دينار بحريني، 564696، دينار بحريني Pharmingen™ MitoStatus TMRE

التطبيقات: التصوير الحيوي، قياس التدفق الخلوي، التألق المناعي (تم اختباره أثناء التطوير)
RRID: AB_2869606
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
إجراءات التحليل الموصى بها: تحضير الصبغة: اترك مسحوق صبغة BD Pharmingen™ MitoStatus TMRE وثنائي ميثيل سلفوكسيد (DMSO) طازج من الدرجة المستخدمة في زراعة الخلايا (مثل Sigma D2650) حتى يصل إلى درجة حرارة الغرفة. أعد تكوين مسحوق صبغة TMRE في DMSO للحصول على تركيز أساسي يتراوح بين 0.2 و1 ملي مولار. على سبيل المثال، يمكن إذابة 1 ملغ من BD Pharmingen™ MitoStatus TMRE في 1.94 مل من DMSO للحصول على محلول أساسي بتركيز 1 ملي مولار (الوزن الجزيئي = 514.96 غ/مول). تخزين الصبغة: عند الاستلام، خزّن مسحوق الصبغة في مكان جاف بعيدًا عن الضوء عند درجة حرارة ≤ -20 درجة مئوية حتى الاستخدام. يبقى مسحوق الصبغة مستقرًا لمدة 12 شهرًا على الأقل عند تخزينه وفقًا للإرشادات. بعد إعادة تكوينه في DMSO، خزّن المحلول الأساسي في درجة حرارة ≤ -20 درجة مئوية في أجزاء صغيرة. يبقى المحلول الأساسي مستقرًا لمدة 6 أشهر على الأقل عند تخزينه وفقًا للإرشادات. متطلبات قياس التدفق الخلوي: قبل التلوين بهذا الكاشف، يُرجى التأكد من قدرة جهاز قياس التدفق الخلوي على إثارة الفلوركروم وتمييز الفلورة الناتجة. يمكن استخدام أجهزة قياس التدفق الخلوي (مثل BD FACSCanto™ II، وBD LSRFortessa™، وBD™ LSR II، أو BD Accuri™ C6) المزودة بليزر أزرق (مثل 488 نانومتر) أو أصفر مخضر (مثل 561 نانومتر). يمكن الكشف عن فلورة صبغة TMRE باستخدام المرشحات الشائعة الاستخدام مع الفيكوإريثرين (PE) (مثل 575/26 أو 582/15 نانومتر). يُفضل استخدام عينات الخلايا المراد فحصها لتعويض الفلورة. عند تصميم لوحات التلوين الفلوري متعددة الألوان، يُرجى الانتباه إلى احتمالية تداخل الفلورة العالية مع كواشف الفلوركرومات التالية: BD Horizon™ PE-CF594، BV605، BV650، أو PerCP-Cy™5.5. نوصي بمعايرة الصبغة واستخدام أقل تركيز يوفر دقة كافية لفصل مجموعات الخلايا المستقطبة وغير المستقطبة لتقليل تداخل الفلورة. إجراء وسم الخلايا المعلقة باستخدام BD Pharmingen™ MitoStatus™RE لتحليل التدفق الخلوي: 1. عدّ الخلايا لتحديد كثافتها. اضبط كثافة الخلايا إلى 1 × 10^6 خلية/مل أو أقل في وسط زراعة خلايا طازج مُدفأ مسبقًا. 2. لوّن الخلايا في وسط زراعة خلايا طازج مُدفأ مسبقًا أو محلول التلوين المطلوب باستخدام 20-200 نانومتر من BD Pharmingen™ MitoStatus™RE في وعاء من البولي بروبيلين، وذلك بإضافة المحلول المركز مباشرةً إلى الخلايا بالتركيز المطلوب. ملاحظة: يمكن إضافة صبغة BD Pharmingen™ MitoStatus TMRE مباشرةً إلى المزرعة بدلاً من التلوين في وسط جديد. كما يمكن إجراء التلوين في محلول التلوين BD Pharmingen™ Stain Buffer (FBS) المُسخّن مسبقًا (رقم المنتج 554656) أو محلول الفوسفات الملحي (PBS) المُسخّن مسبقًا. قد يُحسّن محلول الفوسفات الملحي (PBS) دقة بعض أنواع الخلايا، ولكنه قد يؤدي أيضًا إلى زيادة التلوين الخلفي. ب. ملاحظة: من المعروف أن صبغة TMRE تلتصق بالبوليسترين. لذا، يجب تلوين العينات في عبوات من البولي بروبيلين. ج. ملاحظة: للمساعدة في تحديد البوابات في قياس التدفق الخلوي، نوصي باستخدام خلايا تحكم مُعالجة بالمذيب فقط و/أو خلايا مُعالجة بمُفكك اقتران الميتوكوندريا، مثل FCCP [كربونيل سيانيد 4-(تريفلوروميثوكسي) فينيل هيدرازون، على سبيل المثال، سيجما، رقم المنتج C2920]. 3. حضّن العينات لمدة 15-30 دقيقة عند 37 درجة مئوية مع حمايتها من الضوء. ٤. اغسل الخلايا مرتين بمحلول التلوين BD Pharmingen™ (FBS). ٥. تخلص من السائل الطافي واخلط برفق لتفكيك الخلايا المترسبة. ٦. أعد تعليق الخلايا في محلول التلوين (FBS). ٧. حلل الخلايا باستخدام قياس التدفق الخلوي. بدلاً من ذلك، قم بتلوين الخلايا بشكل معاكس باستخدام أصباغ فلورية أو أجسام مضادة متوافقة حسب الرغبة، ثم قم بتحليلها. وسم الخلايا الملتصقة باستخدام BD Pharmingen™ MitoStatus TMRE لتحليل قياس التدفق الخلوي: ١. يجب تلوين الخلايا الملتصقة في مكانها عند كثافة ≤ ٧٠٪. قم بتلوين الخلايا في وسط زراعة خلايا طازج مُسخن مسبقًا أو محلول التلوين المطلوب باستخدام BD Pharmingen™ MitoStatus TMRE بتركيز ٢٠-٢٠٠ نانومتر عن طريق إضافة المحلول المركز مباشرة إلى الخلايا بالتركيز المطلوب. أ. ملاحظة: يمكن أيضًا إضافة BD Pharmingen™ MitoStatus TMRE مباشرة إلى المزرعة بدلاً من التلوين في وسط طازج. يمكن أيضًا إجراء التلوين باستخدام محلول التلوين BD Pharmingen™ المُسخّن مسبقًا (FBS) أو محلول Dulbecco's PBS المُسخّن مسبقًا (DPBS). قد يوفر DPBS دقةً أعلى لبعض أنواع الخلايا، ولكنه قد يؤدي أيضًا إلى زيادة التلوين الخلفي. ب. ملاحظة: للمساعدة في تحديد البوابات في قياس التدفق الخلوي، نوصي باستخدام خلايا تحكم مُعالجة بالمذيب فقط و/أو خلايا مُعالجة بمُفكِّك اقتران الميتوكوندريا، مثل FCCP. ٢. حضّن العينات لمدة ١٥-٣٠ دقيقة عند ٣٧ درجة مئوية في مكان مُظلم. ٣. اغسل الخلايا مرتين بمحلول التلوين BD Pharmingen™ (FBS). ٤. أزل الخلايا من وسط النمو. نوصي باستخدام محلول فصل الخلايا BD™ Accutase™ (رقم المنتج ٥٦١٥٢٧). ٥. اغسل الخلايا مرتين بمحلول التلوين BD Pharmingen™ (FBS) أو ما يُعادله. ٦. تخلص من السائل الطافي واخلط برفق لتفكيك الخلايا. ٧. أعد تعليق الخلايا في محلول التلوين (FBS). ٨. حلل الخلايا باستخدام قياس التدفق الخلوي. أو بدلاً من ذلك، قم بتلوين الخلايا بشكل معاكس باستخدام أصباغ أو أجسام مضادة فلورية متوافقة حسب الرغبة، ثم قم بتحليلها. ملاحظات: ١. هذا الصبغ غير متوافق مع تثبيت الخلايا. ٢. يجب على كل مستخدم تحديد التركيزات المثلى للكواشف والخلايا والظروف المناسبة للاختبار المطلوب. نوصي بمعايرة الكاشف في التجارب الأولية للحصول على أفضل النتائج. ٣. يمكن تلوين الخلايا بكميات كبيرة قبل تلوينها بالأجسام المضادة الفلورية. وسم الخلايا باستخدام BD Pharmingen™ MitoStatus TMRE للتصوير الفلوري: ١. لون الخلايا في وسط طازج مُسخن مسبقًا باستخدام ٢٠-٢٠٠ نانومتر من BD Pharmingen™ MitoStatus TMRE. ٢. حضّن العينات لمدة ١٥-٣٠ دقيقة عند ٣٧ درجة مئوية في مكان مظلم. ٣. أزل محلول التلوين واستبدله بمحلول DPBS مُسخن مسبقًا. 4. تحليل الخلايا باستخدام التصوير الفلوري. أو بدلاً من ذلك، يمكن تلوين الخلايا بأصباغ فلورية أو أجسام مضادة متوافقة حسب الرغبة ثم تحليلها.
ملاحظات المنتج: نظرًا لاختلاف التطبيقات، ينبغي على كل باحث معايرة الكاشف للحصول على أفضل النتائج. للاطلاع على أطياف الفلوركروم وإعدادات الجهاز المناسبة، يُرجى زيارة صفحة قياس التدفق الخلوي متعدد الألوان على موقعنا الإلكتروني www.bdbiosciences.com/colors. Accutase هي علامة تجارية مسجلة لشركة Innovative Cell Technologies, Inc.، وCy هي علامة تجارية لشركة GE Healthcare. قبل التلوين بهذا الكاشف، يُرجى التأكد من أن جهاز قياس التدفق الخلوي الخاص بك قادر على إثارة الفلوركروم وتمييز الفلورة الناتجة. يُرجى مراجعة www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية.