BD، 562544، BD Pharmingen™ PerCP-Cy™5.5 مضاد الفأر LAP البشري

الاسم البديل: الببتيد المرتبط بالكمون؛ TGFB1؛ TGFbeta؛ عامل النمو المحول بيتا
التفاعل: بشري (اختبار مراقبة الجودة)
النمط المصلي: IgG1، κ للفأر BALB/c
المستضد: TGF-β1 البشري
التطبيق: التلوين داخل الخلايا (قياس التدفق الخلوي) (يتم اختباره بشكل روتيني)، قياس التدفق الخلوي (يتم اختباره أثناء التطوير)
حجم العينة لكل اختبار: 5 ميكرولتر
RRID: AB_2737644
محلول التخزين: محلول مائي منظم يحتوي على BSA و ≤0.09% أزيد الصوديوم.
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
التحضير والتخزين: يُحفظ غير مخفف في درجة حرارة 4 درجات مئوية، ويُحفظ بعيدًا عن الضوء لفترات طويلة. لا يُجمد. تم تنقية الجسم المضاد أحادي النسيلة من سائل مزرعة الأنسجة أو السائل الاستسقائي باستخدام كروماتوغرافيا التقارب. تم ربط الجسم المضاد بـ PerCP-Cy5.5 في ظل الظروف المثلى، وتم التخلص من الجسم المضاد غير المرتبط وPerCP-Cy5.5 الحر. لا يُنصح بتخزين مُقترنات PerCP-Cy5.5 في مخفف غير مُحسَّن، فقد يؤدي ذلك إلى فقدان شدة الإشارة.
إجراءات الفحص الموصى بها: إجراءات الفحص الموصى بها، إجراءات التلوين المقترحة للأجسام المضادة PerCP-Cy™5.5 للفأر المضادة لبروتين LAP البشري: 1. جمع الخلايا الليمفاوية المحيطية أحادية النواة (PBMCs) بعد تحفيزها (لمدة 24 ساعة) باستخدام الأجسام المضادة النقية NA/LE للفأر المضادة لبروتين CD3 البشري (رقم المنتج 555329) والأجسام المضادة النقية NA/LE للفأر المضادة لبروتين CD28 البشري (رقم المنتج 555725) المرتبطة بالصفيحة. 2. غسل الخلايا مرتين بمحلول التلوين [مثل محلول التلوين BD Pharmingen™ (FBS)، رقم المنتج 554656]. 3. قم بتلوين 1 × 10^6 خلية باستخدام FITC Mouse Anti-Human CD4 (رقم المنتج 340133) مع أحد الأجسام المضادة التالية: PerCP-Cy™5.5 Mouse IgG1, κ Isotype Control (رقم المنتج 550795) أو PerCP-Cy™5.5 Mouse Anti-Human LAP (رقم المنتج 562544) لمدة 30 دقيقة على الجليد، مع حمايتها من الضوء. 4. اغسل الخلايا مرتين بمحلول التلوين. 5. قم بتلوين الخلايا للكشف عن FoxP3 داخل الخلايا باستخدام Alexa Fluor® 647 Mouse Anti-Human FoxP3؛ راجع بيانات المنتج الفنية (رقم المنتج 560889 أو 560045) للاطلاع على البروتوكول المفصل. باختصار، أ. أضف 2 مل من محلول FoxP3 A بتركيز 1× إلى راسب الخلايا. ب. قم بالطرد المركزي ثم حضّن في 0.5 مل من محلول C لمدة 30 دقيقة. ج. اغسل الخلايا مرتين بمحلول التلوين، ثم لونها باستخدام جسم مضاد فلوري مضاد لـ FoxP3 لمدة 30-45 دقيقة. د. اغسل الخلايا مرتين بمحلول التلوين، ثم حللها باستخدام قياس التدفق الخلوي.
ملاحظات المنتج: تم تخفيف هذا الكاشف مسبقًا للاستخدام بالحجم الموصى به لكل اختبار. نستخدم عادةً 1 × 10^6 خلية في عينة تجريبية بحجم 100 ميكرولتر (اختبار). مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية تقع في الولايات المتحدة. يجب استخدام عنصر تحكم متماثل النمط بنفس تركيز الجسم المضاد المطلوب. يرجى الرجوع إلى www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية. Cy هي علامة تجارية لشركة Amersham Biosciences Limited. يُباع هذا المنتج المقترن بموجب ترخيص لبراءات الاختراع التالية: براءات الاختراع الأمريكية أرقام 5,486,616؛ 5,569,587؛ 5,569,766؛ 5,627,027. يرجى مراعاة الاحتياطات التالية: يمكن أن يؤدي امتصاص الضوء المرئي إلى تغيير كبير في نقل الطاقة الذي يحدث في أي مُقترن فلوري مزدوج. لذا، نوصي باتخاذ احتياطات خاصة (مثل تغليف القوارير أو الأنابيب أو الحوامل بورق الألومنيوم) لمنع تعرض الكواشف المقترنة، بما في ذلك الخلايا المصبوغة بها، لضوء الغرفة. تنبيه: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. خفف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. يمكن استخدام الأجسام المضادة الموسومة بـ PerCP-Cy5.5 مع الكواشف الموسومة بـ FITC وR-PE في أجهزة قياس التدفق الخلوي أحادية الليزر دون تداخل طيفي كبير بين تألق PerCP-Cy5.5 وFITC وR-PE. تم تحسين PerCP-Cy5.5 للاستخدام مع ليزر أيون الأرجون أحادي ينبعث منه ضوء بطول موجي 488 نانومتر. نظراً لطيف الامتصاص الواسع للفلوركروم المزدوج، يجب توخي الحذر عند استخدام أجهزة قياس التدفق الخلوي ثنائية الليزر، حيث قد تُثير هذه الأجهزة كلاً من PerCP وCy5.5™ بشكل مباشر. نوصي باستخدام تعويض الحزمة المتقاطعة أثناء جمع البيانات أو التعويض البرمجي أثناء تحليلها. للاطلاع على أطياف الفلوركروم وإعدادات الجهاز المناسبة، يُرجى زيارة صفحة قياس التدفق الخلوي متعدد الألوان على موقعنا الإلكتروني www.bdbiosciences.com/colors. يخضع هذا المنتج لحقوق الملكية الفكرية لشركة Amersham Biosciences Corp. وجامعة كارنيجي ميلون، ويتم تصنيعه وبيعه بموجب ترخيص من شركة Amersham Biosciences Corp. هذا المنتج مُرخص للبيع لأغراض البحث العلمي فقط، ولا يُرخص لأي استخدام آخر. إذا كنتَ بحاجة إلى ترخيص تجاري لاستخدام هذا المنتج ولم يكن لديك ترخيص، يُرجى إعادة هذه المادة غير مفتوحة إلى BD Biosciences، 10975 Torreyana Rd، سان دييغو، كاليفورنيا 92121، وسيتم رد أي مبلغ مدفوع مقابلها.