BD، 563794، BD Horizon™ Brilliant Stain Buffer

التحضير والتخزين: يُحفظ غير مخفف في درجة حرارة 4 درجات مئوية، ويُحفظ بعيداً عن الضوء لفترات طويلة. لا يُجمد.
إجراءات الفحص الموصى بها: بروتوكولات إجراءات الفحص الموصى بها للتلوين المناعي الفلوري متعدد الألوان للخلايا باستخدام محلول التلوين BD Horizon Brilliant Stain Buffer. تلوين متعدد الألوان لعينات الخلايا البشرية في أنابيب أو صفائح 96 بئرًا باستخدام كواشف تلوين فردية. 1. أضف 50 ميكرولتر من محلول التلوين BD Horizon Brilliant Stain Buffer إلى جميع الأنابيب أو الآبار المطلوبة للتجربة. ملاحظة: لا تعتمد كمية 50 ميكرولتر من محلول التلوين Brilliant Stain Buffer لكل أنبوب أو بئر على حجم التلوين النهائي أو كمية الخلايا المستخدمة لكل أنبوب أو عدد الأجسام المضادة الفلورية من BD المستخدمة في التلوين. على الرغم من أن هذه البروتوكولات مصممة للاستخدام مع الخلايا البشرية، إلا أنه يمكن تكييفها بسهولة لتحليل خلايا الفئران أو خلايا من أنواع أخرى، على سبيل المثال، عن طريق تلوين خلايا الفئران عند 4 درجات مئوية بدلاً من درجة حرارة الغرفة. ٢. أضف كل كاشف فلوري بالحجم الموصى به لكل اختبار (مثل ٥ ميكرولتر أو ٢٠ ميكرولتر)، ثم انتقل إلى البروتوكول ١ أو ٢ أو ٣. البروتوكول ١ لتلوين عينات الدم الكامل في الأنابيب: أ. أضف ١٠٠ ميكرولتر من الدم البشري الكامل إلى كل أنبوب. ب. رج محتويات الأنبوب جيدًا. ج. حضّن الخلايا المعلقة (٣٠ دقيقة) في درجة حرارة الغرفة بعيدًا عن الضوء. د. أضف ٢ مل من محلول BD FACS™ Lysing (رقم المنتج ٣٤٩٢٠٢؛ ١٠ دقائق) أو محلول BD Pharm Lyse™ Lysing Buffer (رقم المنتج ٥٥٥٨٩٩؛ ١٥ دقيقة) لكل أنبوب، وحضّنه في درجة حرارة الغرفة بعيدًا عن الضوء. هـ. افصل الخلايا بالطرد المركزي (٥ دقائق) بسرعة ١٤٠٠-١٥٠٠ دورة في الدقيقة. و. اسحب السائل الطافي. أضف 2-3 مل من محلول التلوين/الغسل، على سبيل المثال، محلول التلوين BD Pharmingen™ (FBS) (رقم المنتج 554656) أو محلول التلوين BD Pharmingen™ (BSA) (رقم المنتج 554657). افصل الخلايا بالطرد المركزي (5 دقائق) بسرعة 1400-1500 دورة في الدقيقة. اسحب السائل الطافي وأعد تعليق الخلايا في 500 ميكرولتر من محلول التلوين/الغسل لتحليل التدفق الخلوي. البروتوكول 2 لتلوين خلايا الدم أحادية النواة الطرفية أو عينات الدم الكامل المحللة من كريات الدم الحمراء في الأنابيب: أ. أضف 100 ميكرولتر من الخلايا البشرية إلى كل أنبوب. ب. رج محتويات الأنبوب جيدًا. ج. حضّن الخلايا المعلقة (30 دقيقة) في درجة حرارة الغرفة بعيدًا عن الضوء. د. أضف 2 مل من محلول التلوين/الغسل لكل أنبوب. افصل الخلايا بالطرد المركزي (5 دقائق) عند 1400-1500 دورة في الدقيقة. تخلص من السائل الطافي؛ أضف 2-3 مل من محلول التلوين/الغسل. افصل الخلايا بالطرد المركزي (5 دقائق) عند 1400-1500 دورة في الدقيقة. تخلص من السائل الطافي وأعد تعليق الخلايا في 500 ميكرولتر من محلول التلوين/الغسل لتحليل التدفق الخلوي. البروتوكول 3 لتلوين خلايا الدم أحادية النواة الطرفية أو عينات الدم الكامل المحللة من كريات الدم الحمراء في صفائح 96 بئراً. ملاحظة: عند التخطيط للتلوين في الصفائح، يجب على المستخدم مراعاة حجم محلول التلوين BD Horizon Brilliant المستخدم. على الرغم من أن هذا البروتوكول مصمم للاستخدام مع الخلايا البشرية، إلا أنه يمكن تكييفه بسهولة لتحليل خلايا الفئران أو خلايا من أنواع أخرى. أ. أضف 50 ميكرولتر من الخلايا البشرية إلى كل بئر. ب. حضّن لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة بعيدًا عن الضوء. اغسل بإضافة 100 ميكرولتر من محلول الصبغ/الغسل. افصل الخلايا بالطرد المركزي (5 دقائق) بسرعة 1400-1500 دورة في الدقيقة. تخلص من السائل الطافي. أعد تعليق الخلايا المترسبة بإضافة 250 ميكرولتر من محلول الصبغ/الغسل. افصل الخلايا بالطرد المركزي (5 دقائق) بسرعة 1400-1500 دورة في الدقيقة. تخلص من السائل الطافي. أعد تعليق الخلايا المترسبة جيدًا باستخدام 150 ميكرولتر من محلول الصبغ/الغسل عن طريق سحب الخلايا المعلقة عدة مرات باستخدام الماصة. انقل محتويات الآبار إلى الأنابيب، وأضف محلول التلوين/الغسل الإضافي إلى الأنابيب حسب الحاجة لتحليل التدفق الخلوي. ملاحظة: بدلاً من ذلك، يمكنك الحصول على عينات لتحليل التدفق الخلوي مباشرةً من الصفيحة. تلوين متعدد الألوان لعينات الخلايا البشرية في الأنابيب أو صفائح 96 بئرًا باستخدام مزيج من كواشف التلوين: بدلاً من إضافة كواشف التلوين بشكل فردي إلى كل أنبوب أو بئر في صفيحة 96 بئرًا، قد يكون من الأفضل إضافة مزيج من كواشف التلوين، أي مزيج من اثنين أو أكثر من كواشف التلوين الفلورية. يوفر البروتوكول التالي مثالاً على كيفية تحضير مزيج من الأجسام المضادة الفلورية خماسية الألوان "لكل اختبار" يحتوي بالفعل على محلول التلوين BD Horizon Brilliant Stain Buffer. العينات البشرية: مزيج الكواشف الفلورية المُحضّرة مسبقًا. لكل اختبار متعدد الألوان باستخدام مزيج الكواشف الفلورية: 1) أضف 50 ميكرولتر من محلول BD Horizon Brilliant Stain Buffer لكل اختبار. 2) أضف كل كاشف فلوري بالحجم الموصى به لكل اختبار (5 ميكرولتر أو 20 ميكرولتر). 3) امزج الكواشف جيدًا (خاصةً بعد إضافة كواشف BD Horizon Brilliant). 4) خزّن المزيج في درجة حرارة 4 درجات مئوية بعيدًا عن الضوء إذا كنت ستستخدمه لاحقًا. ملاحظة: يُفضّل استخدام مزيج الكواشف الفلورية الذي يحتوي على أكثر من كاشف واحد من كواشف Brilliant Violet و/أو Brilliant Blue خلال 24 ساعة من تحضيره عند تخزينه في درجة حرارة 4 درجات مئوية، أو خلال 4 ساعات عند تخزينه في درجة حرارة الغرفة، وذلك عند تخزينه بعيدًا عن الضوء. أما إذا كان المزيج يحتوي على أكثر من كاشف واحد من كواشف Brilliant Ultraviolet (BUV)، فيُفضّل استخدامه خلال ساعتين من تحضيره بغض النظر عن درجة حرارة التخزين. مثال على تحضير مزيج أجسام مضادة فلورية بخمسة ألوان يحتوي على نوعين مختلفين من مُقترنات Brilliant Violet™، الحجم النهائي لكل اختبار = 90 ميكرولتر. _____________________________________________________________________________________ إجمالي عدد الاختبارات، الحجم/الاختبار (ميكرولتر): 1، 3، 5، 10، محلول Brilliant Stain، 50، 50، 150، 250، 500، الكاشف 1 (BV)، 5، 5، 15، 25، 50، الكاشف 2 (BV)، 5، 5، 15، 25، 50، الكاشف 3، 5، 5، 15، 25، 50، الكاشف 4، 5، 5، 15، 25، 50، الكاشف 5، 20، 20، 60، 100، 200، الحجم الإجمالي: 90، 90، 270، 450، 900. _____________________________________________________________________________________ أضف الحجم المطلوب من مزيج الكواشف (90 أضف (ميكرولتر في هذا المثال ذي الألوان الخمسة) إلى جميع الأنابيب أو الآبار باستخدام بروتوكولات تلوين الخلايا البشرية الموضحة أعلاه. يمكن استخدام محلول BD Horizon Brilliant Stain Buffer في ضوابط تعويض اللون الواحد باستخدام الخلايا. يتوافق هذا المحلول مع خرزات BD™ Compbeads، ولكنه لم يُختبر مع خرزات تعويض من موردين آخرين. للحصول على أدق تعويض، يجب تعريض ضوابط التعويض المُنشأة باستخدام الخلايا أو الخرزات لمحلول BD Horizon Brilliant Stain Buffer لنفس مدة تعريض لوحة الألوان المتعددة المقابلة. بالإضافة إلى ذلك، سيتم الحصول على أدق تعويض عند استخدام محلول BD Horizon Brilliant Stain Buffer في جميع ضوابط التعويض، بما في ذلك أصباغ البوليمر اللامعة وغير البوليمرية.
إشعارات المنتج: Alexa Fluor® علامة تجارية مسجلة لشركة Life Technologies Corporation. يخضع مُنظف BD Horizon Brilliant Stain Buffer لواحدة أو أكثر من براءات الاختراع الأمريكية التالية: 8,110,673؛ 8,158,444؛ 8,575,303؛ 8,354,239. مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية (USDA) تقع في الولايات المتحدة. تحذير: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. خفف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. يرجى زيارة الموقع الإلكتروني http://regdocs.bd.com للاطلاع على صحائف بيانات السلامة (SDS).