BD، 564997، صبغة بي دي هورايزون™ القابلة للتثبيت 700

التطبيق: قياس التدفق الخلوي، التلوين داخل الخلايا (قياس التدفق الخلوي) (تم اختباره أثناء التطوير)
RRID: AB_2869637
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
إجراءات التحليل الموصى بها: التحضير: ضع مسحوق صبغة FVS700 و310 ميكرولتر من ثنائي ميثيل سلفوكسيد (DMSO؛ على سبيل المثال، Sigma D2650) الطازج والمخصص لزراعة الخلايا في درجة حرارة الغرفة. أضف 310 ميكرولتر من DMSO ورج المحلول جيدًا. افحص المحلول وكرر الرج حتى تذوب الصبغة تمامًا. هذا هو المحلول الأصلي. التخزين: عند الاستلام، خزّن الصبغة الجافة في مكان جاف بعيدًا عن الضوء عند درجة حرارة -80 درجة مئوية حتى الاستخدام. بعد إذابتها في DMSO، خزّن المحلول الأصلي في درجة حرارة -20 درجة مئوية في أجزاء صغيرة. لا تستخدم الصبغة المُذابة بعد 90 يومًا من التخزين. يُرجى التخلص من محلول الصبغة بعد 90 يومًا من إذابتها في DMSO. متطلبات قياس التدفق الخلوي: يمكن استخدام أجهزة قياس التدفق الخلوي المزودة بليزر أحمر (مثل BD FACSCanto™ II أو BD LSRFortessa™ أو BD LSR™ II). يمكن قراءة هذا الصبغ من المرشحات الشائعة الاستخدام مع جهاز BD Horizon™ APC-R700 أو Alexa Fluor® 700 (مثل مرشح 730/45 أو 712/21 نانومتر). يُفضل استخدام عينات من الخلايا المراد فحصها، مصبوغة وغير مصبوغة، لتحقيق أفضل تعويض للفلورة. إجراء وسم الخلايا بصبغة Fixable Viability Stain 700: 1. تحضير الخلايا للتلوين باستخدام قياس التدفق الخلوي باستخدام محاليل خالية من أزيد الصوديوم. 2. غسل الخلايا مرة واحدة في محلول Dulbecco's Phosphate Buffered Saline (DPBS) الخالي من أزيد الصوديوم والبروتين (1X). 3. إعادة تعليق الخلايا بتركيز 1-10 × 10^6 خلية/مل في محلول DPBS (1X) الخالي من أزيد الصوديوم والبروتين. 4. إضافة 1 ميكرولتر من محلول BD Horizon™ Fixable Viability Stain 700 المركز لكل 1 مل من معلق الخلايا (1:1000) مع الخلط الفوري. ملاحظة: نوصي بمعايرة الصبغة للحصول على أفضل النتائج، حيث أن اختلاف أنواع الخلايا والتطبيقات قد يؤدي إلى تباين كبير في التلوين. يرجى مراجعة الملاحظة 1 أدناه للاطلاع على النطاقات الموصى بها. 5. حضّن المزيج لمدة 10-15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة أو 2-8 درجة مئوية مع حمايته من الضوء. أ. اختياري: بدلاً من ذلك، حضّن المزيج عند 37 درجة مئوية لمدة 5-7 دقائق. 6. اغسل الخلايا مرتين باستخدام 2 مل من محلول التلوين BD Pharmingen™ (FBS) (رقم المنتج 554656) أو ما يعادله. 7. تخلص من السائل الطافي واخلط برفق لتفكيك الخلايا المترسبة. 8. أعد تعليق الخلايا في محلول التلوين (FBS) أو ما يعادله. 9. لوّن الخلايا وثبّتها واجعلها نفاذة حسب الرغبة للتطبيقات اللاحقة. ملاحظات: 1. يجب على كل مستخدم تحديد التركيزات المثلى للكواشف والخلايا والظروف المناسبة للاختبار المطلوب. نوصي بمعايرة الكاشف في التجارب الأولية للحصول على أفضل النتائج. فيما يلي نطاقات وجدناها مناسبة لأنظمة خلوية مختلفة: أ. خلايا الدم الكاملة المحللة: 1:1000 من المحلول الأصلي. ب. الخلايا الأولية: 1:1000 - 1:4000 من المحلول الأصلي. ج. خطوط الخلايا: 1:4000 - 1:10000 من المحلول الأصلي. 2. يتم تثبيط تفاعل الصبغة الحرة بالغسل بمحلول منظم يحتوي على بروتين (مثل مصل جنين البقر أو ألبومين مصل البقر). 3. يمكن تلوين الخلايا بكميات كبيرة قبل التجميد أو التلوين بالأجسام المضادة الفلورية. ٤. يمكن استخدام صبغة BD Horizon™ Fixable Viability Stain 700 في فحوصات التلوين داخل الخلايا التي تتطلب التثبيت بالفورمالديهايد والنفاذية بالميثانول والمنظفات، مثل تلك المستخدمة في تلوين BD Phosflow™ (مثل محلول BD Phosflow™ Perm Buffer III، رقم المنتج 558050)، أو تلوين السيتوكينات داخل الخلايا (مثل مجموعة BD Cytofix/Cytoperm™ Fixation/Permeabilization Solution Kit، رقم المنتج 554714)، أو تلوين عوامل النسخ (مثل مجموعة BD Pharmingen™ Transcription Factor Buffer Set، رقم المنتج 562574/562725). ٥. قد تُظهر الخلايا الميتة تباينًا في التلوين. نوصي بالتلوين المشترك باستخدام مجسات فلورية أخرى مثل Annexin V FITC (رقم المنتج 556419) إذا رغبنا في إجراء تحليل إضافي للخلايا الميتة.
ملاحظات المنتج: نظرًا لاختلاف التطبيقات، ينبغي على كل باحث معايرة الكاشف للحصول على أفضل النتائج. للاطلاع على أطياف الفلوركروم وإعدادات الجهاز المناسبة، يُرجى زيارة صفحة قياس التدفق الخلوي متعدد الألوان على موقعنا الإلكتروني www.bdbiosciences.com/colors. Alexa Fluor® علامة تجارية مسجلة لشركة Molecular Probes, Inc.، يوجين، أوريغون. قبل التلوين بهذا الكاشف، يُرجى التأكد من قدرة جهاز قياس التدفق الخلوي على إثارة الفلوركروم وتمييز الفلورة الناتجة. للاطلاع على البروتوكولات الفنية، يُرجى زيارة www.bdbiosciences.com/us/s/resources.