BD، 564406، صبغة بي دي هورايزون™ القابلة للتثبيت 510

التفاعل: الإنسان، الفأر (تم اختباره أثناء التطوير)
التطبيق: قياس التدفق الخلوي، التلوين داخل الخلايا (قياس التدفق الخلوي) (تم اختباره أثناء التطوير)
RRID: AB_2869572
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
إجراءات التحليل الموصى بها: التحضير: ضع مسحوق صبغة FVS510 و260 ميكرولتر من ثنائي ميثيل سلفوكسيد (DMSO؛ مثل Sigma D2650) النقي المستخدم في زراعة الخلايا في درجة حرارة الغرفة. أضف 260 ميكرولتر من DMSO ورج المحلول جيدًا. افحص المحلول وكرر الرج حتى تذوب الصبغة تمامًا. هذا هو المحلول الأصلي. التخزين: عند الاستلام، خزّن الصبغة الجافة في مكان جاف بعيدًا عن الضوء عند درجة حرارة -80 درجة مئوية حتى الاستخدام. بعد إذابتها في DMSO، خزّن المحلول الأصلي في درجة حرارة -20 درجة مئوية في أجزاء صغيرة. لا تستخدم الصبغة المُذابة بعد 90 يومًا من التخزين. يُرجى التخلص من محلول الصبغة بعد 90 يومًا من إذابتها في DMSO. متطلبات قياس التدفق الخلوي: يمكن استخدام أجهزة قياس التدفق الخلوي المزودة بليزر بنفسجي (مثل BD FACSCanto™ II أو BD LSRFortessa™ أو BD™ LSR II). يمكن قراءة هذا الصبغ من المرشحات الشائعة الاستخدام مع BD Horizon™ Brilliant Violet 510 أو BD Horizon™ V500 أو AmCyan (مثل 525/50). يُفضل استخدام عينة من الخلايا المراد فحصها لتحقيق أفضل تعويض للفلورة. إجراء وسم الخلايا بصبغة Fixable Viability Stain 510: 1. تحضير الخلايا لتلوينها بتقنية قياس التدفق الخلوي باستخدام محاليل خالية من أزيد الصوديوم. 2. غسل الخلايا مرة واحدة في محلول Dulbecco's Phosphate Buffered Saline (DPBS) الخالي من أزيد الصوديوم والبروتين (1X). 3. إعادة تعليق الخلايا بتركيز 1 × 10^6 خلية/مل في محلول DPBS (1X) الخالي من أزيد الصوديوم والبروتين. 4. إضافة 1 ميكرولتر من محلول BD Horizon™ Fixable Viability Stain 510 المركز لكل 1 مل من معلق الخلايا (1:1000) مع الخلط الفوري. ملاحظة: نوصي بمعايرة الصبغة للحصول على أفضل النتائج، حيث أن اختلاف أنواع الخلايا والتطبيقات قد يؤدي إلى تباين كبير في التلوين. 5. حضّن المزيج لمدة 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة بعيدًا عن الضوء. أ. اختياري: حضّن الخلايا ومخاليط الصبغة عند درجة حرارة 2-8 درجة مئوية لمدة 30-60 دقيقة. أو حضّن المخاليط عند درجة حرارة 37 درجة مئوية لمدة 5-7 دقائق. 6. اغسل الخلايا مرتين باستخدام 2 مل من محلول التلوين BD Pharmingen™ (FBS) (رقم المنتج 554656) أو ما يعادله. 7. تخلص من السائل الطافي واخلط برفق لتفكيك الخلايا المترسبة. 8. أعد تعليق الخلايا في محلول التلوين (FBS) أو ما يعادله. 9. لوّن الخلايا وثبّتها واجعلها نفاذة حسب الرغبة للتطبيقات اللاحقة. ملاحظات: 1. يجب على كل مستخدم تحديد التركيزات المثلى للكواشف والخلايا والظروف المناسبة للاختبار المطلوب. نوصي بمعايرة الكاشف في التجارب الأولية للحصول على أفضل النتائج. ٢. يتم تثبيط تفاعل الصبغة الحرة بالغسل بمحلول منظم يحتوي على بروتين (مثل مصل بقري جنيني أو ألبومين مصل البقر). ٣. يمكن تلوين الخلايا بكميات كبيرة قبل التجميد أو التلوين بالأجسام المضادة الفلورية. ٤. يمكن استخدام صبغة BD Horizon™ Fixable Viability Stain 510 في فحوص التلوين داخل الخلايا التي تتطلب التثبيت بالفورمالديهايد والنفاذية بالميثانول والمنظفات، مثل تلك المستخدمة في تلوين BD Phosflow™ (مثل رقم المنتج ٥٥٨٠٥٠، محلول BD Phosflow™ Perm Buffer III)، أو تلوين السيتوكينات داخل الخلايا (مثل رقم المنتج ٥٥٤٧١٤، مجموعة BD Cytofix/Cytoperm™ للتثبيت/النفاذية)، أو تلوين عوامل النسخ (مثل رقم المنتج ٥٦٢٥٧٤، مجموعة BD Pharmingen™ Transcription Factor Buffer Set). 5. قد تُظهر الخلايا الميتة تباينًا في التلوين. نوصي بالتلوين المشترك، على سبيل المثال، باستخدام Annexin V APC (رقم المنتج 550475) إذا رغبنا في إجراء المزيد من التحليلات على الخلايا الميتة.
ملاحظات المنتج: نظرًا لاختلاف التطبيقات، ينبغي على كل باحث معايرة الكاشف للحصول على أفضل النتائج. يُرجى مراجعة www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية. للاطلاع على أطياف الفلوركروم وإعدادات الجهاز المناسبة، يُرجى مراجعة صفحة قياس التدفق الخلوي متعدد الألوان على موقعنا الإلكتروني www.bdbiosciences.com/colors.