BD، 564995، صبغة بي دي هورايزون™ القابلة للتثبيت 570

التطبيق: قياس التدفق الخلوي، التلوين داخل الخلايا (قياس التدفق الخلوي) (تم اختباره أثناء التطوير)
RRID: AB_2869635
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
إجراءات التحليل الموصى بها: التحضير: ضع مسحوق صبغة FVS570 و220 ميكرولتر من ثنائي ميثيل سلفوكسيد (DMSO؛ على سبيل المثال، Sigma D2650) الطازج المستخدم في زراعة الخلايا في درجة حرارة الغرفة. أضف 220 ميكرولتر من DMSO ورج المحلول جيدًا. افحص المحلول وكرر الرج حتى تذوب الصبغة تمامًا. هذا هو المحلول الأصلي. التخزين: عند الاستلام، خزّن الصبغة الجافة في مكان جاف بعيدًا عن الضوء عند درجة حرارة -80 درجة مئوية حتى الاستخدام. بعد إذابتها في DMSO، خزّن المحلول الأصلي في درجة حرارة -20 درجة مئوية في أجزاء صغيرة. لا تستخدم الصبغة المُذابة بعد 90 يومًا من التخزين. يُرجى التخلص من محلول الصبغة بعد 90 يومًا من إذابتها في DMSO. متطلبات قياس التدفق الخلوي: يمكن استخدام أجهزة قياس التدفق الخلوي المزودة بليزر أصفر-أخضر أو ​​أزرق (مثل BD FACSCanto™ II، أو BD LSRFortessa™، أو BD LSR™ II، أو BD Accuri™ C6). يمكن قراءة هذا الصبغ من المرشحات الشائعة الاستخدام في قياس التدفق الخلوي (مثل مرشح 575/26 أو 582/15 نانومتر). يُفضل استخدام عينات مصبوغة وغير مصبوغة من الخلايا المراد قياسها لتحقيق أفضل تعويض للفلورة. الإجراء: وسم الخلايا بصبغة حيوية قابلة للتثبيت 570: 1. تحضير الخلايا للتلوين الفلوري باستخدام محاليل خالية من أزيد الصوديوم. 2. غسل الخلايا مرة واحدة في محلول دولبيكو الملحي الفوسفاتي (DPBS) الخالي من أزيد الصوديوم والبروتين (1X). 3. إعادة تعليق الخلايا بتركيز 1-10 × 10^6 خلية/مل في محلول DPBS (1X) الخالي من أزيد الصوديوم والبروتين. ٤. أضف ١ ميكرولتر من محلول BD Horizon™ Fixable Viability Stain 570 Stock Solution لكل ١ مل من معلق الخلايا (١:١٠٠٠) وقم بالخلط فورًا. ملاحظة: نوصي بمعايرة الصبغة للحصول على أفضل النتائج، حيث أن أنواع الخلايا المختلفة والتطبيقات المختلفة قد تؤدي إلى تباين كبير في التلوين. ٥. حضّن الخليط لمدة ١٠-١٥ دقيقة في درجة حرارة الغرفة بعيدًا عن الضوء. اختياري: بدلاً من ذلك، حضّن الخليط عند ٣٧ درجة مئوية لمدة ٥-٧ دقائق أو ٢-٨ درجة مئوية لمدة ٣٠-٦٠ دقيقة. ٦. اغسل الخلايا مرتين باستخدام ٢ مل من محلول BD Pharmingen™ Stain Buffer (FBS) (رقم المنتج ٥٥٤٦٥٦) أو ما يعادله. ٧. تخلص من السائل الطافي واخلط برفق لتفكيك الخلايا المترسبة. ٨. أعد تعليق الخلايا في محلول Stain Buffer (FBS) أو ما يعادله. ٩. قم بتلوين الخلايا وتثبيتها وتسهيل نفاذيتها حسب الحاجة للتطبيقات اللاحقة. ملاحظات: ١. يجب على كل مستخدم تحديد التركيزات المثلى للكواشف والخلايا والظروف المناسبة للتحليل المطلوب. نوصي بمعايرة الكاشف في التجارب الأولية للحصول على أفضل النتائج. ٢. يتم تثبيط تفاعل الصبغة الحرة بالغسل بمحلول منظم يحتوي على بروتين (مثل مصل بقري جنيني أو ألبومين مصل البقر). ٣. يمكن تلوين الخلايا بكميات كبيرة قبل التجميد أو التلوين بالأجسام المضادة الفلورية. ٤. يمكن استخدام صبغة BD Horizon™ Fixable Viability Stain 570 في فحوصات التلوين داخل الخلايا التي تتطلب التثبيت بالفورمالديهايد والنفاذية بالميثانول والمنظفات، مثل تلك المستخدمة في تلوين BD Phosflow™ (مثل محلول BD Phosflow™ Perm Buffer III، رقم المنتج 558050)، أو تلوين السيتوكينات داخل الخلايا (مثل مجموعة BD Cytofix/Cytoperm™ Fixation/Permeabilization Solution Kit، رقم المنتج 554714)، أو تلوين عوامل النسخ (مثل مجموعة BD Pharmingen™ Transcription Factor Buffer Set، رقم المنتج 562574/562725). ٥. قد تُظهر الخلايا الميتة تباينًا في التلوين. نوصي بالتلوين المشترك باستخدام مجسات فلورية أخرى مثل APC Annexin V (رقم المنتج 550475) إذا رغبنا في إجراء تحليل إضافي للخلايا الميتة.
ملاحظات المنتج: نظرًا لاختلاف التطبيقات، ينبغي على كل باحث معايرة الكاشف للحصول على أفضل النتائج. للاطلاع على أطياف الفلوركروم وإعدادات الجهاز المناسبة، يُرجى زيارة صفحة قياس التدفق الخلوي متعدد الألوان على موقعنا الإلكتروني www.bdbiosciences.com/colors. قبل التلوين بهذا الكاشف، يُرجى التأكد من قدرة جهاز قياس التدفق الخلوي على إثارة الفلوركروم وتمييز الفلورة الناتجة. للاطلاع على البروتوكولات الفنية، يُرجى زيارة www.bdbiosciences.com/us/s/resources.