BD، 565231، BD Pharmingen™ Alexa Fluor® 647 Mouse Anti-Human Terminal Transferase (TdT)

الاسم البديل: TdT؛ DNTT؛ ناقلة طرفية؛ إنزيم إضافة طرفية
التفاعل: بشري (اختبار مراقبة الجودة)
النمط المصلي: IgG1، κ للفأر BALB/c
المستضد: إنزيم ناقل النيوكليوتيدات البشري النقي
التطبيق: التلوين داخل الخلايا (قياس التدفق الخلوي) (يتم اختباره بشكل روتيني)
حجم العينة لكل اختبار: 5 ميكرولتر
RRID: AB_2739125
محلول التخزين: محلول مائي منظم يحتوي على BSA و ≤0.09% أزيد الصوديوم.
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
التحضير والتخزين: يُحفظ غير مخفف في درجة حرارة 4 درجات مئوية، ويُحفظ بعيدًا عن الضوء لفترات طويلة. لا يُجمد. تم تنقية الجسم المضاد أحادي النسيلة من سائل مزرعة الأنسجة أو السائل الاستسقائي باستخدام كروماتوغرافيا التقارب. تم ربط الجسم المضاد بصبغة أليكسا فلور® 647 في ظل الظروف المثلى، وتمت إزالة صبغة أليكسا فلور® 647 غير المتفاعلة.
إجراءات الفحص الموصى بها: 1. اجمع الخلايا المستهدفة المزروعة في أنبوب طرد مركزي مخروطي سعة 50 مل. قم بالطرد المركزي بسرعة 1000 دورة في الدقيقة لمدة 10 دقائق، ثم اسحب السائل الطافي وتخلص منه. 2. اغسل الخلايا المترسبة مرة واحدة بمحلول الفوسفات الملحي (PBS) واخلطها برفق. قم بالطرد المركزي بسرعة 1000 دورة في الدقيقة لمدة 10 دقائق، ثم اسحب السائل الطافي وتخلص منه. 3. ثبّت الخلايا بإضافة 15-20 مل من الفورمالديهايد بتركيز 1% مع التقليب باستخدام جهاز الخلط الدوامي، ثم حضّنها لمدة 20 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. قم بالطرد المركزي بسرعة 1000 دورة في الدقيقة لمدة 10 دقائق، ثم اسحب السائل الطافي وتخلص منه. 4. أضف 15-20 مل من محلول تريتون X-100 بتركيز 0.1% في محلول الفوسفات الملحي (PBS) وحضّنها لمدة 5-10 دقائق. قم بالطرد المركزي بسرعة 1000 دورة في الدقيقة لمدة 10 دقائق، ثم اسحب السائل الطافي وتخلص منه. 5. أعد تعليق الخلايا في محلول الغسل PBS + 1% FBS ليصل تركيزها النهائي إلى حوالي 1 × 10^6 خلية لكل 50 ميكرولتر. 6. حضّر أنبوبًا واحدًا يحتوي على 50 ميكرولتر من معلق الخلايا، وأضف إليه 20 ميكرولتر من الأجسام المضادة الفلورية المضادة لـ TdT البشري. حضّر أنبوبًا آخر يحتوي على 50 ميكرولتر من معلق الخلايا، وأضف إليه 20 ميكرولتر من جسم مضاد فلوري مطابق من نوع Ig كعنصر تحكم. امزج محتويات الأنبوب برفق، ثم حضّنه في الظلام عند درجة حرارة الغرفة لمدة 20-30 دقيقة. 7. اغسل الخلايا بـ 2 مل من محلول الغسل لكل أنبوب. قم بالطرد المركزي لمدة 5 دقائق عند 1000 دورة في الدقيقة، ثم اسحب السائل الطافي وتخلص منه. 8. أعد تعليق الخلايا في 500 ميكرولتر من محلول الغسل، ثم حللها باستخدام قياس التدفق الخلوي.
ملاحظات المنتج: تم تخفيف هذا الكاشف مسبقًا للاستخدام بالحجم الموصى به لكل اختبار. نستخدم عادةً 1 × 10^6 خلية في عينة تجريبية بحجم 100 ميكرولتر (اختبار). يُرجى الرجوع إلى www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية. يتم جمع انبعاث فلوروكروم Alexa Fluor® 647 بنفس إعدادات الجهاز المستخدمة مع الألوفيوكوسيانين (APC). تُباع مُقترنات الأجسام المضادة المصبوغة بصبغات Alexa Fluor® و Pacific Blue™ و Cascade Blue® في هذا المنتج بموجب ترخيص من شركة Molecular Probes, Inc. للاستخدام البحثي فقط، باستثناء استخدامها مع المصفوفات الدقيقة، أو ككواشف خاصة بالمادة المُحللة. صبغات Alexa Fluor® (باستثناء Alexa Fluor® 430) وصبغة Pacific Blue™ وصبغة Cascade Blue® محمية ببراءات اختراع قيد الانتظار وصادرة. Alexa Fluor® علامة تجارية مسجلة لشركة Molecular Probes, Inc.، يوجين، أوريغون. Triton علامة تجارية لشركة Dow Chemical Company. مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية في الولايات المتحدة. تنبيه: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. خفف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. للاطلاع على أطياف الفلوركروم وإعدادات الجهاز المناسبة، يرجى زيارة صفحة قياس التدفق الخلوي متعدد الألوان على موقعنا الإلكتروني www.bdbiosciences.com/colors. يجب استخدام عنصر تحكم متماثل النمط بنفس تركيز الجسم المضاد المطلوب.