BD، 565388، صبغة بي دي هورايزون™ القابلة للتثبيت 780

التطبيق: قياس التدفق الخلوي، التلوين داخل الخلايا (قياس التدفق الخلوي) (تم اختباره أثناء التطوير)
RRID: AB_2869673
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
إجراءات التحليل الموصى بها: التحضير: ضع مسحوق صبغة FVS780 و180 ميكرولتر من ثنائي ميثيل سلفوكسيد (DMSO؛ على سبيل المثال، Sigma D2650) الطازج والمخصص لزراعة الخلايا في درجة حرارة الغرفة. أضف 180 ميكرولتر من DMSO ورج المحلول جيدًا. افحص المحلول وكرر الرج حتى تذوب الصبغة تمامًا. هذا هو المحلول الأصلي. التخزين: عند الاستلام، خزّن الصبغة الجافة في مكان جاف بعيدًا عن الضوء عند درجة حرارة -80 درجة مئوية حتى الاستخدام. بعد إذابتها في DMSO، خزّن المحلول الأصلي في درجة حرارة -20 درجة مئوية في أجزاء صغيرة. لا تستخدم الصبغة المُذابة بعد 90 يومًا من التخزين. يُرجى التخلص من محلول الصبغة بعد 90 يومًا من إذابتها في DMSO. متطلبات قياس التدفق الخلوي: يمكن استخدام أجهزة قياس التدفق الخلوي المزودة بليزر أحمر (مثل BD FACSCanto™ II، وBD™ LSR II، وBD LSRFortessa™، أو BD Accuri™ C6). يمكن قراءة هذا الصبغ من المرشحات الشائعة الاستخدام لـ APC-Cy™7 (مثل 780/60). يُفضل استخدام عينات الخلايا المستهدفة لتحقيق أفضل تعويض للفلورة. عند تصميم لوحات التلوين متعددة الألوان، يُرجى مراعاة تداخل الفلورة في قنوات BD Horizon™ BUV737 وBD Horizon™ BV786 وPE-Cy™7 (عند القراءة من الليزر الأصفر والأخضر). يجب تحسين اللوحات لمراعاة هذا التداخل. لتقليل تداخل الفلورة، نوصي بمعايرة FVS780 واستخدام أقل تركيز ممكن من الصبغة يوفر دقة كافية لتمييز مجموعات الخلايا الحية والميتة المستهدفة. إجراء تلوين الخلايا باستخدام صبغة BD Horizon™ Fixable Viability Stain 780: 1. تحضير الخلايا للتلوين باستخدام قياس التدفق الخلوي باستخدام محاليل خالية من أزيد الصوديوم. 2. غسل الخلايا مرة واحدة في محلول دولبيكو الملحي الفوسفاتي (DPBS) الخالي من أزيد الصوديوم والبروتين (1X). 3. إعادة تعليق الخلايا بتركيز 1-10 × 10^6 خلية/مل في محلول DPBS 1X الخالي من أزيد الصوديوم والبروتين. 4. إضافة 1 ميكرولتر من محلول BD Horizon™ Fixable Viability Stain 780 المركز لكل 1 مل من معلق الخلايا (1:1000) وخلطها فورًا. ملاحظة: نوصي بمعايرة الصبغة للحصول على أفضل النتائج، حيث أن اختلاف أنواع الخلايا والتطبيقات قد يؤدي إلى تباين كبير في التلوين. 5. حضانة الخليط لمدة 10-15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة بعيدًا عن الضوء. اختياري: بدلاً من ذلك، يمكن حضانة المخاليط عند درجة حرارة 37 درجة مئوية لمدة 5-7 دقائق أو عند درجة حرارة 2-8 درجة مئوية لمدة 30-60 دقيقة. 6. اغسل الخلايا مرتين باستخدام 2 مل من محلول التلوين BD Pharmingen™ (FBS) (رقم المنتج 554656) أو ما يعادله. 7. تخلص من السائل الطافي واخلط برفق لتفكيك الخلايا المترسبة. 8. أعد تعليق الخلايا في محلول التلوين (FBS) أو ما يعادله. 9. صبغ الخلايا وثبتها واجعلها نفاذة حسب الرغبة للتطبيقات اللاحقة. ملاحظات: 1. يجب على كل مستخدم تحديد التركيزات المثلى للكواشف والخلايا والظروف المناسبة للاختبار المطلوب. نوصي بمعايرة الكاشف في التجارب الأولية للحصول على أفضل النتائج. 2. يتم تثبيط تفاعل الصبغة الحرة بالغسل بمحلول يحتوي على بروتين (مثل FBS أو BSA). 3. يمكن صبغ الخلايا بكميات كبيرة قبل التجميد أو التلوين بالأجسام المضادة الفلورية. ٤. يمكن استخدام صبغة BD Horizon™ Fixable Viability Stain 780 في فحوصات التلوين داخل الخلايا التي تتطلب التثبيت بالفورمالديهايد والنفاذية بالميثانول والمنظفات، مثل تلك المستخدمة في تلوين BD Phosflow™ (مثلاً، رقم المنتج 558050، محلول BD Phosflow™ Perm Buffer III)، أو تلوين السيتوكينات داخل الخلايا (مثلاً، رقم المنتج 554714، مجموعة BD Cytofix/Cytoperm™ للتثبيت/النفاذية)، أو تلوين عوامل النسخ (مثلاً، رقم المنتج 562574/562725، مجموعة BD Pharmingen™ Transcription Factor Buffer Set). ٥. قد تُظهر الخلايا الميتة تباينًا في التلوين. نوصي بالتلوين المشترك، على سبيل المثال، باستخدام Annexin V FITC (رقم المنتج 556419) إذا رغبنا في إجراء المزيد من التحليلات على الخلايا الميتة. خطر: يُسبب تلفًا خطيرًا للعين. إرشادات السلامة: ارتدِ قفازات/ملابس واقية/واقي للعينين/واقي للوجه. في حال ملامسة العينين: اشطفهما جيدًا بالماء لعدة دقائق. أزل العدسات اللاصقة، إن وجدت وكان من السهل إزالتها. استمر في الشطف. اتصل فورًا بمركز مكافحة السموم/الطبيب. تخلص من المحتويات/العبوات في منشأة معالجة وتخلص مناسبة وفقًا للقوانين واللوائح المعمول بها، وخصائص المنتج وقت التخلص.
إشعارات المنتج: نظرًا لاختلاف التطبيقات، ينبغي على كل باحث معايرة الكاشف للحصول على أفضل النتائج. للاطلاع على أطياف الفلوركروم وإعدادات الجهاز المناسبة، يُرجى زيارة صفحة قياس التدفق الخلوي متعدد الألوان على موقعنا الإلكتروني www.bdbiosciences.com/colors. Cy هي علامة تجارية لشركة GE Healthcare. قبل التلوين بهذا الكاشف، يُرجى التأكد من قدرة جهاز قياس التدفق الخلوي على إثارة الفلوركروم وتمييز الفلورة الناتجة. يُرجى زيارة http://regdocs.bd.com للاطلاع على صحائف بيانات السلامة (SDS). يُرجى زيارة www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية.