BD، 566332، صبغة بي دي هورايزون™ القابلة للتثبيت 440UV

التطبيق: قياس التدفق الخلوي، التلوين داخل الخلايا (قياس التدفق الخلوي) (تم اختباره أثناء التطوير)
RRID: AB_2869748
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
إجراءات التحليل الموصى بها: التحضير: ضع مسحوق صبغة FVS440UV و363 ميكرولتر من ثنائي ميثيل سلفوكسيد (DMSO؛ على سبيل المثال، Sigma D2650) الطازج المستخدم في زراعة الخلايا في درجة حرارة الغرفة. أضف 363 ميكرولتر من DMSO ورج المحلول جيدًا. افحص المحلول وكرر الرج حتى تذوب الصبغة تمامًا. هذا هو المحلول الأصلي. التخزين: عند الاستلام، خزّن الصبغة الجافة في مكان جاف بعيدًا عن الضوء عند درجة حرارة -80 درجة مئوية حتى الاستخدام. بعد إذابتها في DMSO، خزّن المحلول الأصلي في درجة حرارة -20 درجة مئوية في أجزاء صغيرة. لا تستخدم الصبغة المُذابة بعد 90 يومًا من التخزين. يُرجى التخلص من محلول الصبغة بعد 90 يومًا من إذابتها في DMSO. متطلبات قياس التدفق الخلوي: يمكن استخدام أجهزة قياس التدفق الخلوي المزودة بليزر فوق بنفسجي (مثل BD LSRFortessa™، أو BD LSRFortessa™ X-20، أو BD™ LSR II). يمكن قراءة هذا الصبغ من المرشحات الشائعة الاستخدام مع صبغات DAPI أو Hoechst (مثل 450/50). يتوافق هذا الصبغ أيضًا مع مجموعات المرشحات المخصصة لجهاز BD Horizon™ BUV395 (مثل 379/28)، مع العلم أنه قد يلزم استخدام كمية أكبر من الصبغ لتحقيق نفس الدقة. راجع قسم "الإجراء" لمزيد من المعلومات. يُفضل استخدام عينة من الخلايا المراد قياسها مصبوغة بصبغة FVS440UV لتحقيق أفضل تعويض للفلورة. عند تصميم لوحات متعددة الألوان، يُرجى مراعاة تداخل الألوان في قناتي BD Horizon™ BV421 وAPC. يجب تحسين اللوحات لمراعاة هذا التداخل. نوصي بمعايرة الصبغ واستخدام أقل تركيز ممكن يوفر دقة كافية لتمييز الخلايا الحية والميتة لنوع الخلية المراد قياسها، وذلك للحد من تداخل الألوان. إجراء تلوين الخلايا باستخدام صبغة حيوية قابلة للتثبيت عند 440 درجة مئوية (440UV): 1. تحضير الخلايا لتلوينها بتقنية قياس التدفق الخلوي باستخدام محاليل خالية من أزيد الصوديوم. 2. غسل الخلايا مرة واحدة في محلول دولبيكو الملحي الفوسفاتي (DPBS) الخالي من أزيد الصوديوم والبروتين (1×). 3. إعادة تعليق الخلايا بتركيز 1-10 × 10^6 خلية/مل في محلول DPBS (1×) الخالي من أزيد الصوديوم والبروتين. 4. إضافة 1 ميكرولتر من محلول BD Horizon™ Fixable Viability Stain 440UV المركز لكل 1 مل من معلق الخلايا (1:1000) مع الخلط الفوري. أ. ملاحظة: نوصي بمعايرة الصبغة للحصول على أفضل النتائج، حيث أن اختلاف أنواع الخلايا والتطبيقات قد يؤدي إلى تباين كبير في التلوين. ب. ملاحظة: إذا كان سيتم تحليل الصبغة باستخدام مجموعة مرشحات BD Horizon BUV395 (مثل مرشح تمرير النطاق 379/28)، فنوصي باستخدام ما لا يقل عن 2-4 ميكرولتر لكل 1 مل من معلق الخلايا كنقطة بداية للمعايرة. 5. حضّن المزيج لمدة 10-15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة بعيدًا عن الضوء. أ. اختياري: بدلاً من ذلك، حضّن المزيج عند 37 درجة مئوية لمدة 5-7 دقائق أو عند 2-8 درجة مئوية لمدة 30-60 دقيقة. 6. اغسل الخلايا مرتين باستخدام 2 مل من محلول التلوين BD Pharmingen™ (FBS) (رقم المنتج 554656) أو ما يعادله. 7. تخلص من السائل الطافي واخلط برفق لتفكيك راسب الخلايا. 8. أعد تعليق الخلايا في محلول التلوين (FBS) أو ما يعادله. 9. لوّن الخلايا وثبّتها واجعلها نفاذة حسب الرغبة للتطبيقات اللاحقة. ملاحظات: ١. يجب على كل مستخدم تحديد التركيزات المثلى للكواشف والخلايا والظروف المناسبة للتحليل المطلوب. نوصي بمعايرة الكاشف في التجارب الأولية للحصول على أفضل النتائج. ٢. يتم تثبيط تفاعل الصبغة الحرة بالغسل بمحلول منظم يحتوي على بروتين (مثل مصل بقري جنيني أو ألبومين مصل البقر). ٣. يمكن تلوين الخلايا بكميات كبيرة قبل التجميد أو التلوين بالأجسام المضادة الفلورية. ٤. يمكن استخدام صبغة BD Horizon™ Fixable Viability Stain 440UV في فحوصات التلوين داخل الخلايا التي تتطلب التثبيت بالفورمالديهايد والنفاذية بالميثانول والمنظفات، مثل تلك المستخدمة في تلوين BD Phosflow™ (مثل محلول BD Phosflow™ Perm Buffer III، رقم المنتج ٥٥٨٠٥٠)، أو تلوين السيتوكينات داخل الخلايا (مثل مجموعة BD Cytofix/Cytoperm™ Fixation/Permeablization Kit، رقم المنتج ٥٥٤٧١٤)، أو تلوين عوامل النسخ (مثل مجموعة BD Pharmingen™ Transcription Factor Buffer Set، رقم المنتج ٥٦٢٥٧٤). ٥. قد تُظهر الخلايا الميتة تباينًا في التلوين. نوصي بالتلوين المشترك باستخدام، على سبيل المثال، Annexin V FITC (رقم المنتج 556419) أو Alexa Fluor® 647 Rabbit Anti-Active Caspase-3 (رقم المنتج 560626) إذا كانت هناك حاجة إلى مزيد من التحليل للخلايا الميتة.
ملاحظات المنتج: نظرًا لاختلاف التطبيقات، ينبغي على كل باحث معايرة الكاشف للحصول على أفضل النتائج. للاطلاع على أطياف الفلوركروم وإعدادات الجهاز المناسبة، يُرجى زيارة صفحة قياس التدفق الخلوي متعدد الألوان على موقعنا الإلكتروني www.bdbiosciences.com/colors. قبل التلوين بهذا الكاشف، يُرجى التأكد من قدرة جهاز قياس التدفق الخلوي على إثارة الفلوركروم وتمييز الفلورة الناتجة. للاطلاع على البروتوكولات الفنية، يُرجى زيارة www.bdbiosciences.com/us/s/resources.