BD، 564903، BD Pharmingen™ DRAQ5™

التطبيقات: التصوير الحيوي، التألق المناعي، التلوين داخل الخلايا (قياس التدفق الخلوي) (تم اختباره أثناء التطوير)
التركيز: 5 ملي مول
RRID: AB_2869620
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
التحضير والتخزين: يُحفظ غير مخفف في درجة حرارة 4 درجات مئوية، ويُحفظ بعيداً عن الضوء لفترات طويلة. لا يُجمد.
إجراءات التحليل الموصى بها: تلوين الخلايا الحية لتحليل محتوى الحمض النووي باستخدام قياس التدفق الخلوي 1. الحصول على معلق خلوي أحادي. 2. إعادة تعليق الخلايا بتركيز 0.5 × 10^6 خلية/مل أو أقل في وسط كامل أو محلول منظم خالٍ من الأزيد يحتوي على 20 ميكرومول من DRAQ5™. 3. التحضين عند 37 درجة مئوية لمدة 5-15 دقيقة. أ. قد تختلف الكثافة الخلوية المثلى وتركيز DRAQ5™ ووقت التلوين لتحليل محتوى الحمض النووي باختلاف نوع الخلية. يجب تحسين ظروف التحليل في التجارب الأولية للحصول على أفضل النتائج. 4. ترسيب الخلايا بالطرد المركزي وسحب الوسط أو محلول منظم خالٍ من الأزيد يحتوي على DRAQ5™. 5. إعادة تعليق الخلايا في محلول التلوين BD Pharmingen™ (FBS) (رقم المنتج 554656) أو محلول ملحي فوسفاتي 1×، ثم المتابعة مباشرة للتحليل باستخدام قياس التدفق الخلوي. يمكن أيضًا تحليل الخلايا دون غسل، ولكن قد يؤدي ذلك إلى انخفاض دقة الرسم البياني لمحتوى الحمض النووي. تلوين الخلايا المثبتة لتحليل محتوى الحمض النووي باستخدام قياس التدفق الخلوي: 1. الحصول على معلق خلوي أحادي. 2. معالجة الخلايا على الجليد لمدة 30 دقيقة باستخدام إيثانول بارد بنسبة 70-80%. أ. يوفر التثبيت بالإيثانول عادةً أكثر الرسوم البيانية وضوحًا. ومع ذلك، فقد استُخدم هذا الكاشف بنجاح أيضًا لتحليل محتوى الحمض النووي باستخدام مجموعة محلول عامل النسخ (رقم المنتج 562574) أو محلول التثبيت BD Cytofix™ (رقم المنتج 554655) وبروتوكول BD Phosflow™ Perm III (رقم المنتج 558050). 3. غسل الخلايا مرة واحدة باستخدام محلول التلوين BD Pharmingen™ (FBS). ٤. خفف محلول DRAQ5™ إلى تركيز ٢٠ ميكرومولار في محلول دولبيكو الملحي الفوسفاتي (DPBS) بتركيز ١× أو أي محلول منظم آخر خالٍ من الأزيد مباشرةً قبل الاستخدام. ٥. صبغ الخلايا لمدة ٥-١٥ دقيقة عند كثافة خلوية تبلغ ٠.٥ × ١٠^٦ خلية/مل أو أقل. لا حاجة لغسل إضافي قبل التحليل. أ. قد تختلف الكثافة الخلوية المثلى وتركيز DRAQ5™ لتحليل محتوى الحمض النووي باختلاف نوع الخلية. يجب تحسين ظروف الفحص في التجارب الأولية للحصول على أفضل النتائج. ٦. تابع التحليل باستخدام قياس التدفق الخلوي. التلوين المناعي الفلوري للخلايا الحية لتصوير النواة ١. خفف محلول DRAQ5™ إلى تركيز ٥-٢٠ ميكرومولار في وسط كامل أو أي محلول منظم آخر خالٍ من الأزيد مباشرةً قبل الاستخدام. ٢. أضف محلول DRAQ5™ إلى العينات واحضنها عند درجة حرارة ٣٧ درجة مئوية لمدة ٥-٣٠ دقيقة. يعتمد وقت التلوين المطلوب على نوع الخلية. 3. أزل محلول DRAQ5™ من الخلايا في نهاية فترة الحضانة، وأضف محلول BD Pharmingen™ Stain Buffer (FBS) (رقم المنتج 554656) أو محلول DPBS بتركيز 1×. يمكن أيضًا تحليل الخلايا دون غسل، ولكن قد يؤدي ذلك إلى زيادة التشويش الناتج عن الصبغة غير المرتبطة. 4. ابدأ التصوير. نوصي باستخدام مرشح بطول موجي 715LP أو أطول، مع العلم أن الصبغة تُكتشف جيدًا في المرشحات المستخدمة عادةً للكشف عن Alexa Fluor® 647 (مثل 660/20 أو 692/40 نانومتر). لاحظ أن الصبغة المرتبطة بالحمض النووي المزدوج ستتألق بشدة في النواة، بينما قد تتألق الصبغة غير المرتبطة بشكل خافت في السيتوبلازم، مما يسمح بفصل حجرات السيتوبلازم والنواة. التلوين المناعي الفلوري للخلايا المثبتة لتصوير النواة: 1. ثبّت الخلايا واجعلها نفاذة حسب الرغبة. ٢. خفف محلول DRAQ5™ إلى تركيز ٥-٢٠ ميكرومولار في محلول DPBS بتركيز ١× أو أي محلول منظم آخر خالٍ من الأزيد مباشرةً قبل الاستخدام. ٣. أضف محلول DRAQ5™ إلى كل بئر قبل التحليل بخمس دقائق على الأقل. ٤. ابدأ التصوير. نوصي باستخدام مرشح بطول موجي ٧١٥ نانومتر أو أطول، مع العلم أن الصبغة تُكتشف جيدًا في المرشحات المستخدمة عادةً للكشف عن Alexa Fluor® 647 (مثل ٦٦٠/٢٠ أو ٦٩٢/٤٠ نانومتر). لاحظ أن الصبغة المرتبطة بالحمض النووي المزدوج ستتألق بشدة في النواة، بينما قد تتألق الصبغة غير المرتبطة بشكل خافت في السيتوبلازم، مما يسمح بفصل حجرات السيتوبلازم والنواة. ملاحظة: تم تطوير هذا الكاشف واعتماده لتطبيقات التصوير الحيوي. مع ذلك، لا يُجرى اختبار التصوير الحيوي الروتيني على كل دفعة. تحذير: يحتوي DRAQ5™ على أقل من 1% من 1,5-BIS{[2-(DIMETHYLAMINO)ETHYL]AMINO}-4,8-DIHYDROXYANTHRACENE-9,10-DIONE. بيانات المخاطر: يُسبب تهيجًا للجلد. يُسبب تهيجًا خطيرًا للعين. قد يُسبب تهيجًا للجهاز التنفسي. بيانات الاحتياطات: ارتدِ قفازات/ملابس واقية/واقي للعينين/واقي للوجه. اغسل جيدًا بعد الاستخدام. في حالة ملامسة العينين: اشطفهما بحذر بالماء لعدة دقائق. أزل العدسات اللاصقة، إن وجدت وكان من السهل إزالتها. استمر في الشطف. إذا استمر تهيج العين: استشر طبيبًا. انزع الملابس الملوثة واغسلها قبل إعادة استخدامها. اتصل بمركز السموم أو الطبيب إذا شعرت بتوعك. في حالة حدوث تهيج للجلد: استشر طبيبًا. في حالة ملامسة الجلد: اغسل بكمية كبيرة من الماء. تجنب استنشاق الغبار/الأبخرة/الغازات/الرذاذ. استخدمه فقط في الهواء الطلق أو في منطقة جيدة التهوية. في حالة الاستنشاق: انقل المصاب إلى الهواء الطلق ووفر له وضعية مريحة للتنفس. يُحفظ في مكان جيد التهوية. يُحفظ الوعاء مغلقًا بإحكام. يُخزن في مكان مغلق. تخلص من المحتويات/العبوة في منشأة معالجة وتخلص مناسبة وفقًا للقوانين واللوائح المعمول بها، وخصائص المنتج وقت التخلص.
إشعارات المنتج: DRAQ5™ علامة تجارية مسجلة لشركة BioStatus Ltd.، وFlowJo علامة تجارية لشركة Tree Star Inc.، وAlexa Fluor® علامة تجارية مسجلة لشركة Molecular Probes, Inc.، يوجين، أوريغون. تم تطوير هذا الجسم المضاد واعتماده لتطبيقات التصوير الحيوي. مع ذلك، لا يُجرى اختبار التصوير الحيوي الروتيني على كل دفعة. يُنصح الباحثون بمعايرة الكاشف للحصول على أفضل أداء. يُرجى مراجعة www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية.