BD، 565230، BD Horizon™ BV421 فأر مضاد لإنزيم ناقل الطرفي البشري (TdT)

الاسم البديل: TdT؛ DNTT؛ ناقلة طرفية؛ إنزيم إضافة طرفية
التفاعل: بشري (اختبار مراقبة الجودة)
النمط المصلي: IgG1، κ للفأر BALB/c
المستضد: إنزيم ناقل النيوكليوتيدات البشري النقي
التطبيق: التلوين داخل الخلايا (قياس التدفق الخلوي) (يتم اختباره بشكل روتيني)
حجم العينة لكل اختبار: 5 ميكرولتر
RRID: AB_2739124
محلول التخزين: محلول مائي منظم يحتوي على BSA و ≤0.09% أزيد الصوديوم.
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
التحضير والتخزين: يُحفظ غير مخفف في درجة حرارة 4 درجات مئوية، ويُحفظ بعيدًا عن الضوء لفترات طويلة. لا يُجمد. تم تنقية الجسم المضاد أحادي النسيلة من سائل مزرعة الأنسجة أو السائل الاستسقائي باستخدام كروماتوغرافيا التقارب. تم ربط الجسم المضاد بصبغة BD Horizon BV421 في ظل الظروف المثلى، وتمت إزالة الجسم المضاد غير المرتبط وصبغة BD Horizon BV421 الحرة.
إجراءات التحليل الموصى بها: للحصول على نتائج مثالية وقابلة للتكرار، يُنصح باستخدام محلول التلوين BD Horizon Brilliant Stain Buffer عند استخدام صبغتين أو أكثر من صبغات BD Horizon Brilliant في التجربة نفسها. قد تتسبب تفاعلات الصبغات الفلورية في ظهور شوائب في التلوين، مما قد يؤثر على تفسير البيانات. صُمم محلول التلوين BD Horizon Brilliant Stain Buffer لتقليل هذه التفاعلات. يمكنكم الاطلاع على المزيد من المعلومات في ورقة البيانات الفنية الخاصة بمحلول التلوين BD Horizon Brilliant Stain Buffer (رقم المنتج 563794). بروتوكول التلوين: 1. تُجمع الخلايا المستهدفة المزروعة في أنبوب طرد مركزي مخروطي سعة 50 مل. يُطرد مركزيًا بسرعة 1000 دورة في الدقيقة لمدة 10 دقائق، ثم يُشفط السائل الطافي ويُتخلص منه. 2. تُغسل الخلايا المترسبة مرة واحدة بمحلول الفوسفات الملحي (PBS) وتُخلط برفق. يُطرد مركزيًا بسرعة 1000 دورة في الدقيقة لمدة 10 دقائق، ثم يُشفط السائل الطافي ويُتخلص منه. 3. ثبّت الخلايا بإضافة 15-20 مل من الفورمالديهايد بتركيز 1% مع التقليب المستمر، ثم حضّنها لمدة 20 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. افصلها بالطرد المركزي عند 1000 دورة في الدقيقة لمدة 10 دقائق، ثم اسحب السائل الطافي وتخلص منه. 4. أضف 15-20 مل من محلول تريتون X-100 بتركيز 0.1% في محلول ملحي فوسفاتي (PBS)، ثم حضّنها لمدة 5-10 دقائق. افصلها بالطرد المركزي عند 1000 دورة في الدقيقة لمدة 10 دقائق، ثم اسحب السائل الطافي وتخلص منه. 5. أعد تعليق الخلايا في محلول ملحي فوسفاتي (PBS) مضافًا إليه 1% من مصل بقري جنيني (FBS) (محلول الغسيل) ليصل التركيز النهائي إلى حوالي 1 × 10^6 خلية لكل 50 ميكرولتر. 6. جهّز أنبوبًا واحدًا يحتوي على 50 ميكرولتر من معلق الخلايا، وأضف إليه 20 ميكرولتر من الأجسام المضادة الفلورية المضادة لإنزيم TdT البشري. حضّر أنبوبًا آخر يحتوي على 50 ميكرولتر من معلق الخلايا، وأضف إليه 20 ميكرولتر من عينة تحكم متماثلة من نوع Ig الفلوري. امزج محتويات الأنبوب برفق، ثم حضّنه في الظلام عند درجة حرارة الغرفة لمدة 20-30 دقيقة. 7. اغسل الخلايا بـ 2 مل من محلول الغسل لكل أنبوب. قم بالطرد المركزي لمدة 5 دقائق عند 1000 دورة في الدقيقة، ثم اسحب السائل الطافي وتخلص منه. 8. أعد تعليق الخلايا في 500 ميكرولتر من محلول الغسل، ثم حللها باستخدام قياس التدفق الخلوي.
ملاحظات المنتج: تم تخفيف هذا الكاشف مسبقًا للاستخدام بالحجم الموصى به لكل اختبار. نستخدم عادةً 1 × 10^6 خلية في عينة تجريبية بحجم 100 ميكرولتر (اختبار). يُرجى مراجعة www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية. Triton هي علامة تجارية لشركة Dow Chemical. Pacific Blue™ هي علامة تجارية لشركة Molecular Probes, Inc.، يوجين، أوريغون. مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية تقع في الولايات المتحدة. تحذير: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. خفف مركبات الأزيد في الماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. للاطلاع على أطياف الفلوركروم وإعدادات الجهاز المناسبة، يُرجى مراجعة صفحة قياس التدفق الخلوي متعدد الألوان على موقعنا الإلكتروني www.bdbiosciences.com/colors. ينبغي استخدام عنصر تحكم من نفس النوع بنفس تركيز الجسم المضاد المطلوب.