BD، 565694، BD Horizon™ Fixable Viability Stain 575V

التطبيق: قياس التدفق الخلوي، التلوين داخل الخلايا (قياس التدفق الخلوي) (تم اختباره أثناء التطوير)
RRID: AB_2869702
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
إجراءات التحليل الموصى بها: التحضير: ضع مسحوق صبغة FVS575V و340 ميكرولتر من ثنائي ميثيل سلفوكسيد (DMSO؛ على سبيل المثال، Sigma D2650) الطازج والمخصص لزراعة الخلايا في درجة حرارة الغرفة. أضف 340 ميكرولتر من DMSO، ثم رجّ المحلول جيدًا. افحص المحلول وكرر الرجّ حتى تذوب الصبغة تمامًا. هذا هو المحلول الأصلي. التخزين: عند الاستلام، خزّن الصبغة الجافة في مكان جاف بعيدًا عن الضوء عند درجة حرارة -80 درجة مئوية حتى الاستخدام. بعد إذابتها في DMSO، خزّن المحلول الأصلي في درجة حرارة -20 درجة مئوية في أجزاء صغيرة. لا تستخدم الصبغة المُذابة بعد 90 يومًا من التخزين. يُرجى التخلص من محلول الصبغة بعد 90 يومًا من إذابتها في DMSO. متطلبات قياس التدفق الخلوي: يمكن استخدام أجهزة قياس التدفق الخلوي المزودة بليزر بنفسجي (مثل BD FACSCanto™ II أو BD LSRFortessa™ أو BD™ LSR II). يرجى ملاحظة أن صبغة FVS575V تُثار أيضًا بواسطة ليزر الأشعة فوق البنفسجية. يمكن قراءة هذه الصبغة باستخدام المرشحات الشائعة الاستخدام مع صبغة BD Horizon Brilliant Violet 605 (مثل 610/20) أو Pacific Orange (مثل 575/20). يُفضل استخدام عينة من الخلايا المراد فحصها لتحقيق أفضل تعويض للفلورة. عند تصميم لوحات كواشف التلوين متعددة الألوان، يُرجى مراعاة احتمال تداخل الألوان مع قناة BD Horizon BV510. يجب تحسين اللوحات لمراعاة هذا التداخل. نوصي بمعايرة الصبغة واستخدام أقل تركيز ممكن يوفر دقة كافية لتمييز الخلايا الحية والميتة لنوع الخلية المراد فحصها، وذلك للحد من التداخل. إجراء تلوين الخلايا باستخدام صبغة Fixable Viability Stain 575V: 1. تحضير الخلايا لتلوينها بتقنية قياس التدفق الخلوي باستخدام محاليل خالية من أزيد الصوديوم. 2. غسل الخلايا مرة واحدة في محلول Dulbecco's Phosphate Buffered Saline (1× DPBS) الخالي من أزيد الصوديوم والبروتين. 3. أعد تعليق الخلايا بتركيز 1-10×10^6 خلية/مل في محلول DPBS بتركيز 1× خالٍ من أزيد الصوديوم والبروتين. 4. أضف 1 ميكرولتر من محلول BD Horizon Fixable Viability Stain 575V لكل 1 مل من معلق الخلايا (1:1000) وقم بالخلط فورًا. ملاحظة: نوصي بمعايرة الصبغة للحصول على أفضل النتائج، حيث أن اختلاف أنواع الخلايا والتطبيقات قد يؤدي إلى تباين كبير في التلوين. 5. حضّن المزيج لمدة 10-15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة بعيدًا عن الضوء. اختياري: بدلاً من ذلك، حضّن المزيج عند 37 درجة مئوية لمدة 5-7 دقائق أو عند 2-8 درجات مئوية لمدة 30-60 دقيقة. 6. اغسل الخلايا مرتين باستخدام 2 مل من محلول BD Pharmingen™ Stain Buffer (FBS) (رقم المنتج 554656) أو ما يعادله. ٧. صب السائل الطافي واخلط برفق لتفكيك الخلايا المترسبة. ٨. أعد تعليق الخلايا في محلول التلوين (FBS) أو ما يعادله. ٩. لون الخلايا وثبتها واجعلها نفاذة حسب الحاجة للتطبيقات اللاحقة. ملاحظات: ١. يجب على كل مستخدم تحديد التركيزات المثلى للكواشف والخلايا والظروف المناسبة للاختبار المطلوب. نوصي بمعايرة الكاشف في التجارب الأولية للحصول على أفضل النتائج. ٢. يتم تثبيط تفاعل الصبغة الحرة بالغسل بمحلول يحتوي على بروتين (مثل FBS أو BSA). ٣. يمكن تلوين الخلايا بكميات كبيرة قبل التجميد أو التلوين بالأجسام المضادة الفلورية. ٤. يمكن استخدام صبغة BD Horizon Fixable Viability Stain 575V في فحوصات التلوين داخل الخلايا التي تتطلب التثبيت بالفورمالديهايد والنفاذية بالميثانول والمنظفات، مثل تلك المستخدمة في تلوين BD Phosflow™ (مثلاً، رقم المنتج 558050، محلول BD Phosflow Perm Buffer III)، أو تلوين السيتوكينات داخل الخلايا (مثلاً، رقم المنتج 554714، مجموعة BD Cytofix/Cytoperm™ للتثبيت/النفاذية)، أو تلوين عوامل النسخ (مثلاً، رقم المنتج 562574، مجموعة BD Pharmingen Transcription Factor Buffer Set). ٥. قد تُظهر الخلايا الميتة تباينًا في التلوين. نوصي بالتلوين المشترك باستخدام، على سبيل المثال، Annexin V APC (رقم المنتج 550475) أو Alexa Fluor® 647 Rabbit Anti-Active Caspase-3 (رقم المنتج 560626) إذا كانت هناك حاجة إلى مزيد من التحليل للخلايا الميتة.
إشعارات المنتج: نظرًا لاختلاف التطبيقات، ينبغي على كل باحث معايرة الكاشف للحصول على أفضل النتائج. للاطلاع على أطياف الفلوركروم وإعدادات الجهاز المناسبة، يُرجى زيارة صفحة قياس التدفق الخلوي متعدد الألوان على موقعنا الإلكتروني www.bdbiosciences.com/colors. Alexa Fluor® علامة تجارية مسجلة لشركة Molecular Probes, Inc.، يوجين، أوريغون. قبل التلوين بهذا الكاشف، يُرجى التأكد من قدرة جهاز قياس التدفق الخلوي على إثارة الفلوركروم وتمييز الفلورة الناتجة. يُرجى زيارة http://regdocs.bd.com للاطلاع على صحائف بيانات السلامة (SDS). يُرجى زيارة www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية.