BD، 565799، صبغة الأحماض النووية الخضراء BD Via-Probe™

التطبيقات: قياس التدفق الخلوي، الكيمياء المناعية الخلوية، التألق المناعي، التلوين داخل الخلايا (قياس التدفق الخلوي) (تم اختباره أثناء التطوير)
التركيز: 5 ملي مول
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
التحضير والتخزين: يُحفظ في درجة حرارة -20 درجة مئوية، بعيدًا عن الضوء. تجنب تجميد المنتج وإذابته عدة مرات.
إجراءات التحليل الموصى بها: يرجى الملاحظة: تم تطوير صبغة الحمض النووي هذه لتطبيقات قياس التدفق الخلوي (داخل الخلايا) والمجهر المناعي الفلوري. ونظرًا لتوصيفها الكيميائي لضمان الاتساق، ينبغي على الباحثين تحديد التركيز الأمثل لهذا الكاشف لكل تطبيق على حدة. تلوين الخلايا الحية لتحليل حيويتها باستخدام قياس التدفق الخلوي: 1. الحصول على معلق خلوي أحادي. 2. إعادة تعليق الخلايا بتركيز 1-2 × 10^6 خلية/مل في محلول التلوين BD Pharmingen™ (FBS) (رقم المنتج 554656) أو محلول DPBS بتركيز 1× يحتوي على 5-20 نانومول من صبغة BD Via-Probe™ Green. أ. قد يختلف التركيز الأمثل لصبغة BD Via-Probe™ Green لتحليل الحيوية باختلاف نوع الخلية. قد يؤدي استخدام تراكيز عالية إلى دخول الصبغة إلى الخلايا الحية. لذلك، نوصي بمعايرة الكاشف لنوع الخلية المراد تحليلها في التجارب الأولية. ب. بالإضافة إلى ذلك، قد تتلون الخلايا الميتة بكميات متفاوتة من الصبغة. نوصي بالتلوين المشترك باستخدام مسبار للخلايا الميتة، مثل BD Horizon™ BV421 Annexin V (رقم المنتج 563973)، إذا رغبنا في إجراء تحليل إضافي للخلايا الميتة. 3. حضّن الخلايا والصبغة لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة بعيدًا عن الضوء. لا حاجة لغسل الخلايا مرة أخرى قبل التحليل. 4. تابع التحليل باستخدام قياس التدفق الخلوي. تلوين الخلايا المثبتة لتحليل محتوى الحمض النووي باستخدام قياس التدفق الخلوي: 1. احصل على معلق خلوي أحادي. 2. عالج الخلايا على الجليد لمدة 30 دقيقة باستخدام إيثانول بارد بنسبة 70-80%. أ. يوفر التثبيت بالإيثانول عادةً أكثر مخططات توزيع الحمض النووي وضوحًا. ومع ذلك، فقد استُخدم هذا الكاشف بنجاح أيضًا لتحليل محتوى الحمض النووي باستخدام بروتوكول مجموعة BD Pharmingen™ Transcription Factor Buffer Set (رقم المنتج 562574/562725). 3. اغسل الخلايا مرة واحدة بمحلول BD Pharmingen™ Stain Buffer (FBS). 4. أعد تعليق الخلايا بتركيز 1-2 × 10^6 خلية/مل في محلول BD Via-Probe™ Green بتركيز 0.1-1 ميكرومولار، بوجود 0.1-0.5 ملغم/مل من إنزيم RNAse الخالي من DNAse (مثل Sigma Aldrich، رقم المنتج D6513) المخفف في محلول BD Pharmingen™ Stain Buffer (FBS) أو محلول DPBS بتركيز 1×، مباشرةً قبل الاستخدام. أ. قد يختلف تركيز الخلايا الأمثل وتركيز BD Via-Probe™ Green لتحليل محتوى الحمض النووي باختلاف نوع الخلية. ينبغي تحسين ظروف التحليل في التجارب الأولية للحصول على أفضل النتائج. 5. حضّن الخلايا لمدة 5-15 دقيقة. لا حاجة لغسل الخلايا مرة أخرى قبل التحليل. 6. ابدأ التحليل باستخدام قياس التدفق الخلوي. ينبغي تشغيل العينات بمعدل تدفق منخفض لتحقيق أفضل النتائج. قد تؤدي معدلات التدفق العالية إلى زيادة معامل التباين (CV%) لكل جزء من دورة الخلية في مخطط توزيع الحمض النووي. التلوين المناعي الفلوري للخلايا المثبتة لتصوير النواة: 1. ثبّت الخلايا واجعلها نفاذة حسب الرغبة. 2. خفف محلول BD Via-Probe™ Green إلى تركيز 0.1-1 ميكرومتر في محلول DPBS بتركيز 1× مع إضافة 0.1-0.5 ملغم/مل من إنزيم RNase الخالي من DNase (مثل Sigma Aldrich، رقم المنتج D6513) مباشرةً قبل الاستخدام. 3. أضف محلول BD Via-Probe™ Green إلى كل عينة قبل 15 دقيقة على الأقل من التحليل. 4. انتقل إلى الفحص المجهري الفلوري وتحليل الصور.
إشعارات المنتج: يُرجى مراجعة www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية. Triton هي علامة تجارية لشركة Dow Chemical. FlowJo هي علامة تجارية لشركة Tree Star Inc. Alexa Fluor® هي علامة تجارية مسجلة لشركة Molecular Probes, Inc.، يوجين، أوريغون.