BD، 564904، BD Pharmingen™ DRAQ7™

التحضير والتخزين: يُحفظ غير مخفف في درجة حرارة 4 درجات مئوية، ويُحفظ بعيداً عن الضوء لفترات طويلة. لا يُجمد.
إجراءات الفحص الموصى بها: تلوين الخلايا الحية لتحليل حيويتها باستخدام قياس التدفق الخلوي 1. الحصول على معلق خلوي أحادي. 2. إعادة تعليق الخلايا في محلول دولبيكو الملحي الفوسفاتي (DPBS) بتركيز 1× أو أي محلول منظم آخر خالٍ من الأزيد يحتوي على 1-3 ميكرومتر من DRAQ7™. أ. قد يختلف التركيز الأمثل لـ DRAQ7™ لتحليل الحيوية باختلاف نوع الخلية. نوصي بمعايرة الكاشف لنوع الخلية المراد تحليلها في التجارب الأولية. ب. بالإضافة إلى ذلك، قد تتلون الخلايا الميتة بكميات متفاوتة من DRAQ7™. نوصي بالتلوين المشترك، على سبيل المثال، باستخدام BD Pharmingen™ FITC Annexin V (رقم المنتج 556419) إذا رغبنا في إجراء المزيد من التحليلات على الخلايا الميتة. 3. التحضين لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة. لا حاجة للغسل قبل التحليل. 4. المتابعة إلى التحليل باستخدام قياس التدفق الخلوي. تلوين الخلايا المثبتة لتحليل محتوى الحمض النووي باستخدام قياس التدفق الخلوي: 1. الحصول على معلق خلوي أحادي. 2. معالجة الخلايا على الجليد لمدة 30 دقيقة باستخدام إيثانول بارد بنسبة 70-80%. أ. يوفر التثبيت بالإيثانول عادةً أفضل الرسوم البيانية. ومع ذلك، فقد تم استخدام هذا الكاشف بنجاح أيضًا لتحليل محتوى الحمض النووي باستخدام مجموعة محاليل عوامل النسخ BD Pharmingen™ (رقم المنتج 562574/562725) أو محلول التثبيت BD Cytofix™ (رقم المنتج 554655) وبروتوكول BD Phosflow™ Perm III (رقم المنتج 558050). 3. غسل الخلايا مرة واحدة باستخدام محلول التلوين BD Pharmingen™ (FBS) (رقم المنتج 554656). ٤. خفف محلول DRAQ7™ إلى تركيز ٢٠ ميكرومولار في محلول DPBS بتركيز ١× أو أي محلول منظم آخر خالٍ من الأزيد مباشرةً قبل الاستخدام. ٥. صبغ الخلايا لمدة ٥-١٥ دقيقة بكثافة خلوية تبلغ ٠.٥ × ١٠⁶ خلية/مل أو أقل. لا حاجة لغسل إضافي قبل التحليل. أ. قد تختلف الكثافة الخلوية المثلى وتركيز DRAQ7™ لتحليل محتوى الحمض النووي باختلاف نوع الخلية. يجب تحسين ظروف الفحص في التجارب الأولية للحصول على أفضل النتائج. ٦. انتقل إلى التحليل باستخدام قياس التدفق الخلوي. التلوين المناعي الفلوري للخلايا المثبتة لتصوير النواة ١. ثبت الخلايا واجعلها نفاذة حسب الرغبة. ٢. خفف محلول DRAQ7™ إلى تركيز ٥-٢٠ ميكرومولار في محلول DPBS بتركيز ١× أو أي محلول منظم آخر خالٍ من الأزيد مباشرةً قبل الاستخدام. ٣. أضف محلول DRAQ7™ إلى كل عينة قبل التحليل بخمس دقائق على الأقل. ٤. انتقل إلى التصوير. نوصي باستخدام مرشح بطول موجي 715LP أو أطول، مع العلم أن الصبغة تُكتشف جيدًا في المرشحات المستخدمة عادةً للكشف عن Alexa Fluor® 647 (مثل 660/20 أو 692/40). لاحظ أن الصبغة المرتبطة بالحمض النووي المزدوج ستتألق بشدة في النواة، بينما قد تتألق الصبغة غير المرتبطة بشكل خافت في السيتوبلازم، مما يسمح بفصل حجرات السيتوبلازم والنواة. ملاحظة: تم تطوير هذا الكاشف واعتماده لتطبيقات التصوير الحيوي. مع ذلك، لا يُجرى اختبار التصوير الحيوي الروتيني على كل دفعة. تحذير: يحتوي DRAQ7™ على أقل من 1% من 1,5-BIS{[2-(DIMETHYLAMINO)ETHYL]AMINO}-4,8-DIHYDROXYANTHRACENE-9,10-DIONE. بيانات المخاطر: يُسبب تهيجًا للجلد. يُسبب تهيجًا خطيرًا للعين. قد يُسبب تهيجًا للجهاز التنفسي. بيانات الاحتياطات: ارتدِ قفازات/ملابس واقية/واقي للعين/واقي للوجه. اغسل يديك جيدًا بعد الاستخدام. في حالة ملامسة العينين: اشطفهما بحذر بالماء لعدة دقائق. أزل العدسات اللاصقة، إن وجدت وكان من السهل إزالتها. استمر في الشطف. إذا استمر تهيج العين: استشر طبيبًا. انزع الملابس الملوثة واغسلها قبل إعادة استخدامها. اتصل بمركز السموم أو الطبيب إذا شعرت بتوعك. في حالة حدوث تهيج للجلد: استشر طبيبًا. في حالة ملامسة الجلد: اغسله بكمية كبيرة من الماء. تجنب استنشاق الغبار/الأبخرة/الغازات/الرذاذ. استخدمه فقط في الهواء الطلق أو في منطقة جيدة التهوية. في حالة الاستنشاق: انقل الشخص إلى الهواء الطلق ووفر له الراحة للتنفس. خزّنه في مكان جيد التهوية. أبقِ العبوة مغلقة بإحكام. خزّنه في مكان مغلق. تخلص من المحتويات/العبوة في منشأة معالجة وتخلص مناسبة وفقًا للقوانين واللوائح المعمول بها، وخصائص المنتج وقت التخلص.
إشعارات المنتج: DRAQ7™ علامة تجارية مسجلة لشركة BioStatus Ltd.، وFlowJo علامة تجارية لشركة Tree Star Inc.، وAlexa Fluor® علامة تجارية مسجلة لشركة Molecular Probes, Inc.، يوجين، أوريغون. وmTESR™1 علامة تجارية لشركة StemCell Technologies. تم تطوير هذا الجسم المضاد واعتماده لتطبيقات التصوير الحيوي. مع ذلك، لا يُجرى اختبار التصوير الحيوي الروتيني على كل دفعة. يُنصح الباحثون بمعايرة الكاشف للحصول على أفضل أداء. يُرجى مراجعة www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية.