BD، 562725، مجموعة مخازن عوامل النسخ BD Pharmingen™

التطبيق: التلوين داخل الخلايا (قياس التدفق الخلوي) (يتم اختباره بشكل روتيني)
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
الوصف: تم تحسين مجموعة محاليل BD Pharmingen™ Transcription Factor Buffer Set لتثبيت الخلايا ونفاذيتها قبل التلوين المناعي الفلوري وتحليل التدفق الخلوي للخلايا التي تُعبّر عن بروتينات محددة داخل السيتوبلازم والنواة. صُممت هذه المجموعة لتحسين سهولة الاستخدام وتقليل وقت المعالجة، والحد من التلوين غير النوعي، وزيادة دقة الخلايا المصبوغة إيجابياً، وتقليل فقدان الخلايا بشكل ملحوظ أثناء عمليات التثبيت والنفاذية والتلوين. يُحسّن استخدام مجموعة محاليل BD Pharmingen™ Transcription Factor Buffer Set من الكشف بالتدفق الخلوي عن العديد من البروتينات المعروفة بتعبيرها داخل مختلف الحجيرات الخلوية، وخاصة عوامل النسخ. وقد وُجد أن نظام المحاليل هذا مفيد لتثبيت أنواع مختلفة من الخلايا ونفاذيتها من أنسجة بشرية وفأرية متنوعة. يتميز هذا النظام بمرونته في دعم تحليلات العينات عالية الإنتاجية في لوحات متعددة الآبار، وتحليلات العينات بكميات كبيرة، والتطبيقات التي تتطلب تخزين العينات طوال الليل. يُحدث نظام المحلول المنظم تأثيرًا طفيفًا على خصائص تشتت الضوء والتألق الذاتي للخلايا المُعالجة، مما ينتج عنه خصائص مشابهة لتلك المُلاحظة في الخلايا الأولية الطازجة عالية الحيوية. في كثير من الحالات، وُجد أن نظام المحلول المنظم متوافق مع التلوين المناعي الفلوري لمستضدات سطح الخلية قبل وبعد تثبيت الخلايا ونفاذيتها. كما يتوافق نظام المحلول المنظم مع العديد من الفلوركرومات المزدوجة.
التحضير والتخزين: يُحفظ غير مخفف في درجة حرارة 4 درجات مئوية. تُحفظ محاليل التخزين المركزة ومحاليل العمل بتركيز 1x في درجة حرارة تتراوح بين 2 و8 درجات مئوية. بعد فتح مجموعة محاليل عامل النسخ BD Pharmingen™، يجب استخدامها في غضون ستة أشهر. في حال تخزينها دون فتحها، يجب استخدامها قبل تاريخ انتهاء الصلاحية المذكور على ملصقات الزجاجات. تجنب التلوث الميكروبي للكواشف لتجنب الحصول على نتائج غير صحيحة. تعامل مع محلول تخفيف عامل النسخ (المكون 51-9008315) في خزانة معقمة أو اتبع ممارسات التعقيم للحفاظ على سلامة المحلول.
إجراءات الفحص الموصى بها: قبل التلوين داخل الخلايا • حضّر معلقات خلايا مفردة من الأنسجة اللمفاوية المستهدفة (مثل الدم المحيطي البشري، أو غدة التيموس، أو العقدة اللمفاوية للفأر). ضع علامة على أنابيب البوليسترين ذات القاع المستدير سعة 5 مل (12 × 75 مم) وحدد الأجسام المضادة المناسبة لتجربتك. • اقلب ببطء خمس مرات زجاجات محلول التثبيت/النفاذية BD Pharmingen™ TF (4X)، ومحلول التخفيف TF، ومحلول الغسل/النفاذية TF (5X) قبل تحضير محاليل العمل. • خفف محلول التثبيت/النفاذية 4x باستخدام محلول التخفيف TF للوصول إلى الحجم المطلوب من محلول العمل 1x (التخفيف النموذجي لـ 20 اختبارًا هو 5 مل من محلول التثبيت/النفاذية 4x و15 مل من محلول التخفيف TF). استخدم محلول العمل 1x من محلول التثبيت/النفاذية لبروتوكول التلوين داخل الخلايا المذكور أدناه في غضون ساعة من التحضير. • خفف محلول النفاذية/الغسل المركز 5x إلى محلول عمل مركز 1x. (التخفيف النموذجي لـ 20 اختبارًا هو إضافة 30 مل من محلول النفاذية/الغسل المركز 5x إلى 120 مل من الماء منزوع الأيونات للحصول على 150 مل من محلول النفاذية/الغسل المركز 1x). استخدم محلول العمل المركز 1x لبروتوكول التلوين داخل الخلايا المذكور أدناه. خزّن محلول النفاذية/الغسل المركز 1x في درجة حرارة تتراوح بين 2 و8 درجات مئوية لمدة تصل إلى أسبوع. • يجب حفظ محاليل التلوين داخل الخلايا على الثلج أو في درجة حرارة تتراوح بين 2 و8 درجات مئوية طوال فترة تطبيق بروتوكول التلوين داخل الخلايا. • تلوين السطح: حضّر معلقًا خلويًا يحتوي على 10 ملايين خلية لكل مل في محلول تلوين قياس التدفق الخلوي، مثل محلول التلوين BD Pharmingen™ (FBS) (رقم المنتج 554656) أو محلول التلوين (BSA) (رقم المنتج 554657). حضّن 100 ميكرولتر من الخلايا لكل أنبوب مع الأجسام المضادة الفلورية (مثل الأجسام المضادة الخاصة بـ CD4، CD8، CD25، CD19) لمدة 30 دقيقة عند درجة حرارة 2-8 درجة مئوية. اغسل الخلايا مرة واحدة باستخدام 2 مل من محلول التلوين، ثم تابع بروتوكول التلوين داخل الخلايا المذكور أدناه. بروتوكول التلوين داخل الخلايا 1. التثبيت/النفاذية: بعد الانتهاء من عملية تلوين سطح الخلية، تخلص من محلول التلوين المتبقي. أعد تعليق الخلايا بالتقليب السريع، وأضف 1 مل من محلول التثبيت/النفاذية المحضر حديثًا بتركيز 1x إلى كل أنبوب. قم برجّ العينات لمدة ثلاث ثوانٍ تقريبًا بعد إضافة محلول التثبيت/النفاذية. حضّن العينات عند درجة حرارة 2-8 درجة مئوية لمدة 40-50 دقيقة مع حمايتها من الضوء. 2. النفاذية/الغسل: أضف 1 مل من محلول النفاذية/الغسل بتركيز 1x مباشرةً إلى الخلايا المثبتة والمنفذة المعلقة في محلول التثبيت/النفاذية بتركيز 1x. افصل الخلايا بالطرد المركزي. (ملاحظة: جميع خطوات الطرد المركزي بعد التثبيت/النفاذية تتم عند قوة 350 غرام ودرجة حرارة 2-8 درجة مئوية لمدة 6 دقائق). تخلص من السائل الطافي. 3. النفاذية/الغسل: أضف 2 مل من محلول النفاذية/الغسل بتركيز 1x إلى الخلايا المترسبة، ثم قم بالطرد المركزي. تخلص من محلول الغسل. ٤. التلوين داخل الخلايا: أضف ٨٠-١٠٠ ميكرولتر من محلول النفاذية/الغسل بتركيز ١x إلى عينات الخلايا، وأضف الأجسام المضادة الفلورية النوعية للبروتينات داخل الخلايا (مثل FoxP3 وT-bet و/أو IL-17A) وللتلوين غير النوعي كعنصر تحكم (مثل عناصر التحكم الفلورية من نوع Ig المتطابقة) إلى كل أنبوب. رجّ الأنبوب أو الحامل لمدة ١٠ ثوانٍ، ثم حضّنه عند درجة حرارة ٢-٨ درجة مئوية لمدة ٤٠-٥٠ دقيقة في مكان مظلم. ٥. النفاذية/الغسل: رجّ العينات لفترة وجيزة قبل الغسل. اغسل الخلايا بـ ٢ مل من محلول النفاذية/الغسل بتركيز ١x. افصل الخلايا بالطرد المركزي. تخلص من محلول الغسل. ٦. النفاذية/الغسل: اغسل الخلايا بـ ٢ مل من محلول النفاذية/الغسل بتركيز ١x. افصل الخلايا بالطرد المركزي. تخلص من محلول الغسل. ٧. تحضير العينة لقياس التدفق الخلوي: أعد تعليق الخلايا المترسبة في ٣٥٠ ميكرولتر من محلول التلوين الخاص بقياس التدفق الخلوي. حلل الخلايا واجمع البيانات باستخدام جهاز قياس التدفق الخلوي. ملاحظات: • نظرًا لإجراءات التثبيت والنفاذية، ستختلف إشارات تشتت الضوء الأمامي والجانبي اختلافًا طفيفًا عن تلك الخاصة بالخلايا الحية. • تم تحسين نظام المحلول للاستخدام مع إعدادات التألق المحددة باستخدام مجموعة BD™ Cytometer Setup & Tracking Beads Kit (رقم المنتج ٦٤٢٤١٢). مع ذلك، قد يتطلب تطبيقك إجراء تعديلات طفيفة على جهد البوابة و/أو الكاشف قبل التعويض والتسجيل. • استهدف التسجيل للحصول على عدد ذي دلالة إحصائية من الأحداث. • قد يتطلب تطبيقك معايرة كمية التلوين المثلى للأجسام المضادة الفلورية وتحسين وقت التلوين. خطر: يحتوي مُثبِّت/مُخفِّف نفاذية TF (4X) (المُكوِّن 51-9008314) على 5.0% فورمالديهايد (وزن/وزن) و1.76% ميثانول (وزن/وزن). بيانات المخاطر: ضار عند البلع أو ملامسة الجلد. سام عند الاستنشاق. يُسبِّب تهيج الجلد. يُسبِّب تلفًا خطيرًا للعين. قد يُسبِّب رد فعل تحسسي للجلد. يُشتبه في تسببه في عيوب وراثية. قد يُسبِّب السرطان. طريقة التعرّض: الاستنشاق. قد يُسبِّب تهيجًا في الجهاز التنفسي. بيانات الاحتياطات: ارتدِ ملابس واقية/واقي للعينين. ارتدِ قفازات واقية. تجنَّب استنشاق الرذاذ/الأبخرة/البخاخ. في حالة ملامسة العينين: اشطفهما بحذر بالماء لعدة دقائق. أزل العدسات اللاصقة، إن وُجدت وكان من السهل إزالتها. استمر في الشطف. في حالة الاستنشاق: انقل المصاب إلى الهواء الطلق وأبقِه في وضع مريح للتنفس. في حالة ملامسة الجلد: اغسل بكمية كبيرة من الماء. تحذير: يحتوي محلول TF Perm/Wash Buffer (5X) (المكون 51-9008316) على ≤ 0.09% من أزيد الصوديوم. ينتج عن أزيد الصوديوم هيدرازويك أزيد شديد السمية في الظروف الحمضية. لذا، يُنصح بتخفيف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي.
إشعارات المنتج: Cy هي علامة تجارية لشركة Amersham Biosciences Limited. Alexa Fluor® هي علامة تجارية مسجلة لشركة Molecular Probes, Inc.، يوجين، أوريغون. تحذير: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. خفف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية تقع في الولايات المتحدة. يرجى مراجعة www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية.
الوصف: الكمية/الحجم: رقم القطعة: معرف EntrezGene
غير متوفر : 40.0 : غير متوفر : غير متوفر