩٠٨) بتركيز ٢ ميكروغرام/مل في محلول الفوسفات الملحي (PBS) بتركيز ١× إلى كل بئر قبل ١٥ دقيقة على الأقل من التصوير. ١٠. اعرض الخلايا وحللها باستخدام جهاز تصوير مناسب. الفلاتر الموصى بها لأجهزة BD Pathway™ هي: فلتر الإثارة، فلتر الانبعاث، فلتر ثنائي اللون BD Pathway™ 855 488/10 515 LP Fura/FITC، فلتر BD Pathway™ 435 482/35 536/40 FF506
ملاحظات المنتج: تم تخفيف هذا الكاشف مسبقًا للاستخدام بالحجم الموصى به لكل اختبار عند اتباع إجراء الفحص الموصى به. يتكون الاختبار عادةً من حوالي 10000 خلية مزروعة في بئر من صفيحة تصوير ذات 96 بئرًا. يجب استخدام عنصر تحكم متماثل النمط بنفس تركيز الجسم المضاد المطلوب. يتم جمع انبعاث فلوروكروم Alexa Fluor® 488 بنفس إعدادات الجهاز المستخدمة مع إيزوثيوسيانات الفلورسين (FITC). يرجى الرجوع إلى www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية. تُباع مقترنات الأجسام المضادة المصبوغة بصبغات Alexa Fluor® و Pacific Blue™ و Cascade Blue® في هذا المنتج بموجب ترخيص من شركة Molecular Probes, Inc. للاستخدام البحثي فقط، باستثناء استخدامها مع المصفوفات الدقيقة، أو ككواشف خاصة بالمادة المراد تحليلها. تخضع أصباغ Alexa Fluor® (باستثناء Alexa Fluor® 430)، وصبغة Pacific Blue™، وصبغة Cascade Blue® لبراءات اختراع قيد الانتظار وصادرة. تنبيه: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. لذا، يُرجى تخفيف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. Triton علامة تجارية لشركة Dow Chemical. Alexa Fluor® علامة تجارية مسجلة لشركة Molecular Probes, Inc.، يوجين، أوريغون. مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية، وتقع في الولايات المتحدة.