BD، 565878، BD Pharmingen™ Fluo-4 AM

التطبيق: قياس التدفق الخلوي (تم اختباره أثناء التطوير)
RRID: AB_2869724
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
إجراءات التحليل الموصى بها: التحضير: اترك مسحوق صبغة Fluo-4 AM وثنائي ميثيل سلفوكسيد اللامائي حتى يصل إلى درجة حرارة الغرفة. أضف 9 ميكرولتر من ثنائي ميثيل سلفوكسيد إلى مسحوق الصبغة ورج المحلول جيدًا. افحص المحلول وكرر الرج حتى تذوب الصبغة تمامًا. ينتج عن ذلك محلول مركز بتركيز 5 ملي مولار. التخزين: عند الاستلام، خزّن الصبغة الجافة في مكان جاف بعيدًا عن الضوء عند درجة حرارة -20 درجة مئوية حتى الاستخدام. نوصي باستخدام قارورة صبغة جديدة لكل تجربة والتخلص من الصبغة المُعاد تكوينها بعد الاستخدام. مع ذلك، إذا كنت ستحتفظ بالمحاليل المركزة للاستخدام، فيجب تخزينها في مكان جاف بعيدًا عن الضوء عند درجة حرارة -20 درجة مئوية واستخدامها في غضون أسبوع واحد من إعادة تكوينها. متطلبات قياس التدفق الخلوي: يمكن استخدام أجهزة قياس التدفق الخلوي المزودة بليزر أزرق (مثل 488 نانومتر) (مثل BD Accuri™ C6، أو BD LSRFortessa™، أو BD LSRFortessa™ X-20، أو BD™ LSR II). يمكن قراءة هذا الصبغ باستخدام المرشحات الشائعة الاستخدام لصبغة FITC أو Alexa Fluor® 488 (مثل 530/30). يُفضل استخدام عينة من الخلايا المراد فحصها مصبوغة بهذا الصبغ لتحقيق أفضل تعويض للفلورة. عند تصميم لوحات متعددة الألوان، يُرجى مراعاة تداخل الصبغة مع قنوات PE وBD Horizon™ PE-CF594 على الليزر الأزرق. إذا كان ذلك متاحًا، فقد يكون من المفيد جمع هذه الصبغات الفلورية باستخدام ليزر أصفر-أخضر (مثل 561 نانومتر) لتجنب تداخل صبغة Fluo-4 AM. يجب تحسين اللوحات لمراعاة هذا التداخل. إجراء وسم الخلايا بصبغة BD Pharmingen™ Fluo-4 AM: 1. تحضير معلق خلوي أحادي بتركيز 1×10⁶ خلية/مل في محلول التحميل الفيزيولوجي المختار. • في حال استخدام المصل في محلول التحميل، يجب تعطيله بالحرارة لمنع نشاط إستراز المصل المتبقي من فصل جزيئات AM على الصبغة قبل دخولها إلى الخلايا. ٢. أضف محلول الصبغة المركز للحصول على تركيز نهائي للتلوين يتراوح بين ١ و ٥ ميكرومتر، ثم قم بالخلط فورًا. • نوصي باستخدام أقل تركيز للصبغة يُعطي إشارة كافية لتجنب سمية الصبغة، وتوزعها داخل الخلايا، وتثبيط الكالسيوم. ٣. حضّن لمدة ١٥ إلى ٦٠ دقيقة عند ٣٧ درجة مئوية. • يُذكر أن توزع الصبغة داخل الخلايا يكون أقل وضوحًا عند درجات حرارة التحميل المنخفضة. في هذه الحالة، قد يكون من المفيد تحميل الخلايا في درجة حرارة الغرفة إذا كان توزع الصبغة داخل الخلايا ملحوظًا لنوع الخلية المراد دراستها. ٤. اغسل الخلايا مرة واحدة، ثم أعد تعليقها في محلول التحليل المختار. • بالنسبة لبعض أنواع الخلايا، قد يكون من المفيد حضانة الخلايا لمدة ٣٠ دقيقة إضافية للسماح بإزالة مجموعة الإستر من جزيئات AM بشكل كامل. في هذه الحالة، يجب حضانة الخلايا في محلول فسيولوجي مختار أو وسط كامل، ثم غسلها مرة أخرى، ثم إعادة تعليقها في محلول التحليل المختار. ٥. انتقل إلى قياس التدفق الخلوي.
إشعارات المنتج: Alexa Fluor® علامة تجارية مسجلة لشركة Molecular Probes, Inc.، يوجين، أوريغون. قبل التلوين بهذا الكاشف، يُرجى التأكد من قدرة جهاز قياس التدفق الخلوي على إثارة الفلوركروم وتمييز الفلورة الناتجة. للاطلاع على أطياف الفلوركروم وإعدادات الجهاز المناسبة، يُرجى زيارة صفحة قياس التدفق الخلوي متعدد الألوان على موقعنا الإلكتروني www.bdbiosciences.com/colors. للاطلاع على البروتوكولات الفنية، يُرجى زيارة www.bdbiosciences.com/us/s/resources. نظرًا لاختلاف التطبيقات، ينبغي على كل باحث معايرة الكاشف للحصول على أفضل النتائج.