BD، 563755، BD Horizon™ BV711 مضاد Ki-67 للفأر

الاسم البديل: MKI67؛ تم تحديد المستضد بواسطة الجسم المضاد أحادي النسيلة Ki-67؛ KIA
التفاعل: الإنسان (اختبار مراقبة الجودة)، الفأر (تم اختباره أثناء التطوير)، الجرذ، قرد الريسوس (تم الإبلاغ عنه)
النمط المصلي: IgG1 الفأري، κ
المستضد: كي-67 البشري
التطبيق: التلوين داخل الخلايا (قياس التدفق الخلوي) (يتم اختباره بشكل روتيني)
حجم العينة لكل اختبار: 5 ميكرولتر
RRID: AB_2738406
محلول التخزين: محلول مائي منظم يحتوي على BSA و ≤0.09% أزيد الصوديوم.
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
التحضير والتخزين: يُحفظ غير مخفف في درجة حرارة 4 درجات مئوية، ويُحفظ بعيدًا عن الضوء لفترات طويلة. لا يُجمد. تم تنقية الجسم المضاد أحادي النسيلة من سائل مزرعة الأنسجة أو السائل الاستسقائي باستخدام كروماتوغرافيا التقارب. تم ربط الجسم المضاد بـ BD Horizon™ BV711 في ظل الظروف المثلى، وتمت إزالة الجسم المضاد غير المرتبط وBD Horizon™ BV711 الحر.
إجراءات التحليل الموصى بها: يُنصح الباحثون باتباع البروتوكول التالي عند استخدام صبغة DAPI. قد يُلاحظ ارتفاع في مستوى الإشارة الخلفية أو تداخل الإشارات عند استخدام صبغة 7-AAD أو بروبيديوم يوديد (PI). 1. تُجمع الخلايا وتُعدّ وتُرسّب وفقًا للإجراءات القياسية. ملاحظة: يُعبّر عن Ki-67 بواسطة الخلايا المتكاثرة. قد يؤدي استخدام الخلايا غير المحفزة (مثل الخلايا الليمفاوية المحيطية أحادية النواة غير المحفزة) إلى نتائج سلبية. 2. أثناء الخلط، يُضاف 5 مل من الإيثانول البارد بتركيز 70% قطرةً قطرةً إلى راسب الخلايا (1-5 × 10^7 خلية). 3. تُغسل مرتين بمحلول التلوين (محلول ملحي فوسفاتي مع 1% مصل بقري جنيني، 0.09% أزيد الصوديوم)، ثم تُطرد مركزيًا لمدة 10 دقائق عند 200 × g. 4. تُعلق الخلايا مرة أخرى بتركيز 1 × 10^7 خلية/مل. ٥. انقل ١٠٠ ميكرولتر (١ × ١٠^٦ خلية) من معلق الخلايا إلى كل أنبوب عينة. ٦. أضف ٥ ميكرولتر من الجسم المضاد BV711 Mouse Anti-Ki-67 إلى الأنابيب المناسبة. اخلط برفق. ٧. حضّن الأنابيب عند درجة حرارة ٤ مئوية لمدة ٦٠ دقيقة في الظلام. ٨. اغسل بـ ٢ مل من محلول التلوين عند ٢٠٠ × جم لمدة ٥ دقائق. ٩. تخلص من السائل الطافي. ١٠. كرر الغسل بـ ٢ مل من محلول التلوين عند ٢٠٠ × جم لمدة ٥ دقائق. ١١. تخلص من السائل الطافي. ١٢. أعد تعليق الخلايا في ٣٥٠-٥٠٠ ميكرولتر من DAPI (رقم المنتج ٥٦٤٩٠٧) المخفف إلى ١ ميكروغرام/مل. ١٣. تابع تحليل التدفق الخلوي. للحصول على نتائج مثالية وقابلة للتكرار، يُنصح باستخدام محلول التلوين BD Horizon Brilliant Stain Buffer عند استخدام صبغتين أو أكثر من صبغات BD Horizon Brilliant في التجربة نفسها. قد تتسبب تفاعلات الصبغات الفلورية في ظهور شوائب في التلوين، مما قد يؤثر على تفسير البيانات. صُمم محلول التلوين BD Horizon Brilliant Stain Buffer خصيصًا لتقليل هذه التفاعلات. لمزيد من المعلومات، يُرجى مراجعة ورقة البيانات الفنية الخاصة بمحلول التلوين BD Horizon Brilliant Stain Buffer (رقم المنتج: 563794).
ملاحظات المنتج: تم تخفيف هذا الكاشف مسبقًا للاستخدام بالحجم الموصى به لكل اختبار. نستخدم عادةً 1 × 10^6 خلية في عينة تجريبية بحجم 100 ميكرولتر (اختبار). يجب استخدام عنصر تحكم متماثل النمط بنفس تركيز الجسم المضاد المطلوب. قد لا يكون التفاعل المتبادل بين الأنواع الذي تم اكتشافه أثناء تطوير المنتج قد تم تأكيده في جميع الأشكال و/أو التطبيقات. Cy هي علامة تجارية لشركة GE Healthcare. Alexa Fluor® هي علامة تجارية مسجلة لشركة Molecular Probes, Inc.، يوجين، أوريغون. BD Horizon Brilliant Violet 711 مشمول بواحدة أو أكثر من براءات الاختراع الأمريكية التالية: 8,110,673؛ 8,158,444؛ 8,227,187؛ 8,455,613؛ 8,575,303؛ 8,354,239. مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية، تقع في الولايات المتحدة. تنبيه: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. لذا، يُرجى تخفيف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. للاطلاع على أطياف الفلوركروم وإعدادات الجهاز المناسبة، يُرجى زيارة صفحة قياس التدفق الخلوي متعدد الألوان على موقعنا الإلكتروني www.bdbiosciences.com/colors. للاطلاع على البروتوكولات الفنية، يُرجى زيارة www.bdbiosciences.com/us/s/resources.